Phorbol-12-myristate-13-acetate is a potent enhancer of B cells with a granzyme B+ regulatory phenotype

IntroductionThe infusion of ex-vivo-generated regulatory B cells may represent a promising novel therapeutic approach for a variety of autoimmune and hyperinflammatory conditions including graft-versus-host disease.MethodsPreviously, we developed a protocol for the generation of a novel population of regulatory B cells, which are characterized by secretion of enzymatically active granzyme B (GraB cells). This protocol uses recombinant interleukin 21 (IL-21) and goat-derived F(ab)’2 fragments against the human B cell receptor (anti-BCR). Generally, the use of xenogeneic material for the manufacturing of advanced therapy medicinal products should be avoided to prevent adverse immune reactions as well as potential transmission of so far unknown diseases.ResultsIn the present work we demonstrated that phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA/TPA), a phorbol ester with a particular analogy to the second messenger diacylglycerol (DAG), is a potent enhancer of IL-21-induced differentiation of pre-activated B cells into GraB cells. The percentage of GraB cells after stimulation of pre-activated B cells with IL-21 and PMA/TPA was not significantly lower compared to stimulation with IL-21 and anti-BCR.DiscussionGiven that PMA/TPA has already undergone encouraging clinical testing in patients with certain haematological diseases, our results suggest that PMA/TPA may be a safe and feasible alternative for ex-vivo manufacturing of GraB cells

Long-term functional outcome and quality of life 2.5 years after thrombolysis in acute ischemic stroke

Schäbitz M, Möller L, Friedrich A, et al. Long-term functional outcome and quality of life 2.5 years after thrombolysis in acute ischemic stroke. Neurological Research and Practice. 2023;5(1): 62.**Background** Evaluation of outcome after stroke is largely based on assessment of gross function 3 months after stroke onset using scales such as mRS. Cognitive or social functions, level of symptom burden or emotional health are not usually assessed, nor are data available on long-term functional outcomes years after stroke. **Methods** Analysis of 1141 patients with AIS treated with IVT from two major German university hospitals between 2017 and 2020. Patient characteristics and short-term outcome were analysed from patient records. Long-term outcome of 228 patients with prior written informed consent was assessed via telephone survey using mRS and PROMs (EQ-5D-5L, EQ-VAS) 2.5 years after stroke. **Results** Predictors of excellent to good long-term outcome were younger age, event to door time ≤ 2 h, NIHSS ≤ 6 on admission and NIHSS ≤ 6 after IVT. Stroke recurrence was a negative predictor. Predictors of excellent quality of life at 2.5 years included age < 73 years, lower NIHSS after IVT, absence of hypertension. Quality of life was rated in all dimensions with a medium score of 1 and a medium EQ-VAS of 70, representing the good general health status of this stroke population. **Conclusion** Main predictors of an excellent to good long-term outcome and excellent QoL 2.5 years after stroke are younger age, lower NIHSS, and event to door time ≤ 2 h. Research on long-term outcome after disease and treatment is of utmost importance, as it has the ability to reveal the patient true functional outcome and quality of life and to provide information on the status of independence and self-esteem

Abstract-Nummer 159.

Schäbitz M, Klein N, Wulff L, et al. Geschlechter-spezifische Unterschiede bei Patienten und Patientinnen mit Thrombolysetherapie. In: Deutsche Gesellschaft für Neurologie, ed. Neurowoche 2022 - Abstracts. Berlin; 2022.Hintergrund: In den letzten Jahren wurde die Bedeutung des ischämischen Schlaganfalls bei Frauen sowohl im klinischen als auch im öffentlichen Gesundheitswesen zunehmend erkannt. Frauen haben aufgrund höherer Lebenserwartung eine höhere Schlaganfallinzidenz, postmenopausal einen Anstieg der Schlaganfallinzidenz, häufigere SchlaganfallRezidive und eine höhere Mortalität. Frauen erhalten eine schlechtere Versorgungsqualität gemessen an Qualitätsparametern der Schlaganfallversorgung und werden seltener nach medikamentösen Leitlinien behandelt. Unerwartet ist auch, dass Frauen seltener eine Thrombolyse erhalten als Männer. Ziele: Ziel war es, Geschlechter-spezifische Analysen der Prozess- und Behandlungsparameter sowie des Langzeit-Outcome in einem Maximalversorgerkrankenhaus bei Patient*Innen mit systemischer Thrombolysetherapie bei ischämischem Schlaganfall durchzuführen. Methoden: Wir analysierten retrospektiv demographische Daten, klinische Behandlungsparameter, neuroradiologische Parameter einschließlich Infarktvolumen, -lokalisation und -morphologie sowie das Ausmaß der zerebralen Mikroangiopathie. Es wurden Qualitätsparameter aller thrombolysierten Patient*Innen (N=815; 47,6 % Frauen) in einem großen deutschen Maximalversorger-Klinikum zwischen 01/2017 und 06/2020 ausgewertet. Das Langzeitergebnis wurde mittels standardisierter Telefonbefragung evaluiert. Ergebnisse: Frauen waren in unserer Kohorte signifikant älter als Männer (78,3±12,5 versus 72,4±13,1 Jahre; p<0,001). Sie waren seltener innerhalb der ersten zwei Stunden nach Symptombeginn in der Klinik (62,7 % vs. 70,7 %, p=0,030). Die door-to-needle time (DNT) war bei Frauen höher als bei Männern (Unterschied im Median 5 Minuten; Z=3,228; p=0,001). Frauen hatten höhere NIHSS Scores bei Aufnahme (Median 6 vs. 5; Z=4,636; p<0,001), hatten seltener einen Diabetes mellitus (18,3 % vs. 28,3 %; p=0,001) und eine höhere Komplikationsrate (40,7 % vs. 31,6 %; p=0,001). Es wurde bei Frauen seltener ein MRT durchgeführt (29,6 % vs. 40,8 %; p=0,001), jedoch häufiger bei durchgeführtem MRT ein Infarkt nachgewiesen (37,4 % vs. 25,9 %; p=0,037). Die Verlaufsparameter - gemessen mittels modified Rankin Scale sowie einem standardisierten, präferenzbasierten Verfahren zur Erhebung des Gesundheitszustands in fünf Dimension (EQ-5D-5LIndex) - ergab ein signifikant schlechteres Langzeit-Outcome bei Frauen. Aufgrund des signifikanten Altersunterschiedes erfolgten Alters-korrigierte Analysen. In der Gruppe der Patienten und Patientinnen bis einschließlich 78 Jahre (Median der Gesamtpopulation) hatten Frauen seltener einen Diabetes mellitus (16,8 % vs. 26,7 %; p=0,018) und häufiger einen Infarktnachweis im MRT (ohne Unterschied in der Häufigkeit der Durchführung) (38,3 % vs. 25,8 %; p=0,039). Bei Patienten und Patientinnen im Alter von 79-86 Jahren ohne Altersunterschied zwischen den Geschlechtergruppen zeigten Frauen einen signifikant höheren Anteil an kryptogenen Schlaganfällen (35,7 % vs. 14,0 %; p=0,002). Darüber hinaus hatten Frauen eine längere DNT (Median 46 vs. 37 Minuten; Z=2,815; p=0,005), hatten seltener einen Diabetes mellitus (17,4 % vs. 31,4 %; p=0,012), wiesen unterschiedliche Grade der zerebralen Mikroangiopathie auf (Abbildung 1) und zeigten ein schlechteres Langzeit-Outcome, gemessen am EQ-5D-5L-Index (Median 0,550 vs. 0,865; p=0,021). Schlussfolgerungen: Diese Studie zeigt, dass im klinischen Alltag signifikante Geschlechter-spezifische Unterschiede in der präklinischen und intrahospitalen Schlaganfallversorgung existieren. Diese sind zu einem gewissen Teil durch ein höheres Alter bei Frauen erklärbar. Alterskorrigiert weisen insbesondere ältere Frauen nach einer intravenösen Thrombolyse ein schlechteres Langzeitergebnis auf. Die Unterschiede beinhalten die DNT, die ätiologische Klassifikation und setzen sich im Langzeitergebnis fort. Diese Daten sind von großer Relevanz, um Frauen eine gleichwertige Qualität der Behandlung zu ermöglichen. Diese Daten legen nahe, die Prozesse auf Ursachen der Geschlechter-spezifischen Unterschiede zu überprüfen und diese – sofern möglich - zu korrigieren

Shared recognition of citrullinated tenascin-C peptides by T and B cells in rheumatoid arthritis

Tenascin-C (TNC), an extracellular matrix protein that has proinflammatory properties, is a recently described antibody target in rheumatoid arthritis (RA). In this study, we utilized a systematic discovery process and identified 5 potentially novel citrullinated TNC (cit-TNC) T cell epitopes. CD4+ T cells specific for these epitopes were elevated in the peripheral blood of subjects with RA and showed signs of activation. Cit-TNC–specific T cells were also present among synovial fluid T cells and secreted IFN-γ. Two of these cit-TNC T cell epitopes were also recognized by antibodies within the serum and synovial fluid of individuals with RA. Detectable serum levels of cit-TNC–reactive antibodies were prevalent among subjects with RA and positively associated with cyclic citrullinated peptide (CCP) reactivity and the HLA shared epitope. Furthermore, cit-TNC–reactive antibodies were correlated with rheumatoid factor and elevated in subjects with a history of smoking. This work confirms cit-TNC as an autoantigen that is targeted by autoreactive CD4+ T cells and autoantibodies in patients with RA. Furthermore, our findings raise the possibility that coinciding epitopes recognized by both CD4+ T cells and B cells have the potential to amplify autoimmunity and promote the development and progression of RA

Modeling pollen tube growth: Feeling the pressure to deliver testifiable predictions

The frequency and amplitude of oscillatory pollen tube growth can be altered by changing the osmotic value of the surrounding medium. This has motivated the proposition that the periodic change in growth velocity is caused by changes in turgor pressure. Using mathematical modeling we recently demonstrated that the oscillatory pollen tube growth does not require turgor to change but that this behavior can be explained with a mechanism that relies on changes in the mechanical properties of the cell wall which in turn are caused by temporal variations in the secretion of cell wall precursors. The model also explains why turgor and growth rate are correlated for oscillatory growth with long growth cycles while they seem uncorrelated for oscillatory growth with short growth cycles. The predictions made by the model are testifiable by experimental data and therefore represent an important step towards understanding the dynamics of the growth behavior in walled cells