MiR-24 Tumor Suppressor Activity Is Regulated Independent of p53 and through a Target Site Polymorphism

MicroRNAs (miRNAs) are predicted to regulate approximately 30% of all human genes; however, only a few miRNAs have been assigned their targets and specific functions. Here we demonstrate that miR-24, a ubiquitously expressed miRNA, has an anti-proliferative effect independent of p53 function. Cell lines with differential p53 status were used as a model to study the effects of miR-24 on cell proliferation, cell cycle control, gene regulation and cellular transformation. Overexpression of miR-24 in six different cell lines, independent of p53 function, inhibited cell proliferation and resulted in G2/S cell cycle arrest. MiR-24 over expression in cells with wt-p53 upregulated TP53 and p21 protein; however, in p53-null cells miR-24 still induced cell cycle arrest without the involvement of p21. We show that miR-24 regulates p53-independent cellular proliferation by regulating an S-phase enzyme, dihydrofolate reductase (DHFR) a target of the chemotherapeutic drug methotrexate (MTX). Of interest, we found that a miR-24 target site polymorphism in DHFR 3′ UTR that results in loss of miR-24-function and high DHFR levels in the cell imparts a growth advantage to immortalized cells and induces neoplastic transformation. Of clinical significance, we found that miR-24 is deregulated in human colorectal cancer tumors and a subset of tumors has reduced levels of miR-24. A novel function for miR-24 as a p53-independent cell cycle inhibitory miRNA is proposed

РОЗРОБКА І ВАЛІДАЦІЯ ВЕРХ-МЕТОДУ ОДНОЧАСНОГО КІЛЬКІСНОГО ВИЗНАЧЕННЯ ІМІДАКЛОПРИДУ ТА ІВЕРМЕКТИНУ У КРАПЛЯХ ПРОТИ БЛІХ ТА КЛІЩІВ

Imidacloprid and ivermectin are selective blockers of metabotropic ion receptors of the nervous system of invertebrates, leading to paralysis and death of ecto- and endoparasites. These active substances are used in insect-acaricidal drops to kill lice, fleas and ticks in cattle, domestic animals and pets. The aim of the work was to develop a method for the identification and simultaneous quantitative determination of imidacloprid and ivermectin in drops for external use. The method was developed and validated by selectivity, linearity and suitability parameters of the chromatographic system. Drops for external use were used as a sample-object for development. The standard sample and the test sample were dissolved in acetonitrile to a concentration of imidacloprid 100 μg/ml and ivermectin 10 µg/ml. The samples were separated on a Dionex Ultimate 3000 chromatography system equipped with a chromatographic column Acclaim C18 150×4.6, 5 μm. The mobile phase was a mixture of acetonitrile and water in a volume ratio of 90:10. Ivermectin and imidacloprid were detected at an absorption wavelength of 242 nm. Under the above-mentioned conditions, it was possible to completely separate imidacloprid and ivermectin (retention time of chromatographic peaks – 2.0 min and 10.0 min) and other components of the studied drug. At the same time, the suitability parameters of the chromatographic system did not exceed the limits specified in the recommendations of the USA Food and Drug Association. For the peaks of imidacloprid and ivermectin, the efficiency of the chromatographic system was 8000–10000 theoretical plates. The relative standard deviation (RSD) for the peak areas of the active substances was ± 0.31%, and the peak separation ratio (RS) of imidacloprid from ivermectin and other drug components was 35.9. The symmetry coefficient of the imidacloprid peak was 1.5, and that of ivermectin was 1.1. The calibration curves were linear in the recommended DFU 2.0 range (80–120% of the nominal concentration of the corresponding active substance). The coefficient of linearity (R2) for imidacloprid was 0.9991, and for ivermectin it was 0.9993.Імідаклоприд та івермектин – селективні блокатори метаботропних йонних рецепторів нервової системи безхребетних тварин, що веде до паралічу та смерті екто- та ендопаразитів. Ці діючі речовини використовуються у інсекто-акарицидних краплях для знищення вошей, бліх та кліщів у великої та дрібної рогатої худоби і домашніх улюбленців. Мета роботи полягала у розробці методики ідентифікації та одночасного кількісного визначання імідаклоприду та івермектину в краплях для зовнішнього застосування. Методику розробили та валідували за показниками вибірковості, лінійності та параметрами придатності хроматографічної системи. У якості зразка-об’єкту для розробки методики використовували краплі для зовнішнього застосування. Стандартний зразок та випробну пробу розчиняли у ацетонітрилі, до концентрації імідаклоприду 100 мкг/мл та івермектину 10 мкг/мл. Зразки розділяли на хроматографі Dionex Ultimate 3000, оснащеному хроматографічною колонкою Acclaim C18 150×4,6, 5 μм. Рухомою фазою була суміш ацетонітрилу та води в об’ємному співвідношенні 90:10. Івермектин та імідаклоприд детектували за довжини хвилі поглинання – 242 нм. За вищевказаних умов вдалося повністю розділити імідаклоприд та івермектин (час утримування виходу хроматографічних піків – 2,0 хв та 10,0 хв) та інші компоненти досліджуваного препарату. При цьому, параметри придатності хроматографічної системи не виходили за межі, зазначені в рекомендаціях USA Food and Drug Asossiation. Для піків імідаклоприду та івермектину ефективність хроматографічної системи становила 8000–10000 теор. тарілок. Відносний стандартний відхил (RSD) для площ піків діючих речовин становив ± 0,31 %, а коефіцієнт розділення піків (RS) імідаклоприду від івермектину та інших компонентів препарату становив 35,9. Коефіцієнт симетрії піку імідаклоприду становив – 1,5, а івермектину – 1,1. Калібрувальні криві були лінійними у рекомендованому ДФУ 2.0 діапазоні (80–120 % від номінальної концентрації відповідної діючої речовини). Коефіцієнт лінійності (R2) для імідаклоприду становив 0,9991, а для івермектину – 0,9993

