Influence of the polymorphisms CYP1A1*2A, GSTM1, GSTT1 e GSTP1*B genes on lung cancer susceptibility

Orientadores: Lair Zambon, Carmen Silvia Passos LimaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: A citocromo P- 450 1A1 (CYP1A1) é uma importante enzima do metabolismo carcinogênico, em virtude da regulação polimórfica, a CYP1A1 é um marcador genético promissor para susceptibilidade de certas malignidades, particularmente o câncer de pulmão (CP). A primeira variação detectada (chamada de m1 ou *2A) foi a transição de T?C no exon 7 com 1194pb, criando um sítio de clivagem para a enzima MspI. Esta alteração foi mais prevalente em Asiáticos do que em Caucasóides. Os genes GSTM1, GSTT1 e GSTP1 vem sendo estudados extensivamente em relação ao CP, pois estão relacionados com a perda completa ou redução da atividade de certos xenobióticos metabolizados por enzimas. O genótipo variante Val/Val do gene GSTP1*B tem uma maior atividade para com o epóxido diol hidrocarbono e BPDE, portanto um menor potencial de detoxificação, resultando em um grande risco para o câncer. O objetivo deste estudo foi analisar a susceptibilidade dos genes polimórficos para o risco em CP e a correlação dos genótipos com as interações das variáveis clínicas. Para cumprir tais objetivos, o DNA genômico de 200 pacientes com CP e 264 doadores de sangue (controles), foram analisados por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e digestão enzimática. Freqüências similares da deleção homozigótica dos genes polimórficos isolados GSTM1 (45,5% vs 48,1% p= 0,14), GSTT1 (13,5% vs 12,9% p=0,54), GSTM1/T1 ambos nulos (6,0% vs 4,9% p=0,83), da variante Val/Val do gene GSTP1 (12,5% vs 11,4% p=0,87) e da variante CYP1A1*2A (5,5% vs 3,4% p= 0,69) foram observadas em pacientes e controles. Não foram observadas diferenças significativas entre as freqüências de todos estes genótipos. Os resultados sugerem que os genótipos isolados e combinados não influenciaram o risco para CP, mas podemos sugerir que na população Afro-Brasileira estudada, há indícios de uma associação dos genótipos hetero/ variante do gene CYP1A1*2A e GSTs possam levar a uma maior susceptibilidade para o CPAbstract: Cytochrome P-450 A1 (CYP1A1 ) is an important enzyme of carcinogen metabolism. Due to polymorphic regulation, CYP1A1 is a biomarker of genetic susceptibility to certain malignancies, especially lung cancer (LC). The first detected variation, named m1 or *2A, was a T-to-C transition in exon 7, with 1194bp, which produced a breakage point for the MspI enzyme. Originally, more Asians than Caucasians presented with LC. Intensive studies have shown that GSTM1, GSTT1 and GSTP1 genes are related to LC, which may lead to whole loss or certain hazard reduction. The GSTP1 Val/Val variant genotype has a strong activity, especially along with hydrocarbon diol epoxide and BPDE, leading to detoxification potency. The purpose of this study was to analyze the susceptibility of polymorphism genes to LC risk and the correlation of genotypes with clinical variations. In order to achieve these objectives, the genomic DNA of 200 patients with LC and 264 blood donors (controls) were analyzed through PCR and enzymatic digestion. Similar frequencies of homozygotic deletion of polymorphic isolated genes were observed in patients and controls, as follows: GSTM1 (45.5% vs 48.1%, p= 0.14), GSTT1 (13.5% vs 12.9%, p= 0.54), GSTM1/T1 both null (6.0% vs 4.9%, p= 0.83), GSTP1 gene Val/Val variant (12.5% vs 11.4%, p= 0.87) and the CYP1A1*2A variant (5.5% vs 3.4%, p= 0.69). The differences observed among the frequencies of all combined genotypes were not significant. The final results suggested that isolated and combined genotypes did not influence LC risk; on the other hand, there is a high susceptibility for LC in African-Brazilian people with CYP1A1*2A and GSTs hetero/variant genotypeMestradoClinica MedicaMestre em Clinica Medic

Analysis of a series of cases of non- small cell lung cancer, correlating clinical and therapeutic variables with EGFR and K-Ras genes and its protein expression

