Efeito da adição de colesterol sobre a viabilidade e fertilidade de espermatozóides equinos refrigerados

A inseminação artificial com sêmen refrigerado é uma biotecnia imprescindível para os programas reprodutivos de equinos. Entretanto, durante a refrigeração o espermatozoide pode sofrer danos irreversíveis que irão prejudicar os índices de fertilidade. A incorporação de colesterol ligado a ciclodextrina (CLC) é uma estratégia de aumentar a resistência espermática em baixas temperaturas. No entanto, estudos anteriores tem sugerido que o colesterol presente em altos níveis na membrana plasmática pode interferir no processo de capacitação e consequentemente de fertilização. Para isso, foi realizado um trabalho dividido em cinco experimentos. No experimento 1 o objetivo foi determinar a concentração mais adequada de CLC para a utilização na refrigeração de espermatozoides equinos. No experimento 2 o objetivo foi comparar as temperaturas de 15º C e 5º C para refrigeração de espermatozoides equinos tratados com CLC. No experimento 3 o objetivo foi verificar a influência da adição de CLC sobre a qualidade do sêmen refrigerado de garanhões bad cooler e good cooler. No experimento 4 o objetivo foi avaliar a influência da adição de CLC sobre a ocorrência de reação acrossomal. O objetivo do experimento 5 foi avaliar a fertilidade de espermatozoides refrigerados de garanhões bad cooler (BC) e good cooler (GC) tratados com CLC. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 24 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, cada ejaculado foi dividido em quatro grupos: controle (C) e tratado com 1 mg (CLC-1), 1,5 mg (CLC-1,5) e 2 mg (CLC-2) de CLC/120 x 106 de espermatozoides e refrigerado por 48 horas a 5º C. Para o experimento 2 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Cada ejaculado foi diluído conforme o experimento 1, dividido em quatro grupos: C e CLC-1,5 refrigerados a 15º C e a 5 º C por 24 horas. Para o experimento 3 foram utilizados...Artificial insemination with cooled semen is an invaluable biotechnique for equine reproductive programs. However, the cooling process may cause irreversible damage to spermatozoa, thus reducing fertility rates. The incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to the plasmatic membrane is an strategy to increase sperm resistance to low temperatures. However, previous studies have suggested that high levels of cholesterol may interfere with capacitation process and, consequently, with fertilization. To this end, a study was performed in five experiments. In experiment 1, the aim was to determine the best CLC concentration for the purpose of cooling equine spermatozoa. In experiment 2, the aim was to compare the temperatures of 15 ºC and 5 ºC for cooling equine semen treated with CLC. In experiment 3, the aim was to assess the influence of CLC addition for cooled semen quality of bad cooler (BC) and good cooler (GC) stallions. In experiment 4, the aim was to evaluate the influence of CLC addition for the occurrence of acrosome reaction. The aim of experiment 5 was to evaluate the fertility of cooled CCL-treated semen from BC and GC stallions. In experiment 1, two ejaculates from 24 stallions were used. After dilution with Botu-Sêmen® to a concentration of 50 x 106 cells/mL, each ejaculate was divided into four groups: control (C) and treated with 1 mg (CLC-1), 1.5 mg (CLC-1.5) and 2 mg (CLC-2) and 2 mg (CLC-2) of CLC/120 x 106 cells, and cooled for 48 hours at 5 ºC. For experiment 2, two ejaculates from 12 stallions were used. Each ejaculated, after dilution according to experiment 1, was divided into 4 groups: C and CLC-1.5 cooled at 15 ºC and 5 ºC for 24 hours. For experiment 3, two ejaculates from nine GC and nine BC stallions were used. The ejaculates were diluted according to the previous experiments and divided into two groups: C and CLC-1.5 cooled at 5 ºC for 48 hours. In experiments 1, 2 and 3, sperm ..

Utilização do colesterol na criopreservação de espermatozóides na espécie equina: uma revisão