РОЗРОБКА І ВАЛІДАЦІЯ ВЕРХ-МЕТОДУ ОДНОЧАСНОГО КІЛЬКІСНОГО ВИЗНАЧЕННЯ ФІПРОНІЛУ ТА S-МЕТОПРЕНУ У КРАПЛЯХ ПРОТИ БЛІХ ТА КЛІЩІВ

Fipronil is a selective blocker of metabotropic ion receptors of the nervous system of invertebrate animals. And S-methoprene is an analogue of the juvenile hormone, which leads to the arrest of the development and reproduction of insects. These active substances are used in insect-acaricidal drops to destroy and prevent the reproduction of lice, fleas and ticks in pets. Aim of the work was to develop a method for the identification and simultaneous quantification of fipronil and S-methoprene in drops for external use. The method was developed and validated by indicators of selectivity, linearity and suitability parameters of the chromatographic system. Insecto-acaricidal drops for external use were used as a sample-object for development. The standard sample and the test sample were dissolved in acetonitrile to fipronil concentration – 100 μg/ml and S-methoprene – 90 μg/ml. The samples were separated on a Dionex Ultimate 3000 chromatograph equipped with an Acclaim C18 chromatographic column 150×4.6, 5 μm. The mobile phase was a mixture of acetonitrile and water in a volume ratio of 90:10. Fipronil and S-methoprene were detected at an absorption wavelength of 270 nm. Under the above-mentioned conditions, it was possible to completely separate fipronil and S-methoprene (retention time of the chromatographic peaks - 2.3 min and 7.6 min) and other components of the studied drug. At the same time, the suitability parameters of the chromatographic system did not exceed the limits specified in the recommendations of the USA Food and Drug Association for HPLC methods. For fipronil and S-methoprene peaks the efficiency of the chromatographic system was 8300–13000 theor. plates The relative standard deviation (RSD) for the peak areas of the active substances was ± 0.50%, and the peak separation ratio (RS) of fipronil and S-methoprene and other drug components was 27.6. The symmetry coefficient of the fipronil peak was 1.4, and that of S-methoprene was 1.2. The calibration curves were linear in the recommended DFU 2.0 range (80–120% of the nominal concentration of the corresponding active substance). The coefficient of linearity (R2) for fipronil was 0.9990, and for S-methoprene it was 0.9989.Фіпроніл – селективний блокатор метаботропних йонних рецепторів нервової системи безхребетних тварин. А S-метопрен аналог ювенільного гормону, який веде до зупинки розвитку та репродукції комах. Ці діючі речовини застосовуються у інсекто-акарицидних краплях для знищення та попередження розмноження вошей, бліх та кліщів у домашніх улюбленців. Мета роботи полягала в розробці методики ідентифікації та одночасного кількісного визначання фіпронілу та S-метопрену в краплях для зовнішнього застосування. Методику розробили та валідували за показниками вибірковості, лінійності та параметрами придатності хроматографічної системи. В якості зразка-об’єкту для розробки використовували інсекто-акарицидні краплі для зовнішнього застосування. Стандартний зразок та випробну пробу розчиняли у ацетонітрилі, до концентрації фіпронілу 100 мкг/мл та S-метопрену 90 мг/мл. Зразки розділяли на хроматографі Dionex Ultimate 3000, оснащеному хроматографічною колонкою Acclaim C18 150×4,6, 5 μм. Рухомою фазою була суміш ацетонітрилу та води в об’ємному співвідношенні 90:10. Фіпроніл та S-метопрен детектували за довжини хвилі поглинання – 270 нм. За вищевказаних умов вдалося повністю розділити фіпроніл та S-метопрен (час утримування виходу хроматографічних піків – 2,3 хв та 7,6 хв) та інші компоненти досліджуваного препарату. При цьому, параметри придатності хроматографічної системи не виходили за межі, зазначені в рекомендаціях USA Food and Drug Asossiation. Для піків фіпронілу та S-метопрену ефективність хроматографічної системи становила 8300–13000 теор. тарілок. Відносний стандартний відхил (RSD) для площ піків діючих речовин становив ± 0,50 %, а коефіцієнт розділення піків (RS) фіпронілу, S-метопрену та інших компонентів препарату становив 27,6. Коефіцієнт симетрії піку фіпронілу становив – 1,4, а S-метопрену – 1,2. Калібрувальні криві були лінійними у рекомендованому ДФУ 2.0 діапазоні (80–120 % від номінальної концентрації відповідної діючої речовини). Коефіцієнт лінійності (R2) для фіпронілу становив – 0,9990, а для S-метопрену – 0,9989

UMP/CMPK Is Not the Critical Enzyme in the Metabolism of Pyrimidine Ribonucleotide and Activation of Deoxycytidine Analogs in Human RKO Cells

Human UMP/CMP kinase was identified based on its enzymatic activity in vitro. The role of this protein is considered critical for the maintenance of pyrimidine nucleotide pool profile and for the metabolism of pyrimidine analogs in cells, based on the in vitro study of partially purified enzyme and recombinant protein. However, no detailed study has yet addressed the role of this protein in nucleotide metabolism in cells.Two stable cell lines in which UMP/CMP kinase (mRNA: AF087865, EC 2.7.4.14) can be either up-regulated or down-regulated were developed using Tet-On Gene Expression Systems. The amount and enzymatic activity of UMP/CMP kinase extracted from these two cell lines can be induced up by 500% or down by 95-98%. The ribonucleotides of endogenous pyrimidine as well as the metabolism of exogenous natural pyrimidine nucleosides and their analogs were not susceptible to the altered amount of UMP/CMP kinase in these two stable RKO cell lines. The level of incorporation of pyrimidine nucleoside analogs, such as gemcitabine (dFdC) and troxacitabine (L-OddC), into cellular DNA and their potency in inhibiting cell growth were not significantly altered by up-regulation or down-regulation of UMP/CMP kinase expression in cells.The UMP/CMP kinase (EC 2.7.4.14) expressed in RKO cells is not critical for the phosphorylation of (d)CMP and the maintenance of natural nucleotide pools. It also does not play an important role in the activation of dFdC and L-OddC. The increase by 500% or decrease by 95-98% in the levels of UMP/CMP kinase do not affect steady state levels of dFdC and L-OddC in RKO cells. Overall, the activity and possible mechanisms of recombinant UMP/CMP kinase expressed in the in vitro system can not be extended to that of UMP/CMP kinase expressed in a cell system or an in vivo system

