Respuesta inmune innata pulmonar frente a la infección inhalatoria por brucella abortus

Fil: Hielpos, María Soledad. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaLa brucelosis es una zoonosis causada por bacterias intracelulares gram negativas del género Brucella, las cuales afectan a animales domésticos y salvajes, y pueden transmitirse al hombre por diversas vías. Una de estas vías es la inhalación de aerosoles contaminados. La brucelosis afecta a 500.000 personas en todo el mundo cada año y en Argentina se producirían anualmente entre 10.000 y 20.000 nuevos casos. La importancia de la vía inhalatoria ha quedado de manifiesto en brotes epidémicos vinculados a la generación de aerosoles contaminados en ámbitos laborales, particularmente en laboratorios microbiológicos y en mataderos. Se estima que se requieren tan sólo 10 a 100 organismos aerosolizados para generar infección en seres humanos, y es por ello que Brucella se considera altamente infectiva cuando se adquiere por vía aerógena y es clasificada por el CDC como agente bioterrorista. A pesar de la importancia de las vías respiratorias para la entrada de Brucella en el organismo, se desconoce casi por completo la respuesta inmune pulmonar a la infección inhalatoria por Brucella spp. \nEl objetivo general de este trabajo de Tesis fue evaluar la interacción de Brucella abortus con la mucosa respiratoria y sus componentes en las primeras etapas de la infección para caracterizar la respuesta inmune innata y antimicrobiana desencadenada en el pulmón, así como evaluar los mecanismos que utiliza la bacteria para evadir la vigilancia inmunológica pulmonar y diseminarse sistémicamente. Para ello desarrollamos un modelo murino de infección intratraqueal por B. abortus que nos permitió evaluar la respuesta inmune innata durante la primera semana de infección, y analizar un posible mecanismo de evasión de la inmunidad. También se realizaron estudios in vitro para evaluar la respuesta de las principales células conformantes de los tejidos pulmonares. \nLos resultados de esta Tesis demuestran que B. abortus genera una respuesta inmune pulmonar retardada y de baja intensidad, a pesar que es capaz de infectar y persistir en pulmón murino, pudiéndose diseminar desde el sitio de infección hacia los órganos periféricos tan tempranamente como 1 día p.i.. Se detecta en pulmón un leve aumento de las citoquinas IL-1? y MCP-1 a 3 días p.i. y sólo con cargas bacterianas altas (106 UFC/ ratón), mientras que el resto de las citoquinas proinflamatorias (IL-12, KC, TNF-? e IFN-?) no se diferencian del control hasta 7 días p.i. El análisis histológico demostró que la infección con B. abortus produce cambios en la composición celular del pulmón afectado, observándose un leve infiltrado de células mononucleares. Sin embargo, la citometría no permitió precisar la identidad de las células infiltrantes. Cuando se infectaron los ratones intratraquealmente con una mutante doble de B. abortus para las proteínas BtpA y BtpB (btpAbtpB-), involucradas en el bloqueo de la señalización por TLRs, la histología pulmonar reveló un mayor infiltrado de células mononucleares que en los pulmones de ratones infectados con la cepa salvaje (wt). Esto sugiere que las proteínas Btp modulan el reclutamiento de las células inmunes hacia el pulmón. A diferencia de lo que ocurre en el pulmón, el recuento de bacterias viables en los órganos periféricos de los ratones infectados por vía intratraqueal con la doble mutante fue mucho menor que en los ratones infectados con la cepa wt. Esto podría deberse a que las proteínas Btp modulan los mecanismos inmunes involucrados en la eliminación de la bacteria en los órganos periféricos. Los mayores niveles de citoquinas en el bazo de los animales infectados con la doble mutante avalaron esta hipótesis. Este estudio es el primero en demostrar in vivo que las proteínas Btp le confieren una ventaja de supervivencia a B. abortus. \nAsimismo se realizaron ensayos para evaluar la capacidad de modulación de las proteínas Btp frente a agonistas TLR administrados exógenamente. Se halló que la sobrevida de B. abortus en el ambiente pulmonar previamente inflamado con LPS de E. coli depende sustancialmente de la expresión de estas proteínas. \nPara tener una aproximación a la interacción hospedador-patógeno en infecciones humanas debe recurrirse a modelos in vitro realizados con células de origen humano. Para ello se realizaron infecciones de cultivos primarios de pneumocitos humanos y explantos pulmonares, y se midieron citoquinas y quemoquinas en sobrenadante de cultivo mediante ELISA. Los resultados indican que las células epiteliales alveolares son pobres respondedoras frente a la infección directa por B. abortus en cuanto a secreción de citoquinas proinflamatorias, al igual que los explantos pulmonares, si bien estos últimos responden con mayores niveles de citoquinas. \nEl epitelio respiratorio también responde a las infecciones con la producción de CCL20 y ?-defensinas, los cuales actúan en forma dual como péptidos antimicrobianos y como quemoquinas. Se evaluó su expresión y secreción en un modelo de infección in vitro de líneas celulares humanas, THP-1 (monocitos), Calu-6 (bronquiales) y A549 (alveolares) y en cultivo primario de pneumocitos y explantos humanos. Además se evaluó in vitro la actividad antimicrobiana de ambos péptidos frente a B. abortus. Se observó que las células epiteliales humanas secretan CCL20 y beta-defensina 2 en respuesta a la infección por B. abortus o a las citoquinas producidas por monocitos infectados. Ambas moléculas son producidas en concentraciones que no parecen tener actividad antimicrobiana contra B. abortus, pero que podrían mediar funciones inmunomoduladoras durante la infección. \nEn conclusión, la infección inhalatoria por Brucella abortus genera una respuesta innata pulmonar de poca intensidad que le permite sobrevivir en pulmón y probablemente facilita su diseminación a otros órganos. La persistencia pulmonar de la bacteria posiblemente se vea facilitada, entre otros factores, por su capacidad de supervivencia intracelular y sus mecanismos de modulación de la respuesta inmune innata.\

