E2F1 activates p53 transcription through its distal site and participates in apoptosis induction in HPV-positive cells

AbstractThe p53 tumor suppressor protein, one of the most extensively studied proteins, plays a pivotal role in cellular checkpoints that respond to DNA damage to prevent tumorigenesis. However, the transcriptional control of the p53 gene has not been fully characterized. We report that the transcription factor E2F1 binds only to the E2F1 distal site of the p53 promoter in the human papillomavirus positive carcinoma HeLa cell line. Moreover, we showed that etoposide, a DNA damaging agent, activates p53 transcription through the E2F1 pathway. This increase correlates with apoptosis induction as disruption of this pathway led to reduced apoptosis stimulation by the DNA damaging agent

Alternative-splicing-based bicistronic vectors for ratio-controlled protein expression and application to recombinant antibody production

In the last decade polycistronic vectors have become essential tools for both basic science and gene therapy applications. In order to co-express heterologous polypeptides, different systems have been developed from Internal Ribosome Entry Site (IRES) based vectors to the use of the 2A peptide. Unfortunately, these methods are not fully suitable for the efficient and reproducible modulation of the ratio between the proteins of interest. Here we describe a novel bicistronic vector type based on the use of alternative splicing. By modifying the consensus sequence that governs splicing, we demonstrate that the ratio between the synthesized proteins could easily vary from 1 : 10 to 10 : 1. We have established this system with luciferase genes and we extended its application to the production of recombinant monoclonal antibodies. We have shown that these vectors could be used in several typical cell lines with similar efficiencies. We also present an adaptation of these vectors to hybrid alternative splicing/IRES constructs that allow a ratio-controlled expression of proteins of interest in stably transfected cell lines

An upstream open reading frame within an IRES controls expression of a specific VEGF-A isoform

Vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) is a potent secreted mitogen critical for physiological and pathological angiogenesis. Regulation of VEGF-A occurs at multiple levels, including transcription, mRNA stabilization, splicing, translation and differential cellular localization of various isoforms. Recent advances in our understanding of the posttranscriptional regulation of VEGF-A are comprised of the identification of stabilizing mRNA-binding proteins and the discovery of two internal ribosomal entry sites (IRES) as well as two alternative initiation codons in the 5′UTR of the VEGF-A mRNA. We have previously reported that VEGF-A translation initiation at both the AUG and CUG codons is dependent on the exon content of the coding region. In this report, we show that the expression of different VEGF-A isoforms is regulated by a small upstream open reading frame (uORF) located within an internal ribosome entry site, which is translated through a cap-independent mechanism. This uORF acts as a cis-regulatory element that regulates negatively the expression of the VEGF 121 isoform. Our data provide a framework for understanding how VEGF-A mRNAs are translated, and how the production of the VEGF 121 isoform is secured under non-hypoxic environmental conditions

Etude de l'initiation de la traduction du VEGF humain

TOULOUSE3-BU Sciences (315552104) / SudocSudocFranceF

MicroARN et hypoxie (étude du contrôle de l'expression de HIF-1alpha et du VEGF)

Une diminution de la pression en oxygène, appelée hypoxie, constitue un changement environnemental qui induit des modifications majeures de l'expression génique, principalement orchestrées par le facteur de transcription HIF-1 (HIF-1alpha et HIF-1beta). Il permet la transduction de nombreux gènes en hypoxie, comme le vegf. Le VEGF est un facteur angiogénique dont l'inhibition constitue un traitement anticancéreux en plein essor. L'objet de cette thèse porte sur l'étude du rôle des microARN (miARN) dans la régulation de l'expression des gènes codant pour HIF-1a et VEGF. Les miARN sont des petits ARN non codants, participant à la régulation de l'expression génique. Cette étude a permis de démontrer que 1- miR-16 inhibe la traduction du VEGF, via la liaison directe d'un site présent dans sa région 3'UTR. 2- miR-16 inhibe sélectivement la traduction du VEGF initiée à l'IRES-B. 3- miARN peut contrôler différents types d'initiation de la traduction et ce, au sein d'un même transcrits. 4- sur un plan physiologique, miR-16 inhibe l'expression des formes les plus diffusibles du VEGF. 5- miR-16 régule positivement l'accumulation de la protéine HiF-1a en s'associant à celle-ci. 6- cet effet positif passe par une voie originale puisqu'il s'agit de l'effet directe d'un miARN sur une protéine. 7- dans un modèle de xénogreffe, l'inhibition de miR-16 inhibe la croissance tumorale en bloquant l'accumulation et donc l'activité de HIF-1a dans les tumeurs. miR-16 est donc un miARN fondamental dans la régulation de l'angiogenèse puisqu'il opère dans une boucle de rétrocontrôle où il régule positivement l'expression de HIF-1a et négativement celle du VEGF dont une expression excessive qui serait délétère.TOULOUSE3-BU Sciences (315552104) / SudocSudocFranceF

Etude de nouveaux partenaires protéiques du facteur de croissance fibroblastique 2 humain (translokine et FIB)

TOULOUSE3-BU Sciences (315552104) / SudocSudocFranceF

Elaboration de vecteurs polycistroniques à stoechiométrie variable et application à la production d'anticorps recombinants

TOULOUSE3-BU Sciences (315552104) / SudocSudocFranceF