Interpretation of two-dimensional electrophoresis gels

The study of human protein polymorphism presents a major advantage in clinical chemistry to discover forms associated with risks or involved in well specified pathological states. If this polymorphism corresponds to structural differences reflected by physical property modifications it can be visualized on a map obtained by 2-dimensional electrophoretic technique. This study deals with apolipoproteins A-I, A-II, A-IV, C2, C3, and E that can be found on 2-dimensional gels. Each of these proteins appears on images under the form of a constellation of several spots. An expertise was extracted on these apolipoproteins in order to itemize all their known variants and their geometrical representations. This knowledge was implemented in a system to recognize what are the constellations we are actually dealing with, on a gel. A management system handles specific techniques taken from image processing to extract parameters from 2-dimensional gel images and artificial intelligence. Knowledge-based expert systems which perform the matching, allowing a partial interpretation of the gel. The accuracy of quantity measurement and quality control are greatly improved by adding calibration proteins. This same system will allow us to further implement conceptual clustering techniques to identify relevant relations in apolipoprotein metabolism. Apolipoprotein polymorphism is used in this work as a model which could be extended to other protein constellations in the future

Contrasting effects of peroxisome-proliferator-activated receptor (PPAR)γ agonists on membrane-associated prostaglandin E(2 )synthase-1 in IL-1β-stimulated rat chondrocytes: evidence for PPARγ-independent inhibition by 15-deoxy-Δ(12,14)prostaglandin J(2)

Microsomal prostaglandin E synthase (mPGES)-1 is a newly identified inducible enzyme of the arachidonic acid cascade with a key function in prostaglandin (PG)E(2 )synthesis. We investigated the kinetics of inducible cyclo-oxygenase (COX)-2 and mPGES-1 expression with respect to the production of 6-keto-PGF(1α )and PGE(2 )in rat chondrocytes stimulated with 10 ng/ml IL-1β, and compared their modulation by peroxisome-proliferator-activated receptor (PPAR)γ agonists. Real-time PCR analysis showed that IL-1β induced COX-2 expression maximally (37-fold) at 12 hours and mPGES-1 expression maximally (68-fold) at 24 hours. Levels of 6-keto-PGF(1α )and PGE(2 )peaked 24 hours after stimulation with IL-1β; the induction of PGE(2 )was greater (11-fold versus 70-fold, respectively). The cyclopentenone 15-deoxy-Δ(12,14)prostaglandin J(2 )(15d-PGJ(2)) decreased prostaglandin synthesis in a dose-dependent manner (0.1 to 10 μM), with more potency on PGE(2 )level than on 6-keto-PGF(1α )level (-90% versus -66% at 10 μM). A high dose of 15d-PGJ(2 )partly decreased COX-2 expression but decreased mPGES-1 expression almost completely at both the mRNA and protein levels. Rosiglitazone was poorly effective on these parameters even at 10 μM. Inhibitory effects of 10 μM 15d-PGJ(2 )were neither reduced by PPARγ blockade with GW-9662 nor enhanced by PPARγ overexpression, supporting a PPARγ-independent mechanism. EMSA and TransAM(® )analyses demonstrated that mutated IκBα almost completely suppressed the stimulating effect of IL-1β on mPGES-1 expression and PGE(2 )production, whereas 15d-PGJ(2 )inhibited NF-κB transactivation. These data demonstrate the following in IL-1-stimulated rat chondrocytes: first, mPGES-1 is rate limiting for PGE(2 )synthesis; second, activation of the prostaglandin cascade requires NF-κB activation; third, 15d-PGJ(2 )strongly inhibits the synthesis of prostaglandins, in contrast with rosiglitazone; fourth, inhibition by 15d-PGJ(2 )occurs independently of PPARγ through inhibition of the NF-κB pathway; fifth, mPGES-1 is the main target of 15d-PGJ(2)

PHYSIOPATHOLOGIE (COMPLICATIONS, EPIDEMIOLOGIE, TRAITEMENTS MEDICAMENTEUX)

NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

Les produits avancés de la glycation (conséquences en physiopathologie humaine)

NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

POLYMORPHISME GENETIQUE DU CYTOCHROME P450 2E1 ET SUSCEPTIBILITE A L'ALCOOL

NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

LA CYSTATINE C. UN NOUVEAU MARQUEUR DE LA FONCTION RENALE?

NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

Régulation de la gamma-glutamyltransférase humaine et effet de sa surexpression sur la cytotoxicité des anticancéreux dérivés du platine

