Estudio de tolerancia local de un candidato vacunal proteoliposómico contra Leptospira SPP en el biomodelo Mesocricetus Auratus (Study of local tolerance of a proteoliposome vaccine candidate against Leptospira SPP in Mesocricetus Auratus as biomodel)

La leptospirosis es una de las zoonosis bacterianas más difundidas en el mundo. En la actualidad existen registradas varias vacunas de células enteras contra Leptospira. Estos productos biofarmacéuticos cuentan entre sus desventajas las reacciones de hipersensibilidad a los componentes de las formulaciones y la alta frecuencia de toxicidad en el sitio de inoculación. En el presente trabajo fue evaluada la tolerancia local en el punto de inoculación generada por una nueva formulación vacunal proteoliposómica contra Leptospira spp. en el biomodelo el Mesocricetus auratus. Para ello los animales (ambos sexos) fueron inoculados dos veces por vía intramuscular, con 21 días entre la primera y la segunda inoculación. Seguidamente se realizaron eutanasias seriadas a los 3 días y luego semanalmente hasta 49 días de la primera inoculación. Los resultados demostraron la ausencia de muertes y de diferencias estadísticas en las variables: peso corporal, consumo de agua y alimentos entre animales inmunizados y controles negativos. Tampoco se detectaron lesiones macroscópicas en órganos y tejidos de importancia toxicológica en los animales inmunizados con el candidato vacunal. Las lesiones locales encontradas obedecen a la respuesta inmunológica generada por esta nueva formulación vacunal. La relevancia inmunológica del biomodelo se comprobó mediante la determinación de anticuerpos IgG en el grupo de animales vacunados. En función de los resultados obtenidos se concluye que el candidato vacunal evaluado no fue potencialmente tóxico al sitio de inoculación al ser administrado por vía intramuscular en el biomodelo Mesocricetus auratus. AbstractLeptospirosis is the bacterial zoonosis more overspread in the world. As a control measure some whole cell vaccines has been developed and registered. These biopharmaceutical products have as principal disadvantages the absence of cross-protection against serovars not included on formulations and reactogenicity at inoculation site. In this paper it is discussed the local toxicity at inoculation site elicited by a proteoliposome vaccine candidate obtained form outer membrane cell wall of Leptospira spp using the Mesocricetus auratus as biomodel. The experimental animals (both sexes) were inoculated with two doses of vaccine candidate (21 days between them) via intramuscular. The results obtained did not show statistical differences among immunized and animal controls for the variables: corporal weight, water and food intake. Neither macroscopic lesions of toxicological importance were observed. The histopathological findings describes are part of immunological response consequence against vaccine candidate. Besides the immunological relevance of the biomodel was check by means of IgG quantification. Agreement with these results, it can conclude that a single dose of the vaccine candidate immunized via intramuscular in Mesocricetus auratus did not show toxic potential at inoculation site

Frecuencia espontánea e inducida de micronúcleos transplacentarios en ratones Balb/c

Introducción: El ensayo de micronúcleos transplacentario, ha sido desarrollado con el objetivo de evaluar el potencial genotóxico en la descendencia y demostrar la capacidad de un agente de causar daños cromosómicos durante el período prenatal. Éste realiza el registro de aberraciones cromosómicas, demostrando si una sustancia determinada puede ser clastogénica o aneugénica en el feto, a través de la exposición materna. Objetivo: Por lo cual en el presente trabajo se tuvo como objetivo determinar la frecuencia espontánea e inducida de micronúcleos transplacentarios en ratones de la línea Balb/c. Pretendiendo vincular de esta forma el efecto genotóxico y reproductivo de una droga a evaluar por esta metodología. Materiales y métodos: Se formaron 4 grupos experimentales, el primero un control negativo (simulacro), el segundo control solvente NaCl (0,9%), en el tercero se utilizo la ciclofosfamida en dosis de 50 mg/kg, y el cuarto se utilizó la bleomicina en dosis de 20 mg/kg. Todos los grupos se administraron por vía intraperitoneal los días 14, 15 y 16 de la gestación y 24 h después de la última inoculación se procedió al sacrificio de las gestantes por dislocación cervical. Obteniéndose las muestras de médula ósea materna e hígado fetal. Resultados: Se obtuvo como resultado los valores espontáneos e inducidos de los índices de citotoxicidad y de genotoxicidad, así como el total de micronúcleos divididos según niveles de daños.Discusión y conclusiones: Se observo mayor inducción de daño en células hepáticas fetales que en médula ósea materna. Además se demostró que la ciclofosfamida es capaz de inducir mayor citotoxicidad y genotoxicidad que la bleomicina tanto en células de la médula ósea materna como en células hepáticas fetales. Por tanto se demostró el poder clastogénico transplacentario de ambos mutágenos vinculando este ensayo de genotoxicidad a la reproducción. Además estos resultados se pudieran utilizar en la evaluación de nuevas drogas con carácter antigenotóxico por vía transplacentaria

Evaluación de formulaciones inmunoterapéuticas experimentales en el modelo hibrido murino de Reaccion del Injerto contra el Hospedador

Introduction: Graft-versus-host disease is the most frequent complication of Hematopoietic Stem Cell Transplants and all transplants containing allogeneic immunocompetent cells; 100% of patients suffer from this complication and about 30% die for this particular cause. A high proportion of cases are steroid-refractory; likewise, other modern immunosuppressive measures fail. In the fields of Immunotherapy and Vaccinology, there is also a worrying shortage of powerful, effective, safe and broad spectrum immunomodulators of biological origin. There is a hybrid murine model of great methodological utility for experimental studies.Objective: To evaluate two novel formulations of biotechnological origin: an immunopotentiator formulation and an immunosuppressive one, which were developed as cochleates.Material and Methods: The formulations assayed by Electron Microscopy and RT-PCR were characterized as nanoparticles and for their capacity to regulate lymphokine mRNA expression profile, respectively.  The immunomodulatory character was evaluated in vivo using Graft-versus-host disease in (CBAxC57BL) F1 hybrid mice.Results: Starting from the proteoliposomes derived from Neisseria meningitides, two cochleate formulations were obtained, both with particle diameters below 100 nm. Formulation 1 showed a proinflammatory profile with potent capacity to increase IFNγ and TNFα, and potentiated the Spleen Index up to 2.05 in the GVDH model with p = 0.0002. Formulation 2 showed a suppressor/regulatory profile with potent capacity to increase IL-10 and TGFβ and suppress the production of TNFα. In the model used, this formulation suppressed the Spleen Index in a dose-dependent manner with high statistical significance. The known safety profile and absence of reactogenicity of both formulations was corroborated.Conclusions: Both formulations have potential application in the fields of GVHD therapy and other pathologies as well as in Vaccinology.  The results obtained in the present work suggest the usefulness to continue with the pharmaceutical development and complete the preclinical studies of both formulations.Introducción: La Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador es la complicación más frecuente de los Trasplantes de Células Madre Hematopoyéticas y de todos los trasplantes que contengan células inmunocompetentes alogénicas, el 100 % la padecen y cerca del 30 % mueren por su causa; una proporción alta de casos son esteroide-refractarios, asimismo otras medidas inmunosupresoras modernas fracasan. En los campos de la Inmunoterapia y la Vaccinología también existe una escasez preocupante de inmunomoduladores de origen biológico potentes, efectivos, seguros y de amplio espectro. Existe un modelo híbrido murino de gran utilidad metodológica para estudios experimentales.Objetivo: Evaluar dos formulaciones novedosas de origen biotecnológico, una de ellas inmunopotenciadora y otra inmunosupresora, desarrolladas como cocleatos.Material y Métodos: Mediante Microscopia Electrónica y RT-PCR se caracterizaron las formulaciones como nanopartículas y su capacidad de regular la expresión del ARNm de linfoquinas definitorias de sus perfiles, respectivamente. Empleando el modelo de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en ratón híbrido F1 (CBAxC57BL), se evaluó su carácter inmunomodulador in vivo.Resultados: Partiendo de los proteoliposomas de Neisseria meningitidis, se obtuvieron dos formulaciones en forma de cocleatos, ambas con diámetros de partícula inferior a 100nm. La Formulación 1mostró un perfil proinflamatorio con potente capacidad de aumentar el IFNγ y el TNFα y potenció el Índice de Bazo hasta 2,05 en el modelo EICH con p=0,0002. La Formulación 2 mostró un perfil supresor-regulatorio con potente capacidad de aumentar la IL-10 y el TGFβ y además de suprimir la producción de TNFα. En el modelo usado, esta formulación, suprimió el Índice de Bazo de manera dosis dependiente y con alta significación estadística. Se corroboró el conocido perfil de seguridad y ausencia de reactogenicidad de ambas formulaciones.Conclusiones: Ambas formulaciones tienen potencial aplicación en los campos de la terapia de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en otras patologías y en Vaccinología. Los resultados obtenidos en el presente trabajo fundamentan la conveniencia de continuar el desarrollo farmacéutico y completar la preclínica de ambas formulaciones

