Association of Trypanosoma vivax in extracellular sites with central nervous system lesions and changes in cerebrospinal fluid in experimentally infected goats

Changes in cerebrospinal fluid (CSF) and anatomical and histopathological central nervous system (CNS) lesions were evaluated, and the presence of Trypanosoma vivax in CNS tissues was investigated through PCR. Twelve adult male goats were divided into three groups (G): G1, infected with T. vivax and evaluated during the acute phase; G2, infected goats evaluated during the chronic phase; and G3, consisting of non-infected goats. Each goat from G1 and G2 was infected with 1.25 × 105 trypomastigotes. Cerebrospinal fluid (CSF) analysis and investigation of T. vivax was performed at the 15th day post-infection (dpi) in G1 goats and on the fifth day after the manifestation of nervous system infection signs in G2 goats. All goats were necropsied, and CNS fragments from G1 and G2 goats were evaluated by PCR for the determination of T. vivax. Hyperthermia, anemia and parasitemia were observed from the fifth dpi for G1 and G2, with the highest parasitemia peak between the seventh and 21st dpi. Nervous system infection signs were observed in three G2 goats between the 30th and 35th dpi. CSF analysis revealed the presence of T. vivax for G2. Meningitis and meningoencephalitis were diagnosed in G2. PCR were positive for T. vivax in all the samples tested. In conclusion, T. vivax may reach the nervous tissue resulting in immune response from the host, which is the cause of progressive clinical and pathological manifestations of the CNS in experimentally infected goats

DETECCIÓN DIFERENCIAL DE TRYPANOSOMA EVANSI Y TRYPANOSOMA VIVAX MEDIANTE UN ENSAYO DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

El propósito de este trabajo fue optimizar un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para efectuar el diagnóstico diferencial de Trypanosoma evansi yTrypanosoma vivax, usando cebadores previamente descritos: 21-mer/22-mer e ILO1264/ILO1265. La especificidad se evaluó efectuando pruebas preliminares sobre muestras de ADN purificado de diversas especies de parásitos y sobre mezclas de éstas. La sensibilidad se valoró empleando diluciones de ADN deaislados de referencia de T. evansi y T. vivax y concentraciones variables de cebadores. El ensayo optimizado mostró una sensibilidad de 10 pg de ADN, con especificidad para el Subgénero Trypanozoon (cebadores 21-mer/22-mer) y especificidad absoluta para T. vivax (cebadores ILO1264/ILO1265). Ambos grupos de cebadores mostraron potencialidad para detectar infecciones mixtas T. evansi/T. vivax. Un análisis de hibridación sobre el patrón de cariotipo de diversos Kinetoplastida, usando la sonda Te- ADN, mostró su carácter repetitivo y la distribución de su secuencia en diferentes cromosomas de T. evansi TE0. La PCR fue evaluada como herramienta diagnóstico de la presencia de tripanosomas en muestras sanguíneas de animales con infecciones experimentales, demostrando alta sensibilidad al detectar positividad hasta 72 horas antes que lo hicieran los métodos parasitológicos. Este ensayo también fue evaluado sobre muestras sanguíneas de búfalos de agua con infecciones naturales, mostrando alta sensibilidad y especificidad al detectar 9/86 muestras como positivas a T. vivax, revelando una tasa de infección activa de 10,47%; valor tres veces superior a los resultados de la evaluación microscópica de frotis teñidos (3,49%) y casi dos veces superior (6,98%) a la técnica parasitológica de microcentrifugación capilar. En ninguna de las muestras de búfalos evaluadas se detectó T. evansi.Differential Detection of Trypanosoma evansi and Trypanosoma vivax Through a Polymerase Chain Reaction AssayABSTRACTThe purpose of this study was to standardize a polymerase chain reaction (PCR) assay in order to reach a differential diagnosis of Trypanosoma evansi and Trypanosoma vivax using previously described primers: 21-mer/22-mer and ILO1264/ILO1265. Assay specificity was evaluated through preliminary test on both purified DNA from different parasite species and on their mixtures. Assay sensitivity was tested using decreasing DNA concentration of T. evansi and T. vivax strain reference and different primer concentrations. The optimized PCR assay showed a sensitivity of 10 pg of DNA with specificity to subgenus Trypanozoon (primers 21-mer/22-mer) and an absolute specificity for T. vivax (ILO1264/ILO1265). Both primer sets showed a high capability to detect mixed infections by T. evansi/T. vivax. A hybridization assay on molecular karyotypes of Kinetoplastida parasites, using the Te-DNA probe, showed both a high sequence copying and a sequence distribution in different chromosomes of T. evansi stock TE0. PCR assay was used as a tool to evaluate the presence of tr ypanosomes in blood samples of experimentally infected animals, showing high sensitivity as it detected positive samples 72 hours before than parasitological methods. This assay was also run on blood samples of naturally infected water buffaloes showing both high sensitivity and specificity as it detected 9 out of 86 samples as positive for T. vivax. This reveals an active infection range of 10.47%. A value which is three times higher than the detection range by microscopic evaluation of stained blood smears (3.49%) and about twice as high as the microhematocrit centrifugation technique (6.98%). T. evansi was not found in any of the buffalo blood samples tested