La y-glutamyl transferase (GG1) est une enzyme clé dans le métabolisme du giutathion (GSH),mais malgré son importance physiologique, les mécanismes de régulation de la GGT humaine sont très malconnus à cause de la complexité de son organisation génomique.Le premier objectif de notre travail était l'étude de la régulation du gène l (seul gène codant pour une protéine active) dans différentes lignées cellulaires. Nous avons montré qu'en réponse au TP A, aubutyrate de sodium, ou au TNFa, les modulations globales des 3 messagers issus du gène l (ARNm IA, IB eIc) reflètent la modulation de l'activité GGT. Cependant ces 3 ARNm sont régulés de manière indépendante et spécifique de la lignée considérée. Ces résultats montrent que les 3 ARNm issus du gène l sont probab1ement transcrits à partir de promoteurs indépendants, régulés différemment selon le modèlecellulaire. Nous avons ensuite étudié la régulation du promoteur B (dirigeant la transcription de l'ARNm IB)de la GGT humaine (seul promoteur décrit à l'heure actuelle) et nous avons montré que ce promoteur est induit par le TP A dans 2 lignées cellulaires. Cette induction passe par la fixation du facteur AP1 (composé d'une sous unité cJun au moins) à l'un des 3 sites AP1 proximaux étudiés. Nous avons également montré que 1es séquences situées en amont de ces sites AP1 sont impliquées dans la modulation de l'induction par le TP A et dans sa spécificité cellulaire.Enfin, nous avons localisé, cloné et partiellement caractérisé un nouveau promoteur sur le gène l humain de la GGT : celui qui dirige la transciption des ARNm Ic. Le second objectif de notre travail était de déterminer le rôle de la GGT dans la réponse cellulaire au cisplatine (CDDP) et au carboplatine, couramment utilisés en chimiothérapie. Nous avons montré qu'une des réponses rapides des cellules HeLa à un traitement par l'un de ces agents résulte en une induction du taux de GSH intracellulaire et de l'activité GGT ce qui laisse supposer un rôle important pour la GGT dans la réponse aux dérivés du platine. Nous avons utilisé une lignée HeLa isogénique, transfectée par l'ADNc de la GGT humaine (HeLa-GG1) qui expriment l'enzyme à un niveau 10 fois supérieur à celui de la lignée parentale HeLa. Cette lignée a permis de montrer que les cellules HeLa-GGT possèdent une résistance accrue aux CDDP et au carboplatine lorsque du GSH extracellulaire est fourni aux cellules. Dansle cas du carboplatine, la résistance est directement corrélée au taux de GSH intracellulaire. En revanche, le contenu intracellulaire en GSH ne semble pas être un facteur déterminant pour la réponse au CDDP dans notre modèle. En effet, les cellules HeLa cultivées dans un milieu complet possèdent un fort taux de GSHb intracellulaire et lorsque le milieu de culture est appauvri en cystéine elles perdent plus de 80 % de leur pool (indépendamment de leur activité GGT). Or, la cytotoxicité du CDDP est comparable dans ces deux conditions de culture. Afin d'expliquer la plus grande résistance des cellules HeLa-GGT au CDDP lorsque du GSH extracellulaire est fourni, nous avons étudié le catabolisme du GSH par la GGT au niveau extracellulaire. Nous avons alors montré que le CDDP est capable d'interagir avec le produit de dégradation du GSH par la GGT : la CysGly. Ce composé est d'ailleurs plus réactif que le GSH et il forme des adduits avec le CDDP 10 fois plus rapidement que le GSH. Nous avons également été capables de détecter cet adduit dans 1e milieu extracellulaire des cellules HeLa-GGT incubées en présence de CDDP et de GSH. Nous suggérons que ce mécanisme dépendant de la GGT pourrait être impliqué dans la résistance des ceUules au CDDP en diminuant la quantité de CDDP disponible et/ou sa toxicité.NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

LE DIABETE INSIPIDE CHEZ L'HOMME

NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

Highly Sensitive Immuno-Assays for the Determination of Cotinine in Serum and Saliva. Comparison Between RIA and an Avidin-Biotin ELISA

Peer Reviewe

Marqueurs en addictologie et toxicomanies - Actualité et prospective

La deuxième édition de Biochimie médicale : marqueurs actuels et perspectives paraît trois ans seulement après la première, mais cette démarche des auteurs et coordonnateurs est pleinement justifiée. Cet ouvrage n'est pas un simple répertoire de molécules. C'est un outil pratique directement orienté vers les pathologies ou les dysfonctionnements d'organes à cibler. Et dans ce domaine, il convient d'être actuel et le plus complet possible. C'est pourquoi cette deuxième édition est à la fois actualisée des connaissances acquises en 2011 et enrichie de 7 nouveaux chapitres afin de compléter le panorama des biomarqueurs biochimiques de la première édition. La présentation des marqueurs y est organisée en deux parties : les premiers chapitres sont essentiellement de nature méthodologique et décrivent les différents outils spécialisés et innovants à la disposition du biologiste qui souhaite : connaître le principe d'un dosage proposé sur l'automate à sa disposition, mettre au point le dosage d'une nouvelle molécule lorsqu'il dispose d'un système ouvert. Les chapitres de la deuxième partie déterminent la place des marqueurs dans des contextes pathologiques donnés. Chaque marqueur est décrit selon ses caractéristiques fondamentales (origines, métabolisme, méthodes de dosages, valeurs de référence, intérêt réel en pratique bioclinique). Pour chaque chapitre, une approche prospective envisage l'arrivée de marqueurs potentiels et de nouvelles stratégies d'exploration plus informatives des pathologies étudiées. Seul titre de biochimie médicale rédigé à ce jour en français, cet ouvrage didactique et de consultation aisée est conçu pour tous les praticiens : biologistes médicaux en exercice qui, en fondant leur approche diagnostique sur la notion de marqueurs, pourront les hiérarchiser, proposer une orientation diagnostique et/ou suggérer des examens complémentaires, cliniciens pour qui cet ouvrage sera une aide au quotidien les renseignant sur les données actuelles des marqueurs biochimiques disponibles et orientant leur choix vers la stratégie d'exploration biochimique la plus rationnelle et pertinente, internes en médecine et en pharmacie qui souhaitent renforcer leur connaissances. Les étudiants en formation médicale et pharmaceutique, ou paramédicale (infirmière, sage-femmes…) le consulteront avec profit