РОЗРОБКА І ВАЛІДАЦІЯ ВЕРХ-МЕТОДУ КІЛЬКІСНОГО ВИЗНАЧЕННЯ ЕТИЛБУТИЛАЦЕТАМІНОПРОПІОНАТУ У СПРЕЯХ

Ethylbutylacetaminopropionate is a selective activator of metabotropic ionic G-receptors of the nervous system of invertebrate animals, which leads to overexcitation of insects and their repelling from the source of this substance. Ethylbutylacetaminopropionate is used in insect acaricidal sprays as a repellent against mosquitoes, lice, fleas and ticks for pets. The aim of the work was to develop a method of identification and quantitative determination of ethylbutylacetaminopropionate in a spray for external use. The method was developed and validated by indicators of selectivity, linearity and suitability parameters of the chromatographic system. A spray repellent was used as a sample-object for the development of the technique. The standard sample and the test sample were dissolved in a mixture of acetonitrile and water in a volume ratio of 1:1, to a concentration of ethylbutylacetaminopropionate of 50 μg/ml. The samples were separated on a Dionex Ultimate 3000 chromatograph equipped with an Acclaim C18 chromatographic column 250×3.0, 3 μm. The mobile phase was a mixture of acetonitrile and water in a volume ratio of 60:40. Ethyl butylacetaminopropionate was detected at an absorption wavelength of 210 nm. Under the above conditions, it was possible to completely separate ethylbutylacetaminopropionate (retention time of the chromatographic peak – 4.9 min) and other components of the studied drug. At the same time, the suitability parameters of the chromatographic system did not exceed the limits specified in the recommendations of the USA Food and Drug Association. For ethylbutylacetaminopropionate, the efficiency of the chromatographic system was 15,100 theoretical plates The relative standard deviation (RSD) for the peak areas of the active substances was ± 0.31%, and the peak separation ratio (RS) of ethyl butylacetaminopropionate and other components of the drug was 25.0. The symmetry coefficient of the ethyl butylacetaminopropionate peak was 1.31. The calibration curve was linear in the recommended DFU 2.0 range (80–120% of the nominal concentration of active substance). The coefficient of linearity (R2) for ethyl butylacetaminopropionate was 0.9991.Етилбутилацетамінопропіонат – селективний активатор метаботропних йонних G–рецепторів нервової системи безхребетних тварин, що веде до перезбудження комах та їх відлякування від джерела цієї речовини. Етилбутилацетамінопропіонат використовуються у інсекто-акарицидних спреях для домашніх улюбленців, як репелент проти комарів, вошей, бліх та кліщів. Мета роботи полягала у розробці методики ідентифікації та кількісного визначання етилбутилацетамінопропіонату в спреї для зовнішнього застосування. Методику розробили та валідували за показниками вибірковості, лінійності та параметрами придатності хроматографічної системи. У якості зразка-об’єкту для розробки методики використовували спрей-репелент. Стандартний зразок та випробну пробу розчиняли у суміші ацетонітрилу та води у об’ємному співвідношенні 1:1, до концентрації етилбутилацетамінопропіонату 50 мкг/мл. Зразки розділяли на хроматографі Dionex Ultimate 3000, оснащеному хроматографічною колонкою Acclaim C18 250×3,0, 3 μм. Рухомою фазою була суміш ацетонітрилу та води в об’ємному співвідношенні 60:40. Етилбутилацетамінопропіонат детектували за довжини хвилі поглинання – 210 нм. За вищевказаних умов вдалося повністю розділити етилбутилацетамінопропіонат (час утримування хроматографічного піку – 4,9 хв) та інші компоненти досліджуваного препарату. При цьому, параметри придатності хроматографічної системи не виходили за межі, зазначені в рекомендаціях USA Food and Drug Asossiation. Для етилбутилацетамінопропіонату ефективність хроматографічної системи становила 15100 теоретичних тарілок. Відносний стандартний відхил (RSD) для площ піків діючої речовини становив ± 0,42 %, а коефіцієнт розділення піку (RS) етилбутилацетамінопропіонату та інших компонентів препарату становив 25,0. Коефіцієнт симетрії піку етилбутилацетамінопропіонату становив – 1,31. Калібрувальна крива була лінійною у рекомендованому ДФУ 2.0 діапазоні (80–120 % від номінальної концентрації діючої речовини). Коефіцієнт лінійності (R2) для етилбутилацетамінопропіонату становив 0,9991

Multidrug resistant Kluyvera ascorbata septicemia in an adult patient: a case report

<p>Abstract</p> <p>Introduction</p> <p><it>Kluyvera ascorbata </it>has become increasingly significant due to its potential to cause a wide range of infections, as well as its ability to transfer gene encoding for CTX-M- type extended spectrum B-lactamases (ESBLs) to other Enterobacteriaceae.</p> <p>Case presentation</p> <p>We report the case of a 64-year-old African-American male diagnosed with severe sepsis due to a multidrug resistant <it>Kluyvera ascorbata</it>, which was isolated from his blood. He was treated with meropenem and had a favorable outcome.</p> <p>Conclusion</p> <p>To the best of our knowledge, this is the first case report of a multidrug resistant <it>Kluyvera ascorbata </it>isolated from the blood in an adult patient with sepsis.</p

Вплив попередників та строків сівби на врожайність сортів Triticum aestivum L. в умовах Центрального Лісостепу України

Мета. Визначити потенціал урожайності нових сортів пшениці озимої миронівської селекції залежно від попередників і строків сівби та встановити їх частки впливу в умовах Центрального Лісостепу України. Методи. Дослідження проводили в польовому чотирифакторному досліді на базі Миронівського інституту пшениці імені В. М. Ремесла НААН упродовж 2018/19–2020/21 рр. Результати. У результаті вивчення п’яти перспективних сортів пшениці озимої, висіяних 25 вересня та 05 жовтня після двох попередників (соя та соняшник), виявили, що незалежно від строків сівби середня врожайність для досліджуваних сортів після попередника соя була вищою і варіювала від 3,77 до 6,24 т/га у порівнянні з попередником соняшник – 3,35–5,52 т/га. Сорт ‘МІП Ювілейна’ сформував максимальну врожайність за першого строку сівби (5,52 та 6,24 т/га після попередників соняшник та соя відповідно), а сорт ‘МІП Фортуна’ – за другого (5,46 т/га після попередника соя). Висновки. Установлено потенціал урожайності сортів пшениці озимої залежно від попередників та строків сівби в умовах Центрального Лісостепу України. За результатами дисперсійного аналізу отриманих даних з’ясовано частку впливу цих факторів на врожайність культури. Максимальний внесок у дисперсію врожайності був за роком висіву (67,8%) та попередником (20,9%)