MEGAESÓFAGO POR PERSISTENCIA DEL CUARTO ARCO AÓRTICO DERECHO EN UN CANINO. MANEJO CLÍNICO Y QUIRÚRGICO

Los defectos congénitos de los anillos vasculares en caninos, producto de alteraciones en la embriogénesis, pueden comprometer el libre tránsito del bolo alimenticio al comprimir el esófago. La persistencia del cuarto arco aórtico derecho potencialmente puede generar una compresión esofágica de tal magnitud que los alimentos sólidos son regurgitados al poco tiempo de ingeridos, retardando el crecimiento y comprometiendo la vida del paciente. Anterior a la obstrucción se genera una dilatación esofágica producto de la acumulación de alimento, lo que puede afectar irreversiblemente la actividad motriz del órgano. La resolución de esta alteración debe efectuarse tan pronto como sea posible para evitar graves consecuencias; sin embargo, es necesario precisar el diagnóstico al descartar algunas posibles causas que cursen con una clínica similar. En el caso presentado, las evaluaciones radiográficas simples y de contraste permitieron orientar el diagnóstico con gran precisión, aunque fue necesario efectuar una toracotomía exploratoria confirmatoria. El proceso quirúrgico realizado para corregir la persistencia del anillo vascular mostró ser altamente efectivo al liberar la constricción y aliviar la signología clínica del paciente; no obstante, controles radiográficos post quirúrgicos revelaron persistencia de la dilatación esofágica, aunque en ausencia de signos clínicos de relevancia.Megaoesophagus Asociated with Persistent Right Aortic Arch in a Dog. Clinical and Surgical ManagementABSTRACTCanines’ congenital vascular ring anomalies due to alterations in the embriogenesis process might compromise the passage of food from the mouth to the stomach, due to esophageal compression. The persistent right aortic arch may compress the esophagus hard enough so the food that has been swallowed backs up into the mouth in a short time; it delays normal growth and jeopardizes the patient’s life. The esophagus widens prior to constriction due to the accumulation of food and affects its motor activity. This pathology should be corrected as soon as possible to avoid complications; however, an accurate and specific diagnosis in order to discard other diseases is required. In this report although a thoracic exploration was necessary, the radiographic evaluation (single and contrast) was the guideline. The surgical procedure to correct the persistent right aortic arch proved to be highly effective when the constriction of the esophagus was eliminated. Radiographic post surgical evaluation showed an important degree of esophagus dilatation without relevant clinical signs

DETECCIÓN PARASITOLÓGICA Y MOLECULAR DE INFECCIONES NATURALES POR TRYPANOSOMA EVANSI Y TRYPANOSOMA VIVAX EN BÚFALOS DE AGUA (BUBALUS BUBALIS) Y CHIGÜIRES (HYDROCHOERUS HYDROCHAERIS) EN LOS ESTADOS APURE, COJEDES Y GUÁRICO, VENEZUELA

Este estudio evaluó la presencia de Trypanosoma evansi y Trypanosoma vivax en búfalos de agua (Bubalus bubalis) y chigüires (Hydrochoerus hydrochaeris) de tres estados de Venezuela por técnicas parasitológicas y moleculares (frotis teñido: FT; microcentrifugación capilar: TMC; reacción en cadena de la Polimerasa: PCR), estableciéndose el porcentaje de infecciones activas. En 316 muestras sanguíneas de búfalos las tasas de detección para FT, TMC y PCR fueron de 20 (6,33%), 36 (11,39%) y 60 (18,98%), respectivamente. Por PCR se caracterizó a T. vivax como la especie responsable de todas las infecciones, no detectándose presencia de T. evansi. En 186 muestras de chigüires FT y TMC identificaron positividad en 36 (19,35%) y 71 (38,17%) de estas, respectivamente, con altas parasitemias; en 27 de estas se observaron tripanosomas del Subgénero Megatrypanum. Por PCR se caracterizaron como T. evansi 51 muestras de chigüires, seis con resultados TMC-negativo. No se detectó T. vivax en chigüires. Un análisis de t -student estableció diferencias (p<0.05) entre los valores de hematocrito (Ht) de búfalos positivos y negativos a tripanosomas; mientras que por análisis de varianza se detectó efecto (p< 0.05) del grado de parasitemia sobre el Ht. No hubo ningún efecto (p>0.05) al realizar los mismos análisis para las muestras de chigüires.Parasitological and Molecular Detection of Natural Infection by Trypanosoma evansi and Trypanosoma vivax in Water Buffaloes (Bubalus bubalis) and Capybaras (Hydrochoerus Hydrochaeris) in Apure, Cojedes and Guarico States, VenezuelaABSTRACTThis study sought to establish the percentage of active infections of Trypanosoma evansi and Trypanosoma vivax in water buffaloes (Bubalus bubalis) and capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) in three Venezuelan states using parasitological and molecular assays (stained blood smear: SBS; microhematocrit centrifugation technique: MHCT; polymerase chain reaction: PCR). From 316 buffaloes blood samples, SBS, MHCT and PCR detected as positive 20 (6.33%), 36 (11.39%) and 60 (18.98%) samples, respectively. Based on PCR results, T. vivax was characterized as the only species responsible for all infections, since T. evansi was not detected. Out of 186 capybara blood samples, 36 (19.35%) and 71 (38.17%) were identified as positive by SBS and MHCT, respectively, with high parasitemia; trypanosomes of subgenus Megatrypanum were observed in 27 of these samples. By PCR, 51 capybara blood samples tested positive for T. evansi, six of them being MHCT negative. T. vivax was not found in capybaras. A tstudent analysis showed differences (p<0.05) between hematocrit values (Ht) from trypanosome positive and trypanosome negative buffaloes. Analysis of variance (ANOVA) showed effect of parasitemia level on the value of HT at p<0.05. These statistical analyses did not find any effect on capybara samples

Prevalencia de Trypanosoma spp. Mediante Elisa e Inmunofluorescencia Indirecta en Tres Rebaños de Búfalos de Agua del estado Cojedes, Venezuela

La tripanosomosis animal es una patología causada por parásitos del género Trypanosoma. Esta enfermedad posee una amplia distribución enpaíses tropicales y subtropicales y es determinada por la presencia de moscas hematófagas. Los búfalos de agua son importantes animales domésticos empleados para la producción de leche y carne. Rebaños de búfalos son criados en áreas donde los tripanosomas poseen carácter endémico. En Venezuela, la industria bufalina se ha convertido enuna ganadería cada vez más importante y común; sin embargo, animales importados de regiones no endémicas pueden sufrir infección severa. Eldesarrollo de métodos que garanticen una eficaz vigilancia epidemiológica de la enfermedad posee gran relevancia. Las pruebas inmunológicasson de gran importancia para esta finalidad, particularmente por la poca sensibilidad de los métodos parasitológicos, debido a las bajas parasitemias características en las infecciones subclínicas y crónicas causadas por tripanosomas. Con la finalidad de estimar la prevalencia serológicade infecciones por tripanosomas en búfalos de agua, fue desarrollado un ELISA que se empleó en muestras de animales clínicamente sanos provenientes de los municipios Rómulo Gallegos, Ricaurte y Girardot del estado Cojedes, Venezuela. Las muestras fueronevaluadas adicionalmente por inmunofluorescencia indirecta (IFI) y por microcentrifugación capilar (TMC). Se procesaron 180 muestras sanguíneas de búfalos, ninguna de las cuales presentó parasitemiaactiva por TMC. El ELISA determinó una prevalencia de 45,56%, que fue significativamente mayor (P<0,05) a la prevalencia obtenida porIFI (28,89%). Al comparar los resultados de los ensayos inmunológicos, se obtuvo un moderado índice de concordancia Kappa: 0,45 (95% CI0,31-0,58); mientras que el valor de concordancia entre ambas pruebas fue 73,33%. La sensibilidad y especificidad del ELISA, comparado con la IFI, fue de 82,69% y 69,53%, respectivamente. Los valorespredictivos positivo y negativo fueron 52,44% y 90,82%, respectivamente. Los resultados sugieren una condición endémica, con moderados valores de infección por Trypanosoma spp. en los bufalinos de las regiones evaluadas y demuestran, por primera vez en búfalos de Venezuela, la utilidad del ELISA para estudios epidemiológicos de tripanosomosis.AbstractAnimal trypanosomiasis is a disease caused by parasites of the genus Trypanosome. This malady is widely distributed in many countries, located in tropical and subtropical areas of the world where blood-sucking flies are present. Water buffaloes are important domestic animals used for meat and milk production, and draught power. Buffalo herds are raised in areas where trypanosomiasis is endemic. In Venezuela, the buffalo industry is becoming a very important and common livestock. However, animals imported from non-endemic areas may suffer severe infections. The development of methods which ensure an efficient epidemiologicalsurveillance against this disease is of great relevance. The immunological tests are of great importance for this purpose, because of the low  sensitivity of the current parasitological methods, due to the lowparasite burden that occur in subclinical and chronic infections caused by trypanosomes. To estimate the serological prevalence of trypanosome in water buffaloes, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used in buffalo samples of healthy animals from the municipalities of Rómulo Gallegos, Ricaurte and Girardot, in the State of Cojedes,Venezuela. Additionally, samples were also assessed with the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the microhematocrit test (MHCT). A total of 180 blood samples, none of which had an active parasitemia by TMC, were assessed. The prevalence determined by ELISA was 45.56%, which was significantly (P<0.05) higher than that obtained by IFAT (28.89%). The results of the experiments showed a moderate Kappa index of concordance of 0.45 (95% CI: 0.31-0.58); whereas the concordance value for both tests was 73.33%. Both the sensitivity and specificity of ELISA, compared to the IFAT, was 82.69% and 69.53%, respectively. The predictive positive and negative values were 52.44%and 90.82%, respectively. The findings suggest an endemic condition, with moderate infection values caused by Trypanosoma spp. in buffaloes from these regions of Venezuela and show, for the first time, the usefulness of ELISA for epidemiological studies of trypanosomiasis