Orientador: Lair ZambonTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: câncer de pulmão é a neoplasia com maior taxa de mortalidade, apesar do tratamento agressivo com cirurgia e da evolução no tratamento com quimioterapia e radioterapia. Os derivados de cisplatina são considerados o padrão ouro de tratamento de pacientes Carcinoma de Pulmão Não Pequenas Células (CPNPC). Entretanto, o desenvolvimento da resistência à cisplatina é comum e constitui o principal obstáculo à cura de tumores sensíveis. Recentemente, o avanço do conhecimento sobre as estruturas moleculares tem permitido novos estudos clínicos, principalmente nas vias de sinalização de receptores de tirosina quinase, que resultaram no desenvolvimento de terapias alvo, como os inibidores de tirosina quinase (ITKs) e alguns anticorpos monoclonais. Os aspectos moleculares do carcinoma de pulmão são poucos conhecidos na nossa população. Por isso, este estudo teve o objetivo de analisar as frequências das mutações e expressões dos genes EGFR e K-Ras e correlacionar esses achados com os aspectos clínicos, além de avaliar a influência dessas mutações e/ ou expressões na resposta à quimioterapia e na sobrevida. Foram analisados 129 pacientes para as mutações nos exons 18 ao 21 do gene EGFR. Nove (7%) apresentaram mutações (6 com deleções no exon 19 E746_A750 e 3 com mutações de ponto em heterozigose no exon 21, L858R, CTG para CGG). Em relação ao gene K-Ras, foram analisados 126 pacientes para os códons 12 e 13. Três (2,4%) apresentaram mutações no códon 12 (GGT para TGT). A expressão do EGFR foi positiva em 49,2% dos 132 pacientes avaliados e a expressão do K-Ras em 63,2% de 136 pacientes. Por fim, 50 pacientes atenderam aos critérios de inclusão e exclusão e completaram os 4 ciclos de quimioterapia citotóxica. Destes, 6 tinham mutações no gene EGFR (4 com deleções no exon 19, E746_A750 e 2 com mutações de ponto em heterozigose no exon 21, L858R) com frequência de 12% e uma mutação no gene K-Ras códon 12, GGT para TGT (1/44=2,3%). Dos seis pacientes CPNPC com mutação no EGFR, a taxa de resposta à quimioterapia citotóxica foi de 83,33% (5/6 casos) contrastando significativamente com a resposta dos 44 casos restantes que foi de 34,1% (15/44 casos; p= 0,032). Por meio da análise multivariada, observou-se que pacientes com essa mutação apresentam uma taxa de resposta 9,67 vezes maior do que pacientes sem a mutação (p= 0,047 e IC 95%: 1,03 - 90,41). A mediana do tempo de sobrevida global do grupo que apresentava mutação do EGFR 19-21 foi 37,76 meses [IC95%: indefinido] e do grupo sem a mutação foi de 10,26 meses [IC95%: 6,81 ¿ 13,72] (p = 0,008 Log Rank Test). Não houve correlação significativa da mutação do gene K-Ras ou das expressões com os aspectos clínicos, resposta à quimioterapia ou sobrevida. Os achados deste estudo evidenciaram que os pacientes com mutação no gene EGFR respondem melhor à quimioterapia citotóxica e têm maior sobrevida global quando comparados aos pacientes sem mutaçõesAbstract: Lung cancer is the cancer with highest mortality rate, despite aggressive treatment with surgery and the evolution of treatment with chemotherapy and radiotherapy. Derivatives of cisplatin are considered the gold standard therapy for non-small cell lung cancer (NSCLC) patients. However, development of cisplatin resistance is common and constitutes the main obstacle for tumors sensitive cure. Recently, the advancement in knowledge of molecular structure has allowed new clinical studies, mainly in the receptor tyrosine kinase signaling pathways, which resulted in the development of targeted therapies, such as tyrosine kinase inhibitors (TKIs) and some monoclonal antibodies. Molecular aspects of lung carcinoma are little known in our population. Therefore, this study aimed to analyze the frequency of mutations and expressions of EGFR and K-Ras and correlate these findings with the clinical aspects, in addition to evaluating the influence of these mutations and/or expressions in chemotherapy response and survival. 129 patients were analyzed for the EGFR gene mutations at exons 18 to 21 and 9 patients (7%) presented mutations (6 with deletions at exons 19, E746_A750 and 3 with heterozygous point mutations at exon 21, L858R, CTG to CGG). In relation to the K-Ras gene, 126 patients were analyzed at codons 12 and 13 and 3 patients (2.4%) presented mutations at codon 12 (GGT for TGT). The expression of EGFR was positive in 49.2% of 132 patients evaluated and the expression of K-Ras in 63.2% of 136 patients was positive as well. Finally, 50 patients met inclusion and exclusion criteria and completed the 4 cycles of cytotoxic chemotherapy. Of these, 6 were EGFR gene mutations (4 with deletions at exon 19, E746_A750 and 2 with heterozygous point mutations at exon 21, L858R, CTG to CGG) with 12% frequency and 1 mutation in the K-Ras gene, codon 12, GGT for TGT (1/44 = 2.3%). Of the six patients with EGFR mutation in NSCLC, the response rate to cytotoxic chemotherapy was 83.33% (5/6 cases), in significantly contrasting with the response of the 44 remaining cases which was 34.1% (15/44 cases; p = 0.032). Using multivariate analysis, it was observed patients with this mutation have a response rate of 9.67 times greater than patients without the mutation (p = 0.047 and 95% CI: 1.03-90.41). The median overall survival time of the group that presented the EGFR mutation 19-21 was 37.76 months [95% CI: undefined] and the group without the mutation was 10.26 months [95% CI: 6.81-13.72] (p = 0.008 Log Rank Test). There was no significant correlation of mutation of K-Ras gene or the expressions with clinical aspects, response to chemotherapy or survival. The findings of this study showed patients with mutations in EGFR gene respond better to chemotherapy and have greater cytotoxic overall survival when compared with patients without mutationDoutoradoClinica MedicaDoutora em Ciência

Production of dendritic cell vaccines using different methods with equivalent results: Implications for emerging centers

Introduction: Dendritic cell (DC) vaccines have demonstrated good efficacy in preventing relapse and in increasing survival of patients affected by a variety of both solid and hematological tumors. Most protocols used to generate these cells involve the automated separation of peripheral blood monocytes from patients. This approach requires specialized equipment, which elevates the cost of this type of therapy, potentially limiting the widespread access to patients. Method: In this study, we compare the yield and quality of dendritic cells generated from monocytes and isolated by an automated method or by manual methods using gradient centrifugation. Results: The results demonstrate the equivalence of the 3 methods in relation to the yield and final quality of the product, however with considerable differences between the costs of these procedures. In addition, this study also demonstrates the feasibility of the antigenic pulse with autologous tumor cell lysates, constituting a source of antigens, not only easily obtained and manipulated, but also specific to the patient's tumor. Conclusion: These findings may have important implications for emerging centers interested in using this medical approach and potentially increase the access of a greater number of patients to this therapeutic option