Cornea disztrófiák genomikai vizsgálata = Genomics of corneal dystrophies

1. Monogénesen öröklődő disztrófiák közül az 5q31-hez kötött disztrófiákban szenvedő magyar betegek genetikai vizsgálatát végeztük el. Megerősítettük a TGFBI génben eddig ismert forró pontokat és egy új mutáció (F547S) patogenetikai szerepére hívtuk fel a figyelmet. 2. Keratoconusos és egészséges corneák génexpresszióját hasonlítottuk össze teljes genom microarray-k segítségével. 8 gén expressziójában találtunk eltérést, melyek közül a 6 ismert fehérjét kódoló gén expressziójának különbségeit qRT-PCR-ral is megerősítettük, és fehérjeszinten is igazoltunk eltéréseket a beteg és egészséges corneák között. A HS3ST1 és a GATA3 tekinthetők a legígéretesebb jelölt géneknek a keratoconus pathogenesisében. 3. Hasonló módszerekkel a limbális és centrális cornea epithelium mRNS-eit is összehasnlítottuk. Immunfluoreszcenciás vizsgálatok alapján a SPON1, a PHLDA1, és az ITM2A potenciális őssejt markerek lehetnek. 4. A centralis corneában fokozottnak találtuk a thrombospondin-1 expresszióját, melynek cornealis angiogenezist gátló szerepe ismert. Kimutattuk, hogy az újdonképződött cornealis erek környezetében a thrombospondin szint csökkent és jelen van az FXIIIa fehérje. Cornea sejttenyészetekben kimutattuk, hogy FXIIIa hatására csökken a thrombosponin expresszió fehérje és mRNS szinten is. A FXIIIa az erek környezetében található CD11b+ monocytákból szabadulhat fel. | 1. We analyzed the mutations occurring in patients suffering from 5q31 linked corneal dystrophies. The role of the previously described mutational hot spots could be verified and the pathogenic role of a new mutation (F547S) was shown 2. The epithelial gene expression profiles of keratoconus and healthy corneal epithelia were compared using whole human genome microarrays. After analyzing the results from 2 independent microarray platforms, 8 diferentially expressed genes were highlighted and the differential expression of those 6 encoding known proteins was confirmed by qRT-PCR. Differential expression was shown at the protein level, too. HS3ST1 and GATA3 are the most promising candidate genes for keratoconus. 3. In similar experiments we compared the gene expression of limbal and central corneal epithelia.SPON1, PHLDA1, ITM2A may serve as potential stem cell markers based on immunfluorescent microscopic studies. 4. In central corneas, we showed increased expression of thrombospondin-1, a known corneal anti-angiogenic protein. We showed that thrombospondin-1 levels are decreased in the vicinity of corneal neovascularization and found FXIIIa expression around the new vessels. In corneal cell cultures, FXIIIa decreased the expression of thrombospondin-1 both at the protein and mRNA levels. In vascularized corneas, the FXIIIa appears to be released from CD11b+ monocytes

Szemfenéki betegségek molekuláris genetikai és epidemiológiai vizsgálata = Molecular genetical and epidemiological investigation of diseases of the ocular fundus

Genetikai eset-kontroll tanulmányunkba 213 nedves és 67 száraz AMD-ben szenvedő beteget, valamint 106 kontrolt vontunk be. Nem találtunk összefüggést az AMS és 4 vizsgált gén között (Apolipoprotein E, complement factor I, FXIII and MerTK). A GAS6 gén c.834+7G>A polimorfizmusa a nedves típusú AMD-vel szemben protektívnek bizonyult (OR=0.50, 95%CI: 0.26-0.97, p=0.04). Többszörös logisztikus regresszióval bizonyítottuk, hogy a C3 gén egyik polimorfizmusa a CFH és HTRA1 polimorfizmusok hiányában a száraz AMD kialakulására rizikót jelent (OR=4.93, 95%CI: 1.98-12.25, p=0.0006). Öt, von Hippel-Lindau szindrómában szenvedő család 7 tagját vizsgáltuk. Genetikai vizsgálatunk 4 új (c.163G>T, c.232A>T, c.340+1G>A, c.555C>A) és egy korábban közölt (c.583C>T) mutációt igazolt a VHL génben. Alátámasztottuk, hogy a protein trunkációhoz vezető mutációk I-es típusú VHL betegséghez és világossejtes veserákhoz vezetnek. Molekulamodellezéssel igazoltuk, hogy az újonnan leírt p.Asn78Tyr mutáció a VHL-HIF-1alpha interakció felbomlásához vezet, ezért a mutáció I-es típusú VHL betegséget és magas veserák kockázatot okoz. Egy új nonszensz mutáció c.163G>T (p.55X) kapcsán a VHL betegségben eddig előfordult legkoraibb veserák megjelenést regisztráltuk egy 15 éves betegben. Eredményeink hozzájárulnak a VHL betegség genotípus-fenotípus összefüggéseinek pontosabb megértéséhez és a VHL betegek sikeres követéshez. | In a case-controll study we enrolled 213 patients with exudative, 67 patients with dry AMD and 106 controls. No association was found between AMD and the polymorphisms in the Apolipoprotein E, complement factor I, FXIII and MerTK genes. GAS6 c.834+7G>A polymorphism was found to be significantly protective, reducing the odds of wet type AMD by a half (OR=0.50, 95%CI: 0.26-0.97, p=0.04). Multiple regression models revealed that the risk allele of C3 was carried a significant risk in the simultaneous absence of homozygous CFH and HTRA1 polymorphisms only (OR=4.93, 95%CI: 1.98-12.25, p=0.0006) in dry AMD. Seven members of 5 unrelated families with type I VHL disease were enrolled in the study. Molecular genetic investigations detected 4 novel (c.163G>T, c.232A>T, c.340+1G>A, c.555C>A) and one previously described (c.583C>T) VHL point mutations. Our observations highlight that truncating mutations predispose to type I phenotype and high risk of renal cell carcinoma. Molecular modeling showed that the p.Asn78Tyr amino acid exchange disrupts the VHL-HIF-1alpha interaction prediciting type I phenotype with high risk of renal cell carcinoma. The novel c.163G>T (p.55X) nonsense mutation associated to bilateral RCC and retinal angioma in a 15-years-old boy, representing the earliest occurrence of RCC in VHL disease reported so far. Our observations add to the understanding of genotype-phenotype correlation in VHL disease and help genetic counseling and follow-up of VHL patients

Progressive Decrease of Mitochondrial Motility during Maturation of Cortical Axons In Vitro and In Vivo

The importance of mitochondria for neuronal function is evident by the large number of neurodegenerative diseases that have been associated with a disruption of mitochondrial function or transport. Mitochondria are essential for proper biological function as a result of their ability to produce ATP through oxidative phosphorylation, buffer cytoplasmic calcium, regulate lipid biosynthesis, and trigger apoptosis. Efficient transport of mitochondria is thought to be particularly important in neurons in light of their compartmentalization, length of axonal processes, and high-energy requirements). However, the majority of these results were obtained using short-term, in vitro neuronal culture models, and very little is currently known about mitochondrial dynamics in mature axons of the mammalian CNS in vitro or in vivo. Furthermore, recent evidence has demonstrated that mitochondrial immobilization at specific points along the axon, such as presynaptic boutons, play critical roles in axon morphogenesis [4, 5]. We report that as cortical axons mature, motility of mitochondria (but not other cargoes) is dramatically reduced and this coincides with increased localization to presynaptic sites. We also demonstrate using photo-conversion that in vitro mature axons display surprisingly limited long-range mitochondrial transport. Finally, using in vivo two-photon microscopy in anesthetized or awake-behaving mice, we document for the first time that mitochondrial motility is also remarkably low in distal cortical axons in vivo. These results argue that mitochondrial immobilization and presynaptic localization are important hallmarks of mature CNS axons both in vitro and in vivo

Tear Mediators NGF along with IL-13 Predict Keratoconus Progression

L

Effects of aging on corneal parameters measured with Pentacam in healthy subjects

K