Characterization of a baculovirus expression vector for producing an universal vaccine against human common cold virus

Motivation: Human rhinovirus (HRV) is the primary etiologic agent of the common cold, which triggers approximately 50% of asthma and chronic obstructive pulmonary diseases. Direct and indirect costs associated to the common cold are approximately $50B per year only in the USA. Therefore, a vaccine decreasing the incidence of common cold is needed and has got a big potential market. The main challenges for developing a vaccine are: the high variety of virus serotypes and the need of a reliable and economically sustainable manufacturing process. HRV has an icosahedral capsid consists of 60 copies of the four structural proteins VP1, VP2, VP3 and VP4 (1). Bionaturis' partner in Maryland (USA) has modified the sequence of the structural proteins in order to raise universal immunity. Bionaturis is optimizing a method of manufacturing of a recombinant vaccine based on viral-like particles (VLPs) of the universal version of HRV. Methods: For manufacturing the HRV-VLPs, Bionaturis is using its proprietary platform FLYLIFE, which consists in using lepidopteran larvae as biofactories taking advantage of the baculovirus expression technology. This type of manufacturing is more flexible and economically sustainable than traditional expression systems based on cell fermentors. The first part of the manufacturing process is to produce and characterize the working viral bank (WVB), i.e. a recombinant baculovirus able to accumulate the protein of interest when it infects lepidopteran larvae (2). Subsequently, the larvae are infected and harvested for purification of the HRV-VLPs. The product of interest is analyzed using techniques of basic proteomics like SDS-PAGE and immunodetection by Western blot.Results: The WVB was successfully produced by cotransfection of insect cells Sf21 of Spodoptera frugiperda ovary with Bionaturis' Master Viral DNA based on the genome of the baculovirus AcMNPV (Autographa californica) and a transfer vector containing the expression cassette for making the HRV-VLPs (3). The purity and identity of the WVB generated was characterized by using genomic and proteomic techniques, certifying adequacy of its use for manufacturing HRV-VLPs in Bionaturis' FlyLife platform. Conclusions: Flylife is a good candidate platform for manufacturing of a universal vaccine against human rhinovirus, combining aimed properties like lower capital investment, less space, and greater biological safety

Preparación y caracterización de un vector de expresión baculorívico para la producción de vacuna contra el virus de la viremia primaveral de la carpa

Motivación: La viremia primaveral de la carpa es una enfermedad infecciosa producida por un rhabdovirus (SVCV). Produce un cuadro contagioso de septicemia con hemorragias en diferentes órganos en varias especies de peces ciprínido de interés en acuicultura. El cultivo en alta densidad de peces provoca un aumento significativo de patógenos. La incidencia de la viremia primaveral de la carpa provoca pérdidas significativas en las regiones dedicadas a la cría de cirprinidos. Por tanto, el sector demanda una solución preventiva que podría consistir en el desarrollo de una vacuna eficaz y cuya producción sea económicamente sostenible para el sector de la acuicultura.Métodos: La empresa biotecnológica Bionaturis propone la producción sostenible de principios activos biológicos utilizando como biofactorías larvas de lepidóptero y como vector de expresión baculovirus. Entre los productos con interés comercial se plantea producir una formulación para la vacunación de peces conteniendo como principio activo la glicoproteína G de la envuelta del virus SVCV. En este proyecto se ha producido y caracterizado un baculovirus recombinante capaz de producir la acumulación del producto de interés mediante la infección de larvas de lepidóptero(2). De esta forma, se reducen considerablemente los costes que suponen los sistemas tradicionales de expresión basados en tanques de células en suspensión. Posteriormente, las larvas son procesadas y mediante las técnicas de proteómica básica como inmunodetección mediante western-blot, SDS-PAGE,y el material resultante se utilizaría para tratar a las carpas frente a SVCV.Resultados: Se realizó con éxito una contrasfección en células de insecto de la línea Sf21 de ovario de Spodoptera Frugiperda (3), para transferir la secuencia de interés desde el vector de trasnferencia pLV1392, al genoma del baculovirus AcMNPV (virus de Autógrapha califórnica)(1), y de esta forma, crear el virus de trabajo o Working Viral Bank (WVB).Tras la producción del banco de baculovirus se caracterizó la pureza e identidad del mismo mediante técnicas de genómica y proteómica, certificando la adecuación de su uso para producción de lotes de la vacuna en la plataforma de BionaturisConclusiones: Flylife, es una buena plataforma para la expresión de la proteína G. Dicha proteína induce la protección en las carpas frente al SVCV

Problemas resueltos de genética en acuicultura

El libro que se presenta está enfocado a resolver cuestiones prácticas y casos concretos planteados durante el cultivo y mejora de organismos de interés en Acuicultura. Se ha pensado como un soporte práctico a la asignatura Genética en Acuicultura de la Licenciatura en Ciencias del Mar pero puede ser de interés también para otras asignaturas relacionadas con la Genética y para otras Titulaciones (Ciencias Biológicas, Veterinaria, Tecnología de Alimentos, Medio Ambiente, etcétera)