Etude comparative de différents vaccins codant pour la protéine non structurale 3 (ns3) du virus de l'hépatite C

L'infection par le virus de l'Hépatite C conduit fréquemment à une hépatite chronique pouvant évoluer vers un carcinome hépatocellulaire et n'est soignable que dans 40-50% des cas. Le développement d'un vaccin s'avère donc nécessaire mais se heurte à la méconnaissance des corrélats immunitaires de protection et à l'impossibilité d'utiliser des vaccins conventionnels du fait de l'absence de systèmes de réplication disponibles in vitro et in vivo. L'objectif de cette thèse a été d'évaluer à partir de vaccins génétiques et de vecteurs viraux, l'immunogénicité de la protéine non structurale 3 (NS3), impliquée dans la réplication mais également dans l' élimination virale au cours de l'infection naturelle. Pour cela, l'induction d'une réponse cellulaire médiée par les lymphocytes T CD8+ dirigée contre des épitopes décrits dans l'infection naturelle a été testée dans un modèle de souris transgéniques pour la molécule HLA-A2.1. Les vaccins génétiques testés avaient pour objectifs : 1) d'exprimer NS3 sous le contrôle du promoteur du cytomégalovirus (pCI.NS3) ou du réplicon du virus de la forêt de Semliki (SFV) (pSFV.NS3) ou 2) de la cibler au niveau des compartiments riches en molécules de classe II (pLAMP.NS3). Nos résultats ont montré que ces vecteurs, quelle que soit leur nature, ont conduit à l'induction de réponses spécifiques de longue durée mais restreintes à un épitope (sur 4) (aa 1073-1081), la réponse la plus vigoureuse étant obtenue avec le vecteur pCI.NS3. L'expression de la protéine NS3 sous forme de particules virales dérivées du SFV (rSFV.NS3) injectées seules ou en combinaison avec pCI.NS3 n'ont ni permis d'élargir, ni d'accroître la vigueur de cette réponse. La présence du plasmide pCI.NS3 dans le contexte d'une vaccination combinée avec des protéines recombinantes réalisée chez le chimpanzé semble, néanmoins, confirmer un rôle protecteur de la réponse anti-NS3. Globalement, l'ensemble de nos travaux indiquent que de nouvelles stratégies vaccinales doivent être développées afin de potentialiser la réponse anti-NS3.LYON1-BU Santé (693882101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Identification de nouveaux Epitotes T et de la protéine non strcturale 3 du virus de l'hépatite C et développement d'un candidat vaccin mini-génique

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Propriétés immunomodulatrices des protéines Core et ARFP du virus de l'hépatite C sur les cellules de la lignée monocytaire

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Étude des intéractions entre le virus de l'Hépatite C et les cellules dendritiques circulantes

L'infection par le virus de l'Hépatite C (VHC) se caractérise par une forte évolution vers la chronicité qui semble associée à un défaut de la réponse immunitaire spécifique. Nous avons voulu tester si ce défaut pourrait être dü à un dysfonctionnement des cellules dendritiques (DC). Pour cela, nous avons évalué 1) la présence de séquences virales du VHC au sein des deux sous-populations majoritaires de DC circulantes, les DC myéloïdes (MDC) et plasmacytoïdes (PDC), 2) la capacité des PDC de patients chroniquement infectés à produire de l'IFNa en réponse à une stimulation par HSV-1 et 3) la fonction allostimulatrice et de polarisation des PDC et MDC de porteurs chroniques non traités. Nous avons montré que 1) le VHC est capable d'infecter les MDC et PDC circulantes, 2) l'infection par le VHC ne modifie ni la capacité des PDC à produire des IFN I, 3) ni l'aptitude des PDC et MDC à induire la réponse immunitaire adaptative (allostimulation et polarisation)LYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocSudocFranceF

Intravenous injection of a novel viral immunotherapy encoding human interleukin-7 in nonhuman primates is safe and increases absolute lymphocyte count

Persistence of an immunosuppression, affecting both the innate and adaptive arms of the immune system, plays a role in sepsis patients’ morbidity and late mortality pointing to the need for broad and effective immune interventions. MVA-hIL-7-Fc is a non-replicative recombinant Modified Vaccinia virus Ankara encoding the human interleukin-7 fused to human IgG2 Fc fragment. We have shown in murine sepsis models the capacity of this new virotherapy to stimulate both arms of the immune system and increase survival. Herein, an exploratory study in nonhuman primates was performed following a single intravenous injection of the MVA-hIL-7-Fc used at the clinical dose to assess its safety and biological activities. Four cynomolgus macaques were followed for 3 weeks post-injection (p.i), without observed acute adverse reactions. Circulating hIL-7-Fc was detected during the first 3–5 days p.i with a detection peaking at 12 h p.i. IL-7 receptor engagement and downstream signal transduction were detected in T cells demonstrating functionality of the expressed IL-7. Expansion of blood lymphocytes, mainly CD4 and CD8 naïve and central memory T cells, was observed on day 7 p.i. together with a transient increase of Ki67 expression on T lymphocytes. In addition, we observed an increase in circulating B and NK cells as well as monocytes were albeit with different kinetics and levels. This study indicates that a vectorized IL-7-Fc, injected by intravenous route at a relevant clinical dose in a large animal model, is active without adverse reactions supporting the clinical development of this novel virotherapy for treatment of sepsis patients

IL-7 producing immunotherapy improves ex vivo T cell functions of immunosenescent patients, especially post hip fracture

Following acute stress such as trauma or sepsis, most of critically ill elderly patients become immunosuppressed and susceptible to secondary infections and enhanced mortality. We have developed a virus-based immunotherapy encoding human interleukin-7 (hIL-7) aiming at restoring both innate an adaptative immune homeostasis in these patients. We assessed the impact of this encoded hIL-7 on the ex vivo immune functions of T cells from PBMC of immunosenescent patients with or without hip fracture. T-cell ex vivo phenotyping was characterized in terms of senescence (CD57), IL-7 receptor (CD127) expression, and T cell differentiation profile. Then, post stimulation, activation status, and functionality (STAT5/STAT1 phosphorylation and T cell proliferation assays) were evaluated by flow cytometry. Our data show that T cells from both groups display immunosenescence features, express CD127 and are activated after stimulation by virotherapy-produced hIL-7-Fc. Interestingly, hip fracture patients exhibit a unique functional ability: An important T cell proliferation occurred compared to controls following stimulation with hIL-7-Fc. In addition, stimulation led to an increased naïve T cell as well as a decreased effector memory T cell proportions compared to controls. This preliminary study indicates that the produced hIL-7-Fc is well recognized by T cells and initiates IL-7 signaling through STAT5 and STAT1 phosphorylation. This signaling efficiently leads to T cell proliferation and activation and enables a T cell “rejuvenation.” These results are in favor of the clinical development of the hIL-7-Fc expressing virotherapy to restore or induce immune T cell responses in immunosenescent hip fracture patients

Safety and immunogenicity of the therapeutic vaccine TG1050 in chronic hepatitis B patients: a phase 1b placebo-controlled trial

Funding: TransgèneInternational audienceTreatment of chronic hepatitis B (CHB) typically requires life-long administration of drugs. Cohort and pre-clinical studies have established the link between a functional T-cell-mounted immunity and resolution of infection. TG1050 is an adenovirus 5-based vaccine that expresses HBV polymerase and domains of core and surface antigen and has shown immunogenicity and antiviral effects in mice. We performed a phase 1 clinical trial to assess safety and explore immunogenicity and early efficacy of TG1050 in CHB patients. This randomized, double blind, placebo-controlled study included two sequential phases: one single dose cohort (SD, n = 12) and one multiple (3) doses cohort (MD, n = 36). Patients, virally suppressed under nucleoside(d)tide analog NUC therapy, were randomized 1:1:1 across 3 dose levels (DL) and assigned to receive 10(9), 10(10), 10(11) virus particles (vp) of TG1050 and then randomized within each DL to placebo (3:1 and 9:3 vaccines/placebo in each DL, respectively, for the SD and MD cohorts). Cellular (ELISPOT) and antibody responses (anti-Adenovirus), as well as evolution of circulating HBsAg and HBcrAg, were monitored. All doses were well tolerated in both cohorts, without severe adverse event. TG1050 was capable to induce IFN-gamma producing T-cells targeting 1 to 3 encoded antigens, in particular at the 10(10)vp dose. Overall, minor decreases of HBsAg were observed while a number of vaccinees reached unquantifiable HBcrAg by end of the study. In CHB patients under NUC, TG1050 exhibited a good safety profile and was capable to induce HBV-specific cellular immune response. These data support further clinical evaluation, especially in combination studies