Proinflammatory response of canine trophoblasts to Brucella canis infection

Brucella canis infection is an important cause of late-term abortion in pregnant bitches. The pathophysiological mechanisms leading to B. canis–induced abortion are unknown, but heavily infected trophoblasts are consistently observed. As trophoblasts responses to other pathogens contribute to placental inflammation leading to abortion, the aim of the present study was to characterize the cytokine response of canine trophoblasts to B. canis infection. To achieve this, trophoblasts isolated from term placenta of healthy female dogs were infected with B. canis, culture supernatants were harvested for cytokine determinations, and the load of intracellular viable B. canis was determined at different times post-infection. Additionally, cytokine responses were assessed in non-infected trophoblasts stimulated with conditioned media (CM) from B. canis-infected canine monocytes and neutrophils. Finally, cytokine response and bacteria replication were assessed in canine placental explants infected ex vivo. B. canis successfully infected and replicated in primary canine trophoblasts, eliciting an increase in IL-8 and RANTES (CCL5) secretion. Moreover, the stimulation of trophoblasts with CM from B. canis-infected monocytes and neutrophils induced a significant increase in IL-8, IL-6 and RANTES secretion. B. canis replication was confirmed in infected placental explants and the infection elicited an increased secretion of TNF-α, IL-8, IL-6 and RANTES. This study shows that canine trophoblasts produce proinflammatory cytokines in response to B. canis infection and/or to stimulation with factors produced by infected monocytes and neutrophils. These cytokines may contribute to placental inflammation leading to abortion in B. canis-infected pregnant bitches.Fil: Fernandez, Andrea Giselle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Hielpos, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Ferrero, Mariana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentin

Btp Proteins from Brucella abortus Modulate the Lung Innate Immune Response to Infection by the Respiratory Route

Although inhalation of infected aerosols is a frequent route for Brucella infection in humans, it rarely causes pulmonary clinical manifestations, suggesting a mild or nearly absent local inflammatory response. The goal of this study was to characterize the early innate immune response to intratracheal infection with Brucella abortus in mice and to evaluate whether it is modulated by this pathogen. After infection with 106 CFU of B. abortus, the pulmonary bacterial burden at 7 days post-infection (p.i.) was comparable to the initial inoculum, despite an initial transient decline. Brucella was detected in spleen and liver as early as 1 day p.i. IL-1β and MCP-1 increased at 3 days p.i., whereas IL-12, KC, TNF-α, and IFN-γ only increased at 7 days p.i. Histological examination did not reveal peribronchial or perivascular infiltrates in infected mice. Experiments were conducted to evaluate if the limited inflammatory lung response to B. abortusis caused by a bacterial mechanism of TLR signaling inhibition. Whereas inoculation of E. coli LPS to control mice [phosphate-buffered saline (PBS)/LPS] caused lung inflammation, almost no histological changes were observed in mice preinfected intratracheally with B. abortus (WT/LPS). We speculated that the Brucella TIR-containing proteins (Btps) A and B, which impair TLR signaling in vitro, may be involved in this modulation. After LPS challenge, mice preinfected with the B. abortus btpAbtpB double mutant exhibited a stronger pulmonary polymorphonuclear infiltrate than WT/LPS mice, although milder than that of the PBS/LPS group. In addition, lungs from B. abortus btpAbtpB-infected mice presented a stronger inflammatory infiltrate than those infected with the WT strain, and at day 7 p.i., the pulmonary levels of KC, MCP-1, and IL-12 were higher in mice infected with the mutant. This study shows that B. abortus infection produces a mild proinflammatory response in murine lungs, partially due to immune modulation by its Btp proteins. This may facilitate its survival and dissemination to peripheral organs.Fil: Hielpos, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Ferrero, Mariana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Fernandez, Andrea Giselle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Falivene, Juliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Vanzulli, Silvia. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Comerci, Diego José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentin

Proinflammatory response of human trophoblastic cells to Brucella abortus infection and upon interactions with infected phagocytes

Trophoblasts are targets of infection by Brucella spp. but their role in the pathophysiology of pregnancy complications of brucellosis is unknown. Here we show that Brucella abortus invades and replicates in the human trophoblastic cell line Swan-71 and that the intracellular survival of the bacterium depends on a functional virB operon. The infection elicited significant increments of interleukin 8 (IL8), monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1), and IL6 secretion, but levels of IL1beta and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) did not vary significantly. Such proinflammatory response was not modified by the absence of the Brucella TIR domain-containing proteins BtpA and BtpB. The stimulation of Swan-71 cells with conditioned medium (CM) from B. abortus-infected human monocytes (THP-1 cells) or macrophages induced a significant increase of IL8, MCP-1 and IL6 as compared to stimulation with CM from non-infected cells. Similar results were obtained when stimulation was performed with CM from infected neutrophils. Neutralization studies showed that IL1beta and/or TNF-alpha mediated the stimulating effects of CM from infected phagocytes. Reciprocally, stimulation of monocytes and neutrophils with CM from Brucella-infected trophoblasts increased IL8 and/ or IL6 secretion. These results suggest that human trophoblasts may provide a local inflammatory environment during B. abortus infections either through a direct response to the pathogen or through interactions with monocytes/macrophages or neutrophils, potentially contributing to the pregnancy complications of brucellosis.Fil: Fernández, Gabriela Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Ferrero, Mariana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Hielpos, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentin

IL-1R and inflammasomes mediate early pulmonary protective mechanisms in respiratory brucella abortus infection

Brucella spp. infection is frequently acquired through contaminated aerosols. The role of interleukin-1 beta (IL-1β) in the early pulmonary response to respiratory Brucella infection is unknown. As shown here, IL-1β levels in lung homogenates and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) of mice intratracheally inoculated with B. abortus were increased at 3 and 7 days p.i. At 7 days p.i., pulmonary CFU numbers were higher in IL-1 receptor (IL-1R) knockout (KO) mice than in wild type (WT) mice. At different times p.i. CFU in lungs and BALF were higher in mice lacking some inflammasome components (caspase-1, AIM2, NLRP3) than in WT mice. At 2 days p.i. pulmonary levels of IL-1b and CXCL1 (neutrophils chemoattractant) were lower in caspase-1/11 KO mice. At day 3 p.i., neutrophils counts in BALF were lower in caspase-1/11 KO mice than in WT mice. During in vitro infections, IL-1β secretion was lower in alveolar macrophages from caspase-1/11, NLRP3 or AIM2 KO mice than in WT controls. Similarly, IL-1β production by B. abortus-infected alveolar epithelial cells was reduced by pretreatment with a specific caspase-1 inhibitor. This study shows that IL-1R, probably through IL-1β action, and the NLRP3 and AIM2 inflammasomes are involved in pulmonary innate immune protective mechanisms against respiratory B. abortus infection.Fil: Hielpos, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Fernandez, Andrea Giselle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Falivene, Juliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Alonso Paiva, Iván Mathias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Muñoz González, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Ferrero, Mariana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Campos, Priscila C.. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Vieira, Angelica T.. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Oliveira, Sergio Costa. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentin

Chlorpyrifos subthreshold exposure induces epithelial-mesenchymal transition in breast cancer cells

Chlorpyrifos (CPF) is one of the most frequently used pesticide in extensive agriculture around the world. The effects of this pesticide on carcinogenesis are not clear and there is no consensus concerning the risks of this compound. In this study we investigate whether CPF promotesepithelial-mesenchymal transition (EMT) in breast cancer cells. Migration and invasion were evaluated by wound healing assay, Boyden Chamber assay and multicellular spheroids (3D). Also, we analyzed the effects of CPF on the number and the area of first (MS1) and second (MS2)generation of MCF-7-mammospheres. We demonstrate that 50 μM CFP induces invasion in MCF-7 and MDAMB-231 cells (*** p < 0.001) when they were grown as a monolayer. In MCF-7-3D culture, we observed that 0.05 µM CPF increased the area of invasion after 7 days (** p < 0.01) and CPF at 50 µM increased the area of invasion after 5 (* p < 0.05) and 7 days (*** p < 0.001) when collagen type 1 was used as matrix model. When Matrigel® was used as substrate, we observed that only 0.05 µM CPF produced an increment of the invasion area after 2 (* p < 0.05), 5 (** p < 0.01) and 7 days (*** p < 0.001). In addition, 0.05 and 50 μM CPF increases migration in both cell lines grown as a monolayer and 3D culture. CPF at 0.05 µM induced an increment of the number and the area of MS1 and MS2 (* p < 0.05 and *** p < 0.001). Our results show that CPF promotes migration and invasion in breast cancer cells, generating a more aggressive phenotype.Fil: Lasagna, Marianela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Hielpos, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Ventura, Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Mardirosian, Mariana Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Martin, Gabriela Adriana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Fisicomatemática. Cátedra de Física; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Miret, Noelia Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana. Cátedra de Química Biologica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Randi, Andrea Silvana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana. Cátedra de Química Biologica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Núñez, Mariel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Fisicomatemática. Cátedra de Física; ArgentinaFil: Cocca, Claudia Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaBuenos Aires Breast Cancer SymposiumCiudad Autonoma de Buenos AiresArgentinaCentro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas “Norberto Quirno”Instituto de Biología y Medicina ExperimentalInstituto de Fisiología, Biología Molecular y NeurocienciasInstituto de Investigaciones en Medicina TraslacionalInstituto de NanosistemasUniversidad AustralUniversidad de Buenos AiresUniversidad Nacional de San Martí

Key role of TLR2 in the inflammatory response and MHC-II down-regulation in Brucella-infected alveolar macrophages

Alveolar macrophages (AM) seem to constitute the main cellular target of inhaled brucellae. Here we show that Brucella abortus invades and replicates in murine AM without inducing cytotoxicity. B. abortus infection induced a statistically significant increase of TNF-α, KC, IL-1β, IL-6 and IL-12 in AM from C57BL/6 mice and Balb/c mice, but these responses were generally weaker and/or delayed as compared to those elicited in peritoneal macrophages. Studies using knockout mice for TLR2, TLR4 and TLR9 revealed that TNF-α and KC responses were mediated by TLR2 recognition. Brucella infection reduced in a MOI-dependent manner the expression of MHC-II molecules induced by gamma-interferon (IFN-γ) in AM. The same phenomenon was induced by incubation with heat-killed B. abortus (HKBA) or the lipidated form of the 19 kDa outer membrane protein of Brucella (L-Omp19), and was shown to be mediated by TLR2 recognition. In contrast, no significant down-regulation of MHC-II was induced by either unlipidated Omp19 or Brucella LPS. In a functional assay, treatment of AM with either L-Omp19 or HKBA reduced the MHC-II-restricted presentation of OVA peptides to specific T cells. One week after intra-tracheal infection viable B. abortus was detected in AM from both wild type and TLR2 KO mice, but CFU counts were higher in the latter. These results suggest that B. abortus may survive in AM after inhalatory infection in spite of a certain degree of immune control exerted by the TLR2-mediated inflammatory response. Both the modest nature of the latter and the modulation of MHC-II expression by the bacterium may contribute to such survival.Fil: Ferrero, Mariana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientiâ­ficas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "profesor R. A. Margni"; ArgentinaFil: Hielpos, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Cientiâ­ficas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "profesor R. A. Margni"; ArgentinaFil: Carvalho, Natalia. Universidade Federal Do Minas Gerais. Instituto de Cs.biologicas; BrasilFil: Barrionuevo, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Corsetti, Patricia. Universidade Federal Do Minas Gerais. Instituto de Cs.biologicas; BrasilFil: Giambartolomei, Guillermo Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Costa Oliveira, Sergio. Universidade Federal Do Minas Gerais. Instituto de Cs.biologicas; BrasilFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Cientiâ­ficas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "profesor R. A. Margni"; Argentin

Endocrine disruptor chlorpyrifos promotes migration, invasion, and stemness phenotype in 3D cultures of breast cancer cells and induces a wide range of pathways involved in cancer progression

Organophosphorus chlorpyrifos (CPF) is currently considered an endocrine disruptor (ED), as it can imitate hormone actions both in vitro and in vivo. We recently reported that CPF induces migration and invasion in 2D cultures and changes the expression of key molecular markers involved in epithelial mesenchymal transition in MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines. In this study, we investigated whether CPF could behave as a predisposing factor for tumors to become more metastatic and aggressive using 3D culture models. In MCF-7 cells, 0.05 μM CPF induced an increase in the number and size of mammospheres via estrogen receptor alpha (ERα) and c-SRC. Furthermore, 0.05 μM CPF increased the area of spheroids generated from MCF-7 cells, induced invasion using both Matrigel® and type 1 collagen matrices, and increased cell migration capacity via ERα in this 3D model. In turn, 50 μM CPF increased cell migration capacity and invasion using type 1 collagen matrix. In monolayers, CPF increased the phosphorylation and membrane translocation of c-SRC at both concentrations assayed. CPF at 0.05 μM boosted p-AKT, p-GSK-3β and p-P38. While p-AKT rose in a ERα-dependent way, p-GSK-3β was dependent on ERα- and c-SRC, and p-P38 was only dependent on c-SRC. On the other hand, the increase in p-AKT and p-P38 induced by 50 μM CPF was dependent on the c-SRC pathway. We also observed that 0.05 μM CPF increased IGF-1R and IRS-1 expression and that 50 μM CPF induced IGF-1Rβ phosphorylation. In the MDA-MB-231 cell line, 0.05 and 50 μM CPF increased p-c-SRC. Finally, p-AKT and p-GSK-3β were also induced by CPF at 0.05 and 50 μM, and an increase in p-P38 was observed at 50 μM. Taken together, these data provide support for the notion that CPF may represent a risk factor for breast cancer development and progression.Fil: Lasagna, Marianela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Ventura, Clara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Hielpos, María Soledad. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Mardirosian, Mariana Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Martin, Gabriela Adriana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Miret, Noelia Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana. Cátedra de Química Biologica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Randi, Andrea Silvana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana. Cátedra de Química Biologica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Núñez, Mariel Alejandra. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; ArgentinaFil: Cocca, Claudia Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería. Departamento de Física. Laboratorio de Radioisótopos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin