Rapid qualitative and quantitative analysis of proanthocyanidin oligomers and polymers by UPLC-MS/MS.

This paper presents the development of a rapid method with ultraperformance liquid chromatography–tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) for the qualitative and quantitative analyses of plant proanthocyanidins directly from crude plant extracts. The method utilizes a range of cone voltages to achieve the depolymerization step in the ion source of both smaller oligomers and larger polymers. The formed depolymerization products are further fragmented in the collision cell to enable their selective detection. This UPLC-MS/MS method is able to separately quantitate the terminal and extension units of the most common proanthocyanidin subclasses, that is, procyanidins and prodelphinidins. The resulting data enable (1) quantitation of the total proanthocyanidin content, (2) quantitation of total procyanidins and prodelphinidins including the procyanidin/prodelphinidin ratio, (3) estimation of the mean degree of polymerization for the oligomers and polymers, and (4) estimation of how the different procyanidin and prodelphinidin types are distributed along the chromatographic hump typically produced by large proanthocyanidins. All of this is achieved within the 10 min period of analysis, which makes the presented method a significant addition to the chemistry tools currently available for the qualitative and quantitative analyses of complex proanthocyanidin mixtures from plant extracts

Genetic and molecular basis of grass cell wall biosynthesis and degradability. II. Lessons from brown-midrib mutants

* Inra Poitou-Charentes, ERIST, Route de Saintes BP 6, 86600 Lusignan (FRA)International audienc

Genetic and molecular basis of grass cell wall biosynthesis and degradability. II. Lessons from brown-midrib mutants

* Inra Poitou-Charentes, ERIST, Route de Saintes BP 6, 86600 Lusignan (FRA)International audienc

Método para a Determinação de Ácidos Fenólicos na Parede Celular de Forragens Method for Phenolic Acid Determination in Forage Cell Wall

Há fatores que limitam a digestão das forragens tropicais e estão associados à dinâmica dos ácidos fenólicos da parede celular. Os estudos destes compostos em forragens podem ser facilitados pela disponibilidade de métodos sensíveis que permitam o processamento de grande número de amostras. No presente trabalho, descreve-se um método para a determinação de ácidos fenólicos na parede celular de forragens, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Bagaço de cana, capim-elefante e folhas de mandioca foram utilizados como amostras experimentais. Para remover substâncias solúveis de baixa massa molecular, foram testados etanol 80% e o detergente neutro, determinando seus efeitos sobre a recuperação das moléculas e benefícios no perfil cromatográfico. Para a obtenção dos ácidos fenólicos livres, as amostras foram solubilizadas em NaOH 1 mol/L, 20ºC por 24 horas. O método proposto foi adequado para a determinação de ácidos fenólicos, apresentando grande sensibilidade e produtividade no laboratório. Para minimizar os efeitos negativos da formação de sal resultante da neutralização ácida do extrato alcalino, sugere-se a diluição da amostra ou a injeção de pequeno volume (5 uL) no aparelho. O efeito da utilização de solventes como etanol 80% ou detergente neutro é distinto sobre as amostras das gramíneas e leguminosas. A quantidade de extrativos nas folhas de mandioca foi superior a do bagaço de cana e capim-elefante. A concentração de ácidos fenólicos foi pouco alterada pela ação dos solventes, sendo maior nas amostras de bagaço de cana e capim-elefante, em relação às folhas de mandioca. O método apresentado constitui-se em uma importante ferramenta para o estudo dos ácidos fenólicos na parede celular de forragens tropicais.<br>Factors that limit the digestion of tropical forages are associated to the dynamic of cell wall phenolic acids. The study of these compounds in forages may be facilitated by the availability of sensible methods that permit processing large amounts of samples. The present paper describes a method for determining phenolic acids in forage cell wall through high-performance liquid chromatography (HPLC). Sugar cane bagasse, elephant grass and cassava leaves were used as experimental samples. To remove soluble low molecular weight products, ethanol 80% and neutral detergent were essayed to determine their effects on the recovery of molecules and other benefits to chromatography profile. The sample solubilization with NaOH 1 mol/L, 20ºC for 24 hours, was used to obtain the free phenolic acids. The method described proved appropriate showing great sensibility and lab productivity. To minimize the effects of salt formation as a consequence of acid neutralization, sample dilution and reduced injection volumes (5uL) are suggested. The action of ethanol 80% and neutral detergent differ between grasses and legumes. The amount of extractives in cassava leaves was greater than in other materials.The method described in the present paper is an important tool to study phenolic acids in tropical forage cell wall