Evaluation of the immunomodulatory potential of Hsp65-producing Lactococcus lactis in Cutaneous Leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis

Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2018-12-10T15:53:27Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2018-12-11T13:06:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Priscila Valera Guerra. Avaliação...2018.pdf: 1982385 bytes, checksum: cc72cf097f005a54577f901ade4afb31 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2018-12-11T13:06:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Priscila Valera Guerra. Avaliação...2018.pdf: 1982385 bytes, checksum: cc72cf097f005a54577f901ade4afb31 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2018Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – CAPES; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqFundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.INTRODUÇÃO: A Leishmaniose cutânea e mucosa é uma enfermidade negligenciada causada pela Leishmania braziliensis (L. braziliensis), que cursa com lesões cutâneas decorrentes da inflamação exacerbada induzida pela presença do parasita no tecido cutâneo. Imunologicamente, a inflamação exacerbada é caracterizada pela indução de uma resposta Th1, acompanhada de altos níveis de IFN-gamma e baixos de IL-10. Os Lactococcus lactis (L. lactis), são bactérias ácido lácticas Gram positivas e não patogênicas. A forma recombinante de L. lactis (L. lactis-Hsp65) corresponde à bactérias geneticamente modificadas que produzem e secretam a proteína de choque térmico 65 (Hsp65) derivada da Mycobacterium leprae. Nos últimos anos, tem sido demonstrado que a Hsp65 desenvolve um papel importante na modulação imune, controlando, principalmente, respostas autoimunes e inflamatórias. A atividade imunomodulatória da Hsp65 está relacionada com a inibição da produção de TNF-α e IFN-γ, além do incremento na secreção de IL-10 pelas células T. De fato, já foi demonstrado que a administração oral de Hsp65 possui um importante papel na ativação de células T reguladoras presentes na mucosa intestinal. OBJETIVO: O principal objetivo deste trabalho foi avaliar a administração oral de L. lactis produtor de Hsp65 como um potencial imunomodulador em um modelo experimental de leishmaniose cutânea. MATERIAL E MÉTODOS: Camundongos BALB/c receberam por via oral cepas de L. lactis recombinantes, produtores ou não produtores de HSP65, por um período de 4 dias consecutivos. Dez dias após a administração das bactérias, os animais foram infectados com L. braziliensis (Lb) na derme orelha esquerda. Dois dias antes da infecção, dois grupos receberam uma administração intraperitoneal de PAM3CSK4 (PAM, agonista de TLR2), um que recebeu a cepa recombinante L. lactis-HSP65 e o outro não. RESULTADOS: A avaliação semanal da espessura da lesão na orelha mostrou que durante a infecção, os animais que receberam a L. lactis produtor de HSP65, associado ou não ao PAM, apresentaram lesões menores e com resposta inflamatória menos intensa comparados aos animais dos grupos controles (Lb, Vazio e PAM). Além disso, a carga parasitária, tanto na orelha quanto no linfonodo drenante, foi reduzida ao final do experimento nos animais administrados com L. lactis produtor de Hsp65. Também foi observada uma redução significativa na destruição tecidual, assim como elevada produção de IL-10 e baixa de IFN-γ nos linfonodos drenantes principalmente pelos animais que receberam a cepa L. lactis produtor de Hsp65, associada ao PAM. A administração da HSP65 também induziu o aumento de células expressando CD4+Foxp3+ e CD4+LAP+ (TGF-β associado à membrana) nos linfonodos drenantes e mesentéricos após a infecção. CONCLUSÕES: Nossos resultados sugerem que a administração de L. lactis produtor de Hsp65 leva à modulação da resposta inflamatória, com redução da inflamação e aumento da tolerância oral. Assim, L. lactis produtor de Hsp65 pode ser visto como um candidato na profilaxia, não somente de doenças autoimunes, mas também de doenças inflamatórias como a leishmaniose cutânea.INTRODUCTION: Cutaneous and mucosal leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis, is characterized by the induction of a Th1 response that results in a strong inflammatory reaction. The exacerbated inflammation observed in CL lesions might be controlled by anti-inflammatory responses. Lactococcus lactis, are nonpathogenic and Gram positive lactic acid bacteria and Lactococcus lactis HSP65 are genetically modified bacteria that produces the 65kDa heat shock protein (HSP65), which elicit immunomodulatory activity by inhibiting TNF-α and IFN-γ production and increase IL-10 secretion by T cells. Hsp65 also has a strong effect on induction of regulatory T cells in the gut, when ingested by oral administration. It has been demonstrated that Hsp65 play a major role in immune modulation, controlling, for instance, inflammatory and autoimmune responses. OBJECTIVE: In this study, our main objective is to test oral administration of Lactococcus lactis producing Hsp65, as a potential immunomodulatory in experimental model of cutaneous leishmaniasis. MATERIAL AND METHODS: BALB/c mice received by oral route recombinant Lactococcus lactis strains which produces or not Hsp65 for 4 consecutive days. Ten days after administration, animals were infected in the left ear with Leishmania braziliensis. Two days before infection, one of the groups that received recombinant L. lactis also was injected by intraperitoneal via with PAM3CSK4 (TLR2 agonist). RESULTS: Evaluation of ear thickness showed that during infection, mice treated with L. lactis Hsp65 associated or not with Pam showed smaller lesions with a less intense inflammatory response compared to control groups (Lb, “Empty” and PAM). In addition, parasite load was lower at the end of the experiment in Hsp65 treated groups, both in ear and draining lymph nodes. A tissue destruction reduction was observed, as well as higher IL-10 and lower IFN- γ production by draining lymph nodes mainly by the Hsp65 treated animals, associated with PAM. HSP65 administration also induced increase of regulatory cells expressing CD4+LAP+ (membrane associated-TGF-β) and CD4+ Foxp3+ in draining and mesenteric lymph nodes after infection. CONCLUSION: Our data suggest that administration of L. lactis Hsp65 producer may lead to an inflammatory response modulation, with inflammation reduction and oral tolerance increased. In addition, L. lactis Hsp65 producer can be seen as a candidate for prophylaxis, not only for autoimmune, but also for inflammatory diseases such as cutaneous leishmaniasis

