Fetal bovine serum induces neutrophils migration into the peritoneal cavity of mice pretreated with dexamathasone

O presente trabalho demonstrou a existencia da atividade de induzir a migracao de neutrofilos (na presenca de dexametasona) no SFB e atraves de 2 ou 3 processos de purificacao tentou-se isolar e caracterizar este(s) componente(s). A fracao SFB/Blue- (nao adsorvida a resina), obtida apos cromatografia de SFB em resina Blue-Sepharose, apresentou a atividade de induzir a migracao de neutrofilos na cavidade peritoneal de camundongos pre-tratados com dexametasona (atividade MNCF-simile). Os efluentes correspondentes aos picos 7, 8, 9 e 11, obtidos apos cromatografia em RP-HPLC do SFB/Blue-, apresentaram a atividade biologica MNCF-simile. As proteinas majoritarias presentes nestes efluentes tiveram seus N-terminais determinados por sequenciamento automatico e corresponderam a albumina (pico 7), fetuina (picos 8 e 9) e alfa 1-antitripsina (pico 11). Outros quatro efluentes nao apresentaram a atividade MNCF-simile. As proteinas do soro, fetuina e albumina, disponiveis comercialmente, tiveram sua atividade testada e verificou-se que, embora elas induzam a migracao de neutrofilos na cavidade peritoneal de camundongos, quando estes foram pre-tratados com dexametasona houve inibicao da migracao de neutrofilos. Portanto, as atividades observadas nos efluentes correspondentes aos picos 7, 8 e 9, que apresentaram estas proteinas como componente principal, podem conter outros componentes co-purificados ou apresentar uma forma diferente da proteina majoritaria, capaz de induzir a migracao de neutrofilos. A elucidacao dos fatores como MNCF e MNCF-simile aqui descritos e seu mecanismo preciso de acao, bem como sua participacao na fisiopatologia da reacao inflamatoria, sao fundamentais para a exploracao de uma alternativa terapeutica aos glicocorticoides como agentes antiinflamatoriosBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Purificação e caracterização química e cinética de dois inibidores de tripsina da semente de Sechium edule.

BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar

Métodos de cultivo celular são convenientes na realização de análises funcionais de alterações/interações protéicas das células neuronais, auxiliando a decifrar o interactoma de proteínas chaves na neurogênese de doenças do Sistema Nervoso Central. Por esse motivo, culturas de neurônios e neuroesferas isolados do córtex cerebral aviar representam um modelo acessível para o estudo de diversas doenças neurológicas, tal como a epilepsia. A espécie aviar apresenta peculiaridades em seu proteoma neuronal, visto a presença de uma expressão diferenciada de proteínas chaves no metabolismo energético cerebral, algumas destas (VDAC1 e VDAC2) desempenham papel importante na compreensão do mecanismo da epilepsia refratária. A metodologia estabelecida no presente estudo obteve cultivo de neuroeferas, onde as células cresceram tipicamente em aglomerados atingindo, dentro de 7 dias, o diâmetro ideal de 100-200 µm. A diferenciação celular das neuroesferas foi obtida após a aderência destas às placas tratadas com poli-D-lisina, evidenciada pela migração de fibras do interior da neuroesfera. Ao contrário das neuroesferas, os neurônios em cultivo extenderam seus neuritos após 11 dias de isolamento. Tal modelo in vitro pode ser utilizado com sucesso na identificação das variáveis neuroproteômicas, propiciando uma avaliação global das alterações dinâmicas e suas interações protéicas. Tal modelo pode ter aplicações em estudos dos efeitos de indutores da morte celular e bloqueadores de canais de membrana mitocondriais em proteínas chaves do metabolismo energético cerebral