Semen biotechnology provides several advantages to current reproductive programs. The benefits include the possibility of transporting semen over long distances, increased use of genetically superior stallions, and reducing the risk of spreading diseases to both the mare and the foal. Even with these advances, there is still a wide disparity among stallions regarding semen quality due to the processes of cryopreservation, which generates significant variation in fertility rates. In this regard, studies have been conducted to test new substances that can be incorporated into sperm and confer increased resistance against injuries caused by cooling and freezing. The addition of cholesterol bound to cyclodextrin (CLC) in vitro has been suggested as a promising alternative for stallions known to have poor semen viability after cryopreservation. However, to date the results regarding fertility do not justify commercial applicability of this approach. The objective of this review is to compile articles on the effect of adding cholesterol into the membrane of cryopreserved equine sperm.La biotecnología para el manejo del semen proporciona varias ventajas en los programas reproductivos actuales, algunas de las cuales incluyen: la posibilidad de transportar el semen a través de grandes distancias, el aumento de la utilización de reproductores genéticamente superiores y la disminución de riesgos de diseminación de enfermedades para la yegua y potro. A pesar esto, aún existe una gran desigualdad entre los sementales con relación a la calidad espermática en lo referente a los procesos de criopresevación , lo que genera grandes variaciones en las tasas de fertilidad. En ese sentido, se han desarrollado estudios con el objetivo de probar substancias que puedan ser incorporadas a los espermatozoides y que tengan condiciones de proporcionar una mayor resistencia contra lesiones generadas por refrigeración y congelación. La adición de colesterol unido a la ciclodextrina (CLC) in vitro, ha demostrado ser una alternativa prometedora para sementales con baja viabilidad después de la criopreservación. Sin embargo, hasta el momento los resultados de fertilidad no justifican la aplicación comercial de esta técnica. El objetivo de esta revisión es recopilar artículos sobre el efecto de la adición del colesterol a la membrana de los espermatozoides criopreservados de equinos.A biotecnologia do sêmen proporciona inúmeras vantagens para os atuais programas reprodutivos. Possibilidade de transporte de sêmen a longas distâncias, incremento da utilização de reprodutores geneticamente superiores e diminuição dos riscos de disseminação de doenças para a égua e o potro são alguns dos benefícios proporcionados. Apesar dos avanços, existe ainda uma grande disparidade entre garanhões em relação à qualidade seminal frente aos processos da criopreservação, fato que gera grandes variações nas taxas de fertilidade. Nesse sentido, estudos têm sido desenvolvidos a fim de testar substâncias que possam ser incorporadas aos espermatozóides e que tenham condições de conferir maior resistência frente às injúrias geradas pela refrigeração e congelação. A adição de colesterol ligado à ciclodextrina (CLC) tem demonstrado in vitro ser uma alternativa promissora para os garanhões conhecidos por possuírem baixa viabilidade após a criopreservação. No entanto, até o momento os resultados de fertilidade não justificam a aplicação comercial dessa técnica. O objetivo dessa revisão é de compilar artigos sobre o efeito da adição do colesterol à membrana dos espermatozóides equinos criopreservados

Evaluation of the times for performing sexual behaviors in Creole stallions under a controlled collection regime

Nesta Pesquisa investigou- se o período envolvido no comportamento sexual de garanhões Crioulos em sistema de coleta controlada. Os pesquisadores analisaram 44 coletas de 15 garanhões durante a temporada reprodutiva 2021/2022. Eles descobriram que os tempos de reação variavam muito entre os animais, sendo o comportamento com maior variação as ereções (0 a 601 segundos), com média de 88 segundos. Este estudo destaca a importância de considerar as características individuais de um garanhão, tais como: B. Para melhorar o resultado do processo de coleta de sêmen, as preferências e as condições ambientais da égua devem ser consideradas

Biometria testicular por medidas ultrassonográficas em garanhões da raça crioula e sua relação com a produção espermática

Objetivo descrever as biometrias testiculares por meio da ultrassonografia em garanhões da raça crioula e avaliar a utilização dos cálculos de estimativas de produção de espermatozoides a partir dovolume testicular

Determining the gestational age of crioulo mares based on a fetal ocular measure

The practice of covering in herds is often used in Crioulo breeding farms, thus not allowing the determination of ovulation dates and the early detection of pregnancies. This fact complicates the estimation of gestational age after 70 days of conception. This study aimed to evaluate the diameter of the fetal orbits of Crioulo mares to develop a formula to estimate a gestational date. Measurements of 164 fetal ocular orbits were performed in 124 Crioulo mares with gestational ages ranging between 119 and 341 days. The current study observed a linear growth pattern of Crioulo fetal orbits up to 341 days of gestation. Thus, obtaining a suitable linear regression model to determine the gestational age of Crioulo mares based on fetal ocular orbit diameter measure is possible. The obtained model was y = 8.3756x + 11.90, where y represents the gestational age in days, and x represents the diameter of the fetal ocular orbit in millimeters. This formula had anr2 of 0.985 (P < .001). We conclude that this model allows researchers and veterinarians to accurately estimate the gestational age of Crioulo mares between 4 and 11months of pregnancy. © 2013 Elsevier Inc

Evaluation of Sperm Kinetics and Plasma Membrane Integrity of Frozen Equine Semen in Different Storage Volumes and Freezing Conditions

In the present study, different freezing systems (Styrofoam box and Mini Digitcool ZH 400) and storage volumes (0.5- and 0.25-mL straws) were compared with regard to sperm kinetics and plasma membrane integrity of frozen and thawed semen. For that, three ejaculates from four animals were frozen in Styrofoam box and Mini Digitcool ZH 400 machine. The 0.5-mL straws were thawed at 46°C for 20 seconds, and the 0.25-mL straws were thawed at 46°C for 12 seconds. Statistical analysis was performed using program R of descriptive analysis box plot, followed by analysis of variance using PROC MIXED of SAS 9.1 package. Variances of 5% were considered as different. There was no interaction between the straw sizes and volumes; however, statistical differences were observed between the semen storage volumes. The 0.5-mL straws had higher total motility (%), progressive motility (%), average path velocity (μm/s), straight-line velocity (μm/s), curvilinear velocity (μm/s), and rapid sperm percentage (%) than the 0.25-mL straws. However, plasma membrane integrity analysis did not differ between the two straws. Thus, it is possible to conclude that equine sperm cryopreserved in 0.5-mL straws has better sperm kinetics than when stored in 0.25-mL straws. Additionally, it is possible to conclude that automated systems that enable faster freezing rates result in a seminal quality that is similar to the one obtained by the conventional system using Styrofoam boxes. © 2013 Elsevier Inc