Protection mediated by chemokine CXCL10 in BALB/c mice infected by Leishmania infantum

Submitted by Sandra Infurna ([email protected]) on 2017-11-21T16:14:06Z No. of bitstreams: 1 helene_barbosa_etal_IOC_2017.pdf: 809191 bytes, checksum: 17bbc51b8ce0b2b2e57bc885230ca766 (MD5)Approved for entry into archive by Sandra Infurna ([email protected]) on 2017-11-21T16:20:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 helene_barbosa_etal_IOC_2017.pdf: 809191 bytes, checksum: 17bbc51b8ce0b2b2e57bc885230ca766 (MD5)Made available in DSpace on 2017-11-21T16:20:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 helene_barbosa_etal_IOC_2017.pdf: 809191 bytes, checksum: 17bbc51b8ce0b2b2e57bc885230ca766 (MD5) Previous issue date: 2017Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Patologia e Medicina Legal. Fortaleza, CE, Brasil.Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Patologia e Medicina Legal. Fortaleza, CE, Brasil.Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Patologia e Medicina Legal. Fortaleza, CE, Brasil.Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Patologia e Medicina Legal. Fortaleza, CE, Brasil.Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem. Departamento de Análise Clínica. Fortaleza, CE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Estrutural. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Patologia e Medicina Legal. Fortaleza, CE, Brasil.Visceral leishmaniasis (VL) caused by Leishmania infantum is characterised by the loss of the ability of the host to generate an effective immune response. Chemokines have a direct involvement in the pathogenesis of leishmaniasis, causing a rapid change in the expression of these molecules during infection by Leishmania

Poly(anhydride) nanoparticles containing cashew nut proteins can induce a strong Th1 and Treg immune response after oral administration

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2018-05-10T17:17:28Z No. of bitstreams: 1 Pereira M Poly(anhydride) nanoparticles containing....pdf: 1447772 bytes, checksum: 33e8c1ff21e8bdc1a7a57d3ad03ece44 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2018-05-10T17:27:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Pereira M Poly(anhydride) nanoparticles containing....pdf: 1447772 bytes, checksum: 33e8c1ff21e8bdc1a7a57d3ad03ece44 (MD5)Made available in DSpace on 2018-05-10T17:27:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira M Poly(anhydride) nanoparticles containing....pdf: 1447772 bytes, checksum: 33e8c1ff21e8bdc1a7a57d3ad03ece44 (MD5) Previous issue date: 2018Brazilian Ministry of Science and Technology – MCTI (SisNANO/LARNano-UFPE, CNPq # 402282/2013-2) and FACEPE (APQ #0361-4.03/14).Federal University of Pernambuco. Immunopathology Keizo-Asami Laboratory. Recife, PE, BrazilUniversity of Pernambuco. Institute of Biological Sciences. Recife, PE, BrazilFederal University of Pernambuco. Immunopathology Keizo-Asami Laboratory. Recife, PE, BrazilUniversity of Navarra. Nanomedicines and Vaccines. Research Group. Pamplona, SpainFundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita-Hospedeiro Interação e Epidemiologia. Salvador, BA, BrasilUniversity of Navarra. Nanomedicines and Vaccines. Research Group. Pamplona, SpainFundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita-Hospedeiro Interação e Epidemiologia. Salvador, BA, BrasilUniversity of Navarra. Nanomedicines and Vaccines. Research Group. Pamplona, SpainFederal University of Pernambuco. Immunopathology Keizo-Asami Laboratory. Recife, PE, BrazilCashew nut allergy is the second most commonly reported tree nut allergy. Traditional allergen immunotherapy presents several clinical drawbacks that can be reduced by using nanoparticles-basedallergen-delivery systems, modulating the immune response towards a protective one. In this context, the goal of this work was to assess the potential of poly(anhydride) nanoparticles (NP) for cashew nut oral immunization. Cashew nut allergens-loaded nanoparticles (CNE-NP) were prepared by solvent displacement method. After nanoparticles characterization, oral immunomodulation ability was evaluated in BALB/c mice. Our results demonstrated that CNE-NP induced a higher Th1/Th2 ratio in comparison with animals immunized with free cashew nut proteins. Indeed, a decrease in splenic Th2 cytokines (IL-4, IL-5, and IL-13), and an enhancement of pro-Th1 (IL-12 and IFN-γ) and regulatory (IL-10) cytokines was observed. Furthermore, mice orally immunized with CNE-NP presented an increased expansion of CD4+ T regulatory cells, such as CD4+Foxp3+ and CD4+LAP+, in the mesenteric lymph nodes. In conclusion, oral immunization with a single dose of poly(anhydride) nanoparticles loaded with cashew nut proteins leaded to a pro-Th1 and Treg immune response. Furthermore, their immunomodulatory properties could be introduced as a new approach for management of cashew nut allergy