2-arachidonoylglycerol metabolism is differently modulated by oligomeric and fibrillar conformations of amyloid beta in synaptic terminals

Alzheimer´s disease (AD) is the most prevalent disorder of senile dementia mainly characterized by amyloid-beta peptide (Aβ) deposits in the brain. Cannabinoids are relevant to AD as they exert several beneficial effects in many models of this disease. Still, whether the endocannabinoid system is either up- or down-regulated in AD has not yet been fully elucidated. Thus, the aim of the present paper was to analyze endocannabinoid 2-arachidonoylglycerol (2-AG) metabolism in cerebral cortex synaptosomes incubated with Aβ oligomers or fibrils. These Aβ conformations were obtained by "aging" the 1-40 fragment of the peptide under different agitation and time conditions. A diminished availability of 2-AG resulting from a significant decrease in diacylglycerol lipase (DAGL) activity was observed in the presence of large Aβ1-40 oligomers along with synaptosomal membrane damage, as judged by transmission electron microscopy and LDH release. Conversely, a high availability of 2-AG resulting from an increase in DAGL and lysophosphatidic acid phosphohydrolase activities occurred in the presence of Aβ1-40 fibrils although synaptosomal membrane disruption was also observed. Interestingly, neither synaptosomal mitochondrial viability assayed by MTT reduction nor membrane lipid peroxidation assayed by TBARS formation measurements were altered by Aβ1-40 oligomers or fibrils. These results show a differential effect of Aβ1-40 peptide on 2-AG metabolism depending on its conformation.Fil: Pascual, Ana Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Giusto, Norma Maria. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentin

The endocannabinoid system in the visual process

An increasing number of articles have been published in recent years on the role of the endocannabinoid system (ECS) in different cellular processes. Here we review and discuss findings on the ECS in visual processing and present the structure of the retina. We focus on the photoreceptor cell and the events that occur in the phototransduction process, considering the conformational light-induced changes in rhodopsin and in particular its chromophore (11-cis retinal). Advances in the distribution and function of the endocannabinoid system in the retina with special reference to its function in the physiological light process are also addressed, as is the relationship between rhodopsin, retinal pathologies and the ECS.Fil: Pasquaré, Susana Juana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Chamorro Aguirre, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentin

Proliferative glioblastoma cancer cells exhibit persisting temporal control of metabolism and display differential temporal drug susceptibility in chemotherapy

Even in immortalized cell lines, circadian clocks regulate physiological processes in a time-dependent manner, driving transcriptional and metabolic rhythms, the latter being able to persist without transcription. Circadian rhythm disruptions in modern life (shiftwork, jetlag, etc.) may lead to higher cancer risk. Here, we investigated whether the human glioblastoma T98G cells maintained quiescent or under proliferation keep a functional clock and whether cells display differential time responses to bortezomib chemotherapy. In arrested cultures, mRNAs for clock (Per1, Rev-erbα) and glycerophospholipid (GPL)-synthesizing enzyme genes, 32 P-GPL labeling, and enzyme activities exhibited circadian rhythmicity; oscillations were also found in the redox state/peroxiredoxin oxidation. In proliferating cells, rhythms of gene expression were lost or their periodicity shortened whereas the redox and GPL metabolisms continued to fluctuate with a similar periodicity as under arrest. Cell viability significantly changed over time after bortezomib treatment; however, this rhythmicity and the redox cycles were altered after Bmal1 knock-down, indicating cross-talk between the transcriptional and the metabolic oscillators. An intrinsic metabolic clock continues to function in proliferating cells, controlling diverse metabolisms and highlighting differential states of tumor suitability for more efficient, time-dependent chemotherapy when the redox state is high and GPL metabolism low.Fil: Wagner, Paula Micaela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; ArgentinaFil: Sosa Alderete, Lucas Gastón. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gorne, Lucas Damián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Salvador, Gabriela Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Universidad Nacional del Sur; ArgentinaFil: Guido, Mario Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentin

Age-related changes in the metabolization of phosphatidic acid in cerebral cortex synaptosomes

In this study, phosphatidic acid (PA) metabolization is found to generate diacylglycerol (DAG), monoacylglycerol (MAG) and glycerol by the sequential action of lipid phosphate phosphatase (LPP), diacylglycerol lipase (DAGL), and monoacylglycerol lipase (MAGL) in cerebral cortex (CC) synaptosomes. It is also demonstrated that PA is metabolized by phospholipases A (PLA)/lysophosphatidic acid phosphohydrolase (LPAPase) in synaptic endings. Age-related changes in the metabolization of PA have been observed in rat cerebral cortex synaptosomes in the presence of the alternative substrates for LPP, namely LPA, sphingosine 1-phosphate (S1P) and ceramide 1-phosphate (C1P). In addition, LPA and C1P up to concentrations of about 50 μM favor the metabolism in the direction of MAG and glycerol in aged and adult synaptosomes, respectively. At equimolecular concentrations with PA, LPA decreases DAG formation in adult and aged synaptosomes, whereas S1P decreases it and C1P increases it only in aged synaptosomes. Sphingosine (50 μM) or ceramide (100 μM) increase PA metabolism by the pathway that involves LPP/DAGL/MAGL action in aged membranes. Using RHC-80267, a DAGL inhibitor, we could observe that 50% and 33% of MAG are produced as a result of DAGL action in adult and aged synaptosomes, respectively. Taken together, our findings indicate that the ageing modifies the different enzymatic pathways involved in PA metabolization.Fil: Pasquaré, Susana Juana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Giusto, Norma Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentin

The Endocannabinoid System Is Present in Rod Outer Segments from Retina and Is Modulated by Light

The aim of the present research was to evaluate if the endocannabinoid system (enzymes and receptors) could bemodulated by light in rod outer segment (ROS) from bovine retina. First, we analyzed endocannabinoid 2-arachidonoylglycerol (2-AG) metabolism in purified ROSobtained from dark-adapted (DROS) or light-adapted(LROS) retinas. To this end, diacylglycerol lipase (DAGL), monoacylglycerol lipase (MAGL), and lysophosphatidatephosphohydrolase (LPAP) enzymatic activities were analyzed using radioactive substrates. The protein content ofthese enzymes and of the receptors to which cannabinoids bind was determined by immunoblotting under lightstimulus. Our results indicate that whereas DAGL and MAGLactivities were stimulated in retinas exposed to light,no changes were observed in LPAP activity. Interestingly, the protein content of the main enzymes involved in 2-AGmetabolism, phospholipase Cβ1(PLCβ1), and DAGLα(synthesis), and MAGL (hydrolysis), was also modified bylight. PLCβ1content was increased, while that of lipases was decreased. On the other hand, light produced anincrease in the cannabinoid receptors CB1 and CB2 and adecrease in GPR55 protein levels. Taken together, ourresults indicate that the endocannabinoid system (enzymes and receptors) depends on the illumination state of theretina, suggesting that proteins related to phototransduction phenomena could be involved in the effects observed.Fil: Chamorro Aguirre, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentin

Metabolic pathways for the degradation of phosphatidic acid in isolated nuclei from cerebellar cells

The aim of the present research was to analyse the pathways for phosphatidic acid metabolism in purified nuclei from cerebellar cells. Lipid phosphate phosphatase and diacylglyceride lipase activities were detected in nuclei from cerebellar cells. It was observed that DAGL activity makes up 50% of LPP activity and that PtdOH can also be metabolised to lysophosphatidic acid. With a nuclear protein content of approximately 40 µg, the production of diacylglycerol and monoacylglycerol was linear for 30 min and 5 min, respectively, whereas it increased with PtdOH concentrations of up to 250 µM. LysoPtdOH, sphingosine 1-phosphate and ceramide 1-phosphate, which are alternative substrates for LPP, significantly reduced DAG production from PA. DAG and MAG production increased in the presence of Triton X-100 (1 mM) whereas no modifications were observed in the presence of ionic detergent sodium deoxycholate. Ca2+ and Mg2+ stimulated MAG production without affecting DAG formation whereas fluoride and vanadate inhibited the generation of both products. Specific PtdOH-phospholipase A1 and PtdOH-phospholipase A2 were also detected in nuclei. Our findings constitute the first reported evidence of active PtdOH metabolism involving LPP, DAGL and PtdOH-selective PLA activities in purified nuclei prepared from cerebellar cells. Fil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahia Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahia Blanca (i); Argentina. Universidad Nacional del Sur; ArgentinaFil: Pasquare, Susana J.. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahia Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahia Blanca (i); Argentina. Universidad Nacional del Sur; ArgentinaFil: Giusto, Norma Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahia Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahia Blanca (i); Argentina. Universidad Nacional del Sur; Argentin

