Isolation, expansion, and characterization of equine adipose-derived stem cells

Devido aos excelentes resultados obtidos em pesquisas com células-tronco e suas aplicabilidades promissoras, a terapia com estas células encontra-se em momento de máxima ascensão, estimulando assim, inúmeras pesquisas. A fim de padronizar o cultivo e avaliar a viabilidade de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo de equinos visando a terapia celular nesta espécie, conduziu-se um estudo de isolamento, cultivo e caracterização de tais células. Para tal, foi realizada coleta de tecido adiposo de cinco equinos sem raça definida, com aproximadamente cinco anos. Em seguida, o tecido foi refrigerado e transportado ao laboratório, onde foi realizado o protocolo de cultivo celular durante aproximadamente 14 dias. Após o término deste procedimento, uma alíquota de células foi encaminhada para a realização do teste de quantificação e viabilidade celular com Azul de Tripan 1%, sendo outra porção destinada à confirmação da linhagem de célula tronco mesenquimal por meio de imunofenotipagem com os anticorpos monoclonais anti-CD11b, anti-CD45, anti-CD90 e anti-CD105, e de diferenciação celular em linhagem condrogênica, adipogênica e osteogênica. Houve diferenciação celular e marcação positiva dos antígenos de superfície CD44 e MHCI e negativa dos CD45 e CD11b, confirmando-se a origem mesenquimal e não hematopoiética. A viabilidade celular média obtida das células-tronco mesenquimais foi de 92,83% considerada satisfatória. Portanto, a utilização deste protocolo para obtenção de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo se mostrou uma opção confiável e viável para utilização na terapia celular em equinos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACTDue to the excellent results of stem cell research and its promising applicability, the therapy with these cells is undergoing a period of maximum visibility and numerous studies. In order to standardize the culture and to evaluate the viability of mesenchymal stem cells from adipose tissue of horses, aiming at cell therapy in this species, a study of isolation, expansion and characterization was conducted. For this, adipose tissue was collected from five crossbred horses aged approximately five years old. Subsequently, the tissue was immediately refrigerated and transported to the laboratory where the isolation and culture protocol, lasting approximately 14 days, was performed. After the end of this procedure, a cell pellet was obtained and resuspended in PBS. A portion of material obtained by centrifugation was collected and the cells were stained with 1% Trypan Blue for quantification and assessment of cell viability. Another sample was collected to confirm the lineage of stem cells by flow cytometry using monoclonal against the surface markers CD11b, CD45, CD90 and CD105; and by cellular differentiation assays to chondrogenic, adipogenic and osteogenic lineages. The isolated cells differentiated in the three lineages and showed positive staining for CD90 and CD105 and negative staining for CD11b and CD45, confirming the isolation of stem cells of mesenchymal origin. The average cell viability obtained was 92.83% and thus satisfactory. Therefore, the use of this protocol to obtain mesenchymal stem cells from adipose tissue was deemed to be a promising option for cell therapy in horses

Semen collection in rams standing upor in lateral recumbency using different eletroejaculators

O experimento teve como objetivo avaliar e comparar dois eletroejaculadores (EEr): um automático (A – Biocom Ltda., Uberaba, MG) e outro manual (M – Duboi, Campo Grande, MS), utilizando dois métodos de contenção: estação (E) e decúbito lateral (D). Foram utilizados doze carneiros: Santa-Inês (n=9), Ile-de-France (n=2) e Texel (n=1). O sêmen foi coletado duas vezes por semana e as coletas realizadas três vezes em cada grupo (AD – automático em decúbito; AE – automático em estação; MD – manual em decúbito e ME – manual em estação) resultando em doze coletas. Antes e depois das coletas de sêmen, amostras de sangue foram coletadas para análise dos níveis plasmáticos de cortisol com objetivo de verificação do estresse entre os grupos e indivíduos. Procedeu-se à avaliação das coletas pelo tempo em segundos para obtenção da fração seminal, tempo de duração da fração seminal e porcentagem de carneiros que expuseram o pênis. Os parâmetros avaliados referentes ao sêmen foram: volume, aspecto, motilidade espermática progressiva, turbilhonamento, vigor espermático, número total de espermatozoides no ejaculado e morfologia espermática. Em 7,1% de todas as coletas não houve ejaculação, sendo que o grupo submetido ao tratamento AD (20%) foi responsável pela maior fração das coletas sem ejaculação (P0,05). No entanto, houve diferença entre indivíduos (P0.05) relating to cortisol level after collections. However, there was difference among individuals (P<0.05). The collections in lateral recumbency were faster regarding achievement of seminal fraction and provided more time length for seminal fraction. The MD group required a shorter time length to achieve the seminal fraction and produced a greater volume of ejaculate in comparison to the AS group. It can be concluded by these results that both eletroejaculators (automatic and manual) had similar results as well as both methods of physical restrain (standing and lateral recumbency)

COLETA DE SÊMEN OVINO EM ESTAÇÃO OU DECÚBITO LATERAL UTILIZANDO DIFERENTES ELETROEJACULADORES

The objective of the experiment was to evaluate and comparetwo electroejaculators: an automatic one (A – Biocom Ltda.,Uberaba, MG) and a manual one (M – Duboi, Campo Grande,MS), using two methods of physical restrain: standing (E) or lateralrecumbency (D). Twelve rams were used: Santa Inês (n=9),Ile-de-France (n=2) and Texel (n=1). Semen were collected twicea week and each animal had the semen collected three times ineach group (AD – automatic in recumbency, AE – automatic instation, MD – manual in recumbency, and ME – manual in station)resulting in 12 collections. Blood samples were obtained before and after the semen collections to measure changes in circulatingcortisol in order to measure stress among groups and individuals.The collections were evaluated per the time in seconds to obtain seminalfraction, time of seminal fraction and percentage of rams thatexposed the penis. The collected semen parameters evaluated were:volume, aspect, progressive motility, wave motion, sperm vigor,total number of spermatozoa and sperm morphology. In 7.1% ofthe collections, there was no ejaculation, moreover, group AD wasresponsible for most of the collections without ejaculation (20%)(P0.05) relatingto cortisol level after collections. However, there was differenceamong individuals (P<0.05). The collections in lateral recumbencywere faster regarding achievement of seminal fraction and providedmore time length for seminal fraction. The MD group required ashorter time length to achieve the seminal fraction and produced agreater volume of ejaculate in comparison to the AS group. It canbe concluded by these results that both eletroejaculators (automaticand manual) had similar results as well as both methods of physicalrestrain (standing and lateral recumbency)

Sobre a analgesia pós-operatória da morfina, cetamina ou da associação em cadelas submetidas à ovariossalpingohisterectomia eletiva

Este estudo objetivou avaliar a eficácia analgésica da morfina e cetamina, isoladas ou associadas, para tratar a dor pós-operatória de cadelas submetidas à ovariossalpingohisterectomia (OSH) eletiva. Foram utilizadas 24 cadelas saudáveis, de raças variadas, idade de 27±17 meses e massa corpórea de 11±8,5kg. Os animais foram separados de forma igualitária e aleatória em três grupos: GM - morfina 0,5mg kg-1; GK - cetamina 2,5mg kg-1 ou GKM - morfina 0,5mg kg-1, associada à cetamina 2,5mg kg-1 . Os fármacos foram administrados por via intramuscular (IM) imediatamente após a indução anestésica. A dor foi avaliada por meio de escala analógica visual (EAV) e de Glasgow modificada (EGM) e o grau de sedação pela escala de Dobbins, duas horas antes do procedimento cirúrgico (basal), 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas após a extubação (M1 a M24). Quando a pontuação da EGM era acima de 33% do valor total da avaliação, realizava-se resgates analgésicos com 1,0mg kg-1 de morfina e, após 40 minutos deste resgate, caso não fosse suficiente, 0,2mg kg-1 de meloxicam. Os dados não paramétricos foram submetidos ao teste de Friedman ou Kruskal-Wallis, seguidos do teste de Dunn. Para os paramétricos, foi empregada análise de variância unidirecional ANOVA, seguida do teste de Tukey (P<0,05). Não houve diferenças significativas entre os grupos para os escores de dor, exceto para EGM, na qual os valores no GM foram superiores ao GKM 1h após a extubação. O número de resgates analgésicos foi significativamente superior no GM (todos os animais, com 11 resgates no total), em relação ao GKM (3) e GK (um animal por duas vezes). A administração pré-incisional de cetamina foi mais efetiva do que a oferecida pela morfina e, dessa maneira, a cetamina pode ser empregada para analgesia preemptiva em cadelas submetidas à OSH, entretanto, pode ser necessária analgesia de resgate