Biomodel for evaluating attenuated Vibrio cholerae strains as human cholera vaccine candidates. Study of toxigenicity, immunogenicity and protection

In many countries, Cholera remains being a problem for human health, since it continues being an epidemic or endemic disease, which affects either children or adults and it is a death cause when cholera cases are not treated. A live oral vaccine against this disease can contribute to control important epidemics, mainly at countries where the sanitary hygienic conditions are not good or drinking water is not available. In this work, bio models were selected and applied for the selection of genetically attenuated Vibrio cholerae strains as vaccine candidates against cholera. Their toxigenicity, immunogenicity and protection were evaluated by means of Ileal Loops, intraduodenal inoculation and RITARD models in F1 (New Zealand x White Semi giant) young adults rabbits weighing from 1.8 to 2.3 kg. The results obtained with the used bio models, show that the Vibrio cholerae genetically attenuated strains are no toxigenic, but are immunogenic and protective. As conclusion, these bio models are available for the evaluation and selection of oral vaccine candidates

Estudio de tolerancia local de la vacuna vax-TyVi® en ratas Sprague Dawley

La vacuna antitifoídica vax-TyVi® consiste en una preparación de polisacárido capsular Vi de Salmonella typhi, el cual es diluido en una solución buffer isotónica solución amortiguador, a la que se le añade fenol como preservo. Cada dosis de 0,5 mL contiene 25 μg de polisacárido como sustancia activa. En nuestro país el esquema de vacunación contra la fiebre tifoidea con vax- TyVi® se aplica a los alumnos de 9-10 años (5to grado), una 2da dosis a la edad de 12-13 años (8vo grado) y una 3ra dosis a la edad de 16-17 años (11no grado). Además, es vacunado el personal de riesgo de Salud Pública y el personal que manipula alimentos. En el presente trabajo se describe el ensayo de tolerancia local llevado a cabo con la vacuna vax-TyVi® durante su fase de estudios preclínicos, actualmente utilizada en la vacunación contra la fiebre tifoidea en Cuba. Se empleó un total de 170 ratas que fueron tratadas con la vacuna, su placebo (todos los componentes, excepto la materia prima activa), o que no recibieron tratamiento alguno (controles). Se realizaron observaciones clínicas diarias durante todo el ensayo, se determinó el consumo de agua y alimentos y se realizaron investigaciones anatomopatológicas a animales sacrificados 3, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 días después de la inoculación. No se observaron muertes ni síntomas de toxicidad; no se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los pesos vivos, el consumo de agua ni el de alimentos entre los grupos del ensayo. Tampoco se observaron lesiones anatomopatológicas que indicaran toxicidad por parte del producto inoculado. Los resultados permitieron concluir que la potencialidad de la vacuna vax-TyVi® para producir efectos adversos locales es baja