El sistema endocannabinoide en los fotorreceptores de la retina bovina

Las células fotorreceptoras son las responsables de registrar la luz. Un estímulo lumínico intenso o prolongado compromete la función visual por muerte de las células fotorreceptoras. El Sistema Endocannabinoide (SEC) actúa como neuromodulador y neuroprotector, de allí la importancia de abordar su estudio en el proceso visual y en la injuria neuronal. El objetivo del presente trabajo fue evaluar si el SEC es modulado por luz en los segmentos externos (ROS) de los bastones, lugar donde se inicia el proceso de fototransducción. Se encontró que las enzimas de síntesis (diacilglicerol lipasa (DAGL) y lisofosfatidato fosfohidrolasa (LPAPasa) y de hidrólisis (monoacilglicerol lipasa (MAGL)) del endocannabinoide 2-araquidonoil glicerol (2-AG) están presentes y son activas en el ROS. Además se expresan los receptores cannabinoides CB1, CB2 y GPR55. El balance entre la síntesis y la hidrólisis del 2-AG por estímulo lumínico (3000 luxes por 30 min) demuestra un aumento en su producción por incremento de la actividad de síntesis (DAGL). La luz, además, aumenta la expresión de los receptores cannabinoides CB1 y CB2 y disminuye la del GPR55. Nuestro trabajo evidencia por primera vez la presencia de elementos del SEC en segmentos externos de células fotorreceptoras (ROS) y su modificación por luz, sugiriendo que las proteínas relacionadas con el fenómeno de fototransducción están involucradas en los efectos observados.Fil: Chamorro Aguirre, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina2° Taller Latinoamericano de Ciencias de la VisiónSan Miguel de TucumánArgentinaUniversidad Nacional de Tucumá

El estímulo lumínico modula el metabolismo del 2-araquidonoil glicerol en los segmentos externos de los bastones de la retina bovina

El 2-araquidonoil glicerol (2-AG) es un endocannabinoide de naturaleza lipídica que puede unirse a receptores cannabinoides. Está involucrado en mecanismos intracelulares de gran relevancia, y cumple funciones neuromoduladoras y neuroprotectoras. La principal ruta metabólica para la síntesis del 2-AG involucra la acción combinada de una fosfolipasa C (PLC) y una diacilglicerol lipasa (DAGL). Otra vía de formación de 2-AG es a partir del 2-araquidonoil lisofosfatidato (2-araquidonoil-LPA) por la acción de una lisofosfatidato fosfohidrolasa (LPAPasa). El sistema endocannabinoide ha sido poco estudiado en la retina, si bien se ha demostrado su presencia aún se desconoce su rol funcional en la visión. La luz produce la activación de la rodopsina y la disociación de la transducina (GtαGDPβγ) en los discos de los segmentos externos de los bastones (célula fotorreceptora) dando inicio a la conversión de la señal lumínica en señal eléctrica, proceso denominado fototransducción. La GtαGDPβγ se une a la rodopsina activada por luz, promoviendo el intercambio de GDP por GTP en la subunidad α de la transducina. Este cambio provoca la disociación de la subunidad GtαGTP de la Gtβγ, lo que activa a la fosfodiesterasa de GMPc, produciendo el cierre de los canales de ingreso de Na+ y Ca2+ de la membrana plasmática. Esto hiperpolariza al fotorreceptor y genera una disminución en la liberación de glutamato, que es sensado por las células bipolares. El objetivo del presente trabajo fue determinar si el metabolismo del 2- AG en los segmentos externos de los bastones (ROS) es modulado por exposición a la luz, y si la transducina participa en su regulación. Para esto, se evaluaron las actividades de la DAGL y la LPAPasa (síntesis), y la monoacilglicerol lipasa (MAGL) (hidrólisis) del 2-AG, en los ROS de retinas provenientes de ojos bovinos adaptados a la oscuridad (ROS O), ROS de retinas expuestas a 3000 luxes por 30 minutos (ROS L) y ROS O blanqueados a 3000 luxes por 30 minutos (ROS B). Los ROS fueron purificados por un gradiente discontinuo de sacarosa y los ensayos enzimáticos se realizaron con sustratos radiomarcados. Para analizar el efecto de la transducina, los ROS O fueron preincubados durante 15 minutos con GTPγS o GDPβS a temperatura ambiente, y seguidamente expuestos a la luz. Los resultados obtenidos mostraron un incremento de la actividad de la DAGL en ROS L (121%) y ROS B (43%) respecto a ROS O, mientras que la actividad de la LPAPasa fue similar en todas las condiciones evaluadas. El MAG, generado por la DAGL, se metabolizó a glicerol (37%) en ROS O y ROS L, lo que sugirió la acción de una MAGL. Esto se corroboró empleando MAG como sustrato exógeno, observándose un incremento (69%) en la actividad enzimática en ROS L respecto a ROS O. Por otra parte, se observó que el agregado de GTPγS a los ROS O incrementó la actividad de DAGL, llegando a valores obtenidos en ROS B. Esto indica que la activación de la transducina por GTPγS es capaz de igualar el efecto de la luz sobre la DAGL. Estos resultados evidencian la participación del 2- AG en el proceso de fototransducción, donde la transducina estaría involucrada en la regulación de la actividad de la DAGL.Fil: Chamorro Aguirre, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaVIII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y LipoproteínasMendozaArgentinaUniversidad Nacional de MendozaConsejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgo

Aging Modifies the Enzymatic Activities Involved in 2-Arachidonoylglycerol Metabolism

One of the principal monoacylglycerol (MAG) species in animal tissues is 2-arachidonoylglycerol (2-AG), and the diacylglycerol lipase (DAGL) pathway is the most important 2-AG biosynthetic pathway proposed to date. Lysophosphatidate phosphatase (LPAase) activity is part of another 2-AG-forming pathway in which monoacylglycerol lipase (MAGL) is the major degrading enzyme. The purpose of this study was to analyze the manner in which DAGL, LPAase, and MAGL enzymes are modified in the central nervous system (CNS) during aging. To this end, diacylglycerols (DAGs) and MAGs of different composition were used as substrates of DAGL and MAGL, respectively. All enzymatic activities were evaluated in membrane and soluble fractions as well as in synaptic terminals from the cerebral cortex (CC) of adult and aged rats. Results related to 2-AG metabolism show that aging: (a) decreases DAGL-alfa expression in the membrane fraction whereas in synaptosomes it increases DAGL-beta and decreases MAGL expression; (b) decreases LPAase activity in both membrane and soluble fractions; (c) decreases DAGL and stimulates LPAase activities in CC synaptic terminals; (d) stimulates membrane-associated MAGL-coupled DAGL activity; and (e) stimulates MAGL activity in CC synaptosomes. Our results also reveal that during aging the net balance between the enzymatic activities involved in 2-AG synthesis and breakdown is low availability of 2-AG in CC membrane fractions and synaptic terminals. Taken together, our results lead us to conclude that these enzymes play crucial roles in the regulation of 2-AG tissue levels during aging.Fil: Pascual, Ana Clara. Universidad Nacional del Sur; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientí­ficas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahí­a Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahí­a Blanca (i); ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Universidad Nacional del Sur; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientí­ficas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahí­a Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahí­a Blanca (i); ArgentinaFil: Giusto, Norma Maria. Universidad Nacional del Sur; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientí­ficas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahí­a Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahí­a Blanca (i); ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Universidad Nacional del Sur; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientí­ficas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Bahí­a Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahí­a Blanca (i); Argentin

Monoacylglycerol lipase activity associated with the retinal rod outer segment is regulated by the proteins involved in the phototransduction process

Objetivos: Determinar si la actividad de la monoacilglicerol lipasa (MAGL) del segmento externo de los bastones (ROS) era modulada por las proteínas involucradas en el proceso de fototransducción.Materiales y métodos: La actividad enzimática fue ensayada en las membranas de los ROS tratados con buffers de diferente fuerza iónica, empleando como sustrato monoacilglicerol radiomarcado. Los ROS fueron aislados y purificados de retinas bovinas previamente adapta-das a oscuridad. Estos fueron resuspendidos en buffer Tris-HCL 5 mM (remueve proteínas solubles y periféricas) o Tris-HCL 100 mM (remueve proteínas solubles) a pH 7,4 y expuestos a 3000 luxes por 30 minutos a 25°C (ROS B) o mantenidos en oscuridad a 4°C (ROS O). Luego, los ROS fueron pasados 15 veces por aguja G25x5/8 y centrifugados a 50000xg durante 15 minutos para obtener la fracción de membrana. Las pro-teínas fueron resueltas por electroforesis y visua-lizadas por tinción con Coomassie blue.Resultados: El tratamiento a 5 mM en oscuri-dad extrajo las proteínas: fosfodiesterasa (PDE), rodopsina quinasa (RK), transducina (Tα) y parte de la arrestina; mientras que el mismo tra-tamiento en luz produjo la extracción de todas ellas excepto la Tα. El tratamiento a 100 mM en oscuridad o luz extrae totalmente la RK y en alta proporción a la arrestina. La actividad MAGL en membrana de ROS O y ROS B (5 mM) dismi-nuyó 27% y 18%, respectivamente, en relación a la observada en el ROS (O/B) entero.Conclusión: Estos resultados podrían sugerir un estímulo de la PDE sobre la actividad de la MAGL, ya que en su ausencia la actividad de esta disminuye.Fil: Chamorro Aguirre, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Gaveglio, Virginia Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Pascual, Ana Clara. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Pasquaré, Susana Juana. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaReunión Anual de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO)ArgentinaAsociación de Investigación en Visión y Oftalmologí