Tentoxin has at least two binding sites on CF1 and ϵ-depleted CF1 ATPases isolated from spinach chloroplast

AbstractA new procedure for synthesis of 14C-labeled tentoxin [14C-MePhe[(Z)Δ]3-tentoxin], with a high specific activity, is described. Binding experiments with CF1 or CF1-ϵ isolated from spinach chloroplast have been carried out using equilibrium dialysis technique. The results show the presence of two classes of binding sites. The association constants of the two major binding sites were derived from non-linear fitting of the binding curves. At 4°C, the first binding site has a value of Ka1 = 8.2 × 105 M−1 in CF1 and 8.7 × 105 M−1 in CF1-ϵ, while the second binding site has lower affinity with Ka2 = 1.5 × 104 M−1 in CF1 and 2.3 × 103 M−1 in CF1-ϵ

Flash-induced ATP synthesis in pea chloroplasts in relation to proton flux

International audienceChloroplasts extracted from preilluminated pea seedling leaves have an active ATP synthase. Single turnover flashes induce ATP synthesis in these chloroplasts. This synthesis has been measured by the luminescence of the luciferin-luciferase assay system and the absorbance changes at 515 nm monitored to determine the concomitant proton flux through the ATP-synthase. Variations in the ratio H$^+$/ATP are observed and can be explained by the way ATP synthase is operating. The newly synthesized ATP molecules remain bound to the enzyme, and have variable probabilities to be hydrolysed or released from the enzyme, dependent upon the energized state of the membranes. The lowest value found for the ratio, H$^+$/ATP, is 1.90 $\pm$ 0.55, which should be very close to the true value

Mise en scène de l'évolution au musée : problèmes et parti pris

International audienceDepuis leur création au XV e siècle, les musées et les expositions, depuis le XX e siècle, mettent en scène un parti pris épistémologique 1. C'est ainsi que du cabinet de curiosités à la présentation exhaustive de collections méticuleusement classées selon la nomenclature linnéenne, la mise en exposition doit être interprétée comme un témoignage scientifique engagé et dynamique. De nos jours, la grande majorité des musées d'histoire naturelle municipaux a au moins un siècle d'existence (et les plus anciens en ont deux). Les conservateurs qui se sont succédé à leurs têtes ont complété les collections avec plus ou moins de bonheur en fonction des modes du moment, de leurs spécialisations ou de leurs marottes, des opportunités d'achats ou de legs, du résultat de leurs propres collectes, de leurs relations scientifiques, de la dynamique des sociétés savantes. Au fil des années, leurs collections en sont alors devenues plus éclectiques, et surtout plus hétéroclites 2. Aujourd'hui, la capacité d'attraction des musées dépend directement de leur capacité à se distinguer des autres, à offrir un ensemble cohérent et fort qui soit, au plan national et international, remarquable, exceptionnel justifiant par là le déplacement des habitants et des touristes par ailleurs déjà extrêmement sollicités. Car la concurrence ne se joue plus au niveau local, mais crée une compétition entre des établissements engoncés dans des bâtiments séculaires peu opérationnels, encombrés par l'ampleur des collections accumulées au cours des années, avec des réalisations plus récentes et mieux adaptées à l'accueil et au goût du public, offrant tous les artifices et les artefacts de la modernité 3. Ainsi, les musées doivent jouer de leurs spécificités, en accordant davantage d'attention à leur propre histoire et à la place qu'ils occupent dans l'histoire des sciences. « Autrement dit, il nous semble que les musées auraient intérêt à miser sur ce qui les distingue les uns des autres, à rendre visible et lisible ce qui rend chacun d'eux unique, bref à dégager, à construire et à affirmer leurs identités, notamment en engageant une réflexion sur ce que l'on pourrait appeler le projet d'établissement d'un musée » 4

Binding and Exchange of Nucleotides on the Chloroplast Coupling Factor CF1_1. The Role of Magnesium

International audienceOn the soluble part of the coupling factor (CF$_1$), extracted from spinach chloroplasts, three nucleotide-binding sites are identified. Three ADP are bound per CF$_1$ when the enzyme is incubated with ADP either with or without Mg$^{2+}$. Two ADP and one ATP are bound per CF$_1$ when the enzyme is incubated with a limiting concentration of ATP, in the presence of Mg$^{2+}$. At high ATP concentration, in the presence of Mg$^{2+}$, one free ATP exchanges with one bound ADP and two ATP and one ADP remain bound per CF$_1$. When Mg$^{2+}$ is omitted from the incubation medium of ATP and CF$_1$, only two ADP and around 0.5 ATP are bound per CF$_1$. The three nucleotide binding sites of CF$_1$ fall into two different and independent categories according to the ability of the bound nucleotides to be exchanged with free nucleotides. On one site the bound ADP is difficult to exchange. On the other two sites, the bound nucleotides, ADP or ATP, are readily exchangable. We propose that the two exchangeable sites form the catalytic part of the enzyme where ATP is hydrolyzed. When ATP concentration is high enough, in the presence of Mg$^{2+}$, one ATP displaces one bound ADP and allows the ATP hydrolysis to proceed. We propose too that the site where ADP is difficult to exchange may represent the 'tight' ADP-binding site, different from the catalytic ones, which becomes exchangeable on the CF$_1$ in vivo when the thylakoid membranes are energized by light, as stressed by Bickel-Sandkotter and Strotman [(1976) FEBS Lett. 65, 102-106]

The prokaryotic thermophilic TF 1 -ATPase is functionally compatible with the eukaryotic CF o -part of the chloroplast ATP-synthase

AbstractThe ATP synthase from chloroplasts, CFo · F1, was reconstituted into liposomes, from which most of CF1 was removed by a short treatment with guanidinium chloride. ATP-dependent proton uptake was restored with these CFo-liposomes even better by the addition of the bacterial TF1- than of the related CF1-part. This proton uptake was prevented by tentoxin, a specific inhibitor of the CF1-ATPase, in these CFo · F1-liposomes, but not in the hybrid CFo · TF1-liposomes. Venturicidin, a specific inhibitor of proton flow through CFo, was able to block it in both the hybrid CFo· TF1-liposomes and reconstituted CFo· F1-liposomes. These results indicate that the bacterial TF1-part binds to the eukaryotic CFo-part of four subunits forming a functional CFo · TF1-ATPase