Bubble cell for magnetic bead trapping in capillary electrophoresis

A bubble cell capillary classically used to extend the optical path length for UV-vis detection is employed here to trap magnetic beads. With this system, a large amount of beads can be captured without inducing a strong pressure drop, as it is the case with magnetic beads trapped in a standard capillary, thereby having less effect on the experimental conditions. Using numerical simulations and microscopic visualizations, the capture of beads inside a bubble cell was investigated with two magnet configurations. Pressure-driven and electro-osmotic flow velocities were measured for different amounts of protein-A-coated beads or C18-functionalized beads (RPC-18). Solid-phase extraction of a model antibody on protein-A beads and preconcentration of fluorescein on RPC-18 beads were performed as proof of concept experiments. Figure Isovalues of the magnetic induction produced by two permanent magnets in attraction configuration with a capillary placed between the

Total serum IgE quantification by microfluidic ELISA using magnetic beads

The present work reports on the quantification of total IgE in human serum using a microanalytical device whose fluidics is driven by gravity and capillary forces only. Thanks to the eight parallel microchannels in each microchip, calibration and sample analysis are performed simultaneously. A mixture of magnetic bead/analyte/second antibody is incubated off-line and then percolated through the channels where magnetic beads are trapped, enabling the separation of the solid phase from the excess reagents. The entire assay is performed in less than 1h, and thanks to the miniaturized format, only a small volume of serum is required. Non-specific adsorption was first investigated and a blocking agent compatible with this allergy-based test was chosen. Then, the assay was optimized by determining the best magnetic bead and labelled antibody concentrations. After achievement of a calibration curve with a reference material, the protocol was applied to total IgE quantification of a patient serum sample that showed results in good accordance with those obtained by ImmunoCap® and Immunoaffinity capillary electrophoresis measurements. A detection limit of 17.5ngml−1 was achieved and good reproducibility (RSD < 10%) inter- and intra-chip was observed. Figure Off-line incubation of the patient sample with anti-IgE grafted magnetic beads and ALP-labelled anti-IgE is carried out in an Eppendorff. Detection is then performed with the GRAVI®-Cell device from DiagnoSwiss, where fluidics is driven by gravity and capillary forces onl

Etude des étapes de traitement de l'échantillon et de séparation dans les microsystèmes analytiques (potentiel des monolithes organiques)

Les microsystèmes analytiques intégrés s imposent aujourd hui comme une alternative de choix face à certains défis des sciences analytiques. Cependant, un de leurs inconvénients est leur faible sensibilité. Notre but a été de développer un TAS intégrant une étape de traitement de l échantillon par extraction sur phase solide et la séparation des analytes. Les phases stationnaires monolithiques à base de monomères organiques présentent l avantage de pouvoir être photopolymérisées de façon définie au sein d un canal. Ces phases stationnaires ont ici été synthétisées de manière homogène dans le canal de séparation de microsystèmes et leur potentiel séparatif a été évalué. De bonnes résolutions ainsi que des efficacités élevées ont été obtenues. Elles ont également été mises en œuvre en tant que support d extraction sur phase solide et des composés ont été préconcentrés par la mise en œuvre de mécanismes de rétention tels que l échange d ions et la phase inverse. La possibilité de coupler en ligne la préconcentration et la séparation sur la même phase a été démontrée. Enfin, en vue d insérer des phases permettant l extraction sélective de composés cibles au sein des microsystèmes, la synthèse de monolithes adaptés au greffage d anticorps a été développée en capillaire. Le potentiel des immunoadsorbants préparés à extraire un composé cible de façon sélective a été évalué par leur couplage en tant que précolonne à la nano-CPL.PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF