Studies on Equine Placentitis

Two types of placentitis were studied: ascending and nocardioform placentitis. Although the first diagnosis of nocardioform placentitis was made three decades ago, little is known about the disease, due to the lack of an experimental model. In attempt to develop a research model, Crossiela equi was inoculated through intrauterine, intravenous, intrapharyngeal, and oral routes, but none of the routes resulted in nocardioform placentitis. This may indicate that unidentified factors may play a role in disease pathogenesis and that simple presence of bacteria is not sufficient to induce nocardioform placentitis. The second and major component of this dissertation involved the identification of diagnostic markers for placentitis. Because ascending bacterial placentitis is readily and predictably induced using existing experimental models, this model was used to identify diagnostic markers for placentitis in maternal plasma and fetal fluids. Three potential biomarkers were examined: acute phase inflammatory proteins, steroid hormones produced by the fetoplacental unit, and protein composition of the fetal fluids. Of the three acute phase proteins investigated, serum amyloid A and haptoglobin but not fibrinogen increased in association with experimentally induced ascending placentitis. Androgens and progestins appear to be poor markers for placentitis. Serum estradiol 17β concentrations were reduced in mares with experimentally induced placentitis and appear to be a good marker for placentitis in mares. Different methods were used to study the protein composition of the fetal fluids. Alpha-fetoprotein was characterized as a major protein present in the equine fetal fluids, and this protein was elevated in plasma of mares with placentitis. In another study, using a high-throughput proteomic technique several new proteins were characterized in the amniotic and allantoic fluids of mares carrying normal pregnancies, and several previously uncharacterized proteins were detected in the allantoic fluid of mares with placentitis. Three secreting proteins were elevated in allantoic fluid of mares with experimentally induced ascending placentitis

FREEZING OF DONKEY SEMEN (EQUUS ASINUS)

Por muchas décadas, el desarrollo y utilización de la inseminación artificial en loséquidos, especialmente con semen congelado, estuvo restringido, principalmente, porimposiciones de las asociaciones de criadores. Recientemente, las legislaciones de criadoresde équidos en varios países se han tornado más flexibles, permitiendo el registro deproductos oriundos de semen congelado. En el Brasil, frente a ese nuevo cambio, laprincipal asociación de criadores de burros (Associação Brasileira de Criadores de JumentoPêga) revisó sus conceptos y comenzó a permitir la utilización de esta biotecnología.Asimismo, en muchos países, el mayor interés en el asno o burro como semental estárelacionado a la producción de mulares, pues estos animales son deseables en el mediorural, debido a que reúnen las mejores características del burro y del caballo. Los primerostrabajos en congelamiento de semen de asnos utilizaron dilutores a base de yema dehuevo y glicerol, y ampolletas de vidrio como sistema de envase, basados en la metodologíade congelamiento de toros. Sin embargo, pese al tiempo transcurrido, pocas investigacioneshan sido dirigidas a esta especie, en especial a biotecnologías del semen. Enesta revisión de literatura se discuten las principales técnicas de congelamiento de semende équidos y se describen estudios referentes al congelamiento de semen de laespecie asnal.For decades, the development and use of the artificial insemination in the equine, especially with frozen semen, was restricted due to impositions of equine breeders associations that opposed the use of the technique. Recently, these legislations have become more flexible in several countries, allowing the registration of products originating from frozen semen. In Brazil, based on these changes, the main donkey breed association (Brazilian Breeders Association of the Pêga Donkeys) revised their concepts and started to allow the use of this biotechnology. The current interest in many countries for the donkey sire is the production of mules, because their acceptability as these animals inherits suitable characteristics of both donkeys and horses. The first reports on donkey frozen semen used extenders based on egg yolk and glycerol, packed in glass ampoules, and followed the existing methodology for freezing bull semen. However, despite of the elapsed time, few research works have been carried out on this species, especially on semen. This literature review discussed the main techniques of freezing equine semen and describes studies on freezing of sperm of asinine species

Sexual behavior, seminal parameters and fertility of the semen freeze from donkeys (Equus asinus) Pêga breed

Esta dissertação compreende quatro experimentos. Experimento1: Este estudo descreve algumas características do comportamento sexual de jumentos quando uma égua em estro foi usada para a coleta de sêmen. Foram usados neste estudo seis jumentos (J: 1, 2, 3, 4, 5, 6) da raça Pêga, com idade variando de 3,5 a 16 anos e pesando de 230 a 330 kg. Os animais foram previamente condicionados em um haras comercial de produção de muares localizado em Guaraciaba, Minas Gerais, Brasil. Para a colheita de sêmen, as éguas tiveram seu estro confirmado com o uso de um garanhão. As coletas foram realizadas com vagina artificial (modelo Botucatu), com água aquecida a 51ºC, pelo mesmo médico veterinário e preferencialmente distante de outros asininos. As coletas foram realizadas em intervalos de 48 a 72 horas, totalizando 180 coletas (17 a 40 coletas/reprodutor). Os parâmetros físicos e morfológicos do sêmen foram avaliados empregando-se um microscópio óptico comum, e a fração gel e a fração livre de gel foram mensuradas e avaliadas separadamente. Os dados de comportamento sexual foram analisados com uso do teste de Kruskal Wallis (P 0.05),porém foi observada diferenças entre grupos quanto ao tempo de reação. Todas as coletas de sêmen foram iniciadas com investigação olfativa do genital externo das éguas. O tempo de ejaculação, resposta de Flehmen e montas sem ereção foram similares ao descrito em monta natural usando jumentas. Entretanto, não foi observado comportamento mastigatório exibido por alguns reprodutores na presença de jumentas. O uso de égua em estro para coleta de sêmen pode ser feito eficientemente sem afetar significativamente o comportamento sexual. Experimento 2: Este experimento foi conduzido com seis jumentos reprodutores da raça Pêga, com peso médio de 272 ± 34,97 (231 326 kg), sendo subdivididos em adultos (J1, J2 e J3, 16,14 e 15 respectivamente) e jovens (J4, J5 e J6, média 3,5 anos). Os reprodutores apresentavam histórico de fertilidade normal à monta natural, e após realização de exame andrológico foram classificados como aptos à reprodução. Foram realizadas 180 coletas de sêmen, tendo os reprodutores apresentado parâmetros seminais considerados normais para a espécie. De agosto/2006 a fevereiro/2007, cada reprodutor, após a coleta de sêmen, foi submetido a três ou quatro mensurações do aparelho genital externo para comprimento testicular (CT - crânio caudal), altura testicular (AT dorso ventral), largura testicular (LT médio lateral) e espessura do funículo (FUN terço médio). Os dados de biometriatesticular foram utilizados para o cálculo do índice testicular (IT) e volume testicular (VT). O IT médio observado foi de 7,45 (5,94 a 9,64) e o VT esquerdo foi de 155,51 ± 14,45 mL, enquanto o direito foi de 149,34 ± 14,92. A medida de FUND (funículo espermático direito) foi de 25,35 ± 3,38 mm (20,38 a 30,80 mm) e a de FUNE (funículo espermático esquerdo) foi 24,61 ± 1,59 mm (22 a 26 mm). Jumentos, mesmo com IT menor do que o proposto para garanhões; se apresentaram mais eficientes que os últimos, para a produção espermática. O volume espermático associado ao IT pode ser usado como objeto auxiliar na estimativa da constatação de normalidade para testículos de jumentos. A mensuração in vivo do funículo espermático pode ser uma nova variante na utilização do exame andrológico de jumentos. Os dados descritos podem servir de valores de referência e valores práticos quanto à biometria do aparelho genital externo de jumentos. Experimento 3: Este experimento foi conduzido em um haras comercial de produção de muares. Utilizaram-se seis jumentos reprodutores agrupados em adultos (16, 15, 14 anos) e jovens (3.5, 3.5, 3.5 anos), pesando 272 ± 34,97 (231 326 kg), com objetivo de determinar os parâmetros seminais para a raça Pêga. Os animais foram submetidos a exame andrológico, sendo classificados como aptos à reprodução. Realizou-se 180 coletas de sêmen (17 a 40/animal) com o emprego de vagina artificial (modelo Botucatu). Os resultados para os parâmetros físicos e morfológicos do sêmen foram: volume sêmen: 47,27 ± 28,66 mL; volume da fração gel: 71,75 ± 54,80 mL; motilidade total 84,22% ± 6,04; motilidade progressiva: 74,47 ± 7,06%; vigor espermático: 3,87 ± 0,51; concentração espermática: 254,64 ± 91,25 x106/mL; espermatozóides totais: 10,3 ± 4525, 26 x 109; defeitos espermáticos maiores e menores: 7,97 ± 3,02 % e 6,80 ± 1,59%, respectivamente. Foram observados efeitos de classe sobre os parâmetros seminais, sendo que a presença da fração gelatinosa foi detectável em 30% das coletas (54/180 coletas) e o volume gel foi influenciado individualmente. Estes dados podem servir de referências para novos estudos. Contudo, levantamentos de campo e novos estudos devem ser conduzidos envolvendo maior número de animais para que sejam construídos valores de referência para a espécie. Experimento 4: Este delineamento compreende a avaliação de uma metodologia de congelamento do sêmen de jumentos, com o emprego de uma curva de resfriamento prévio, e com uso de dois diluidores de congelamento: meio diluidor de Martim et al. (1979) e meio diluidor de Nagase & Niwa, (1964) modificado. Foram realizadas vinte e cinco coletas de sêmen com uso de vagina artificial de cinco reprodutores da raça Pêga, pesando em média 272 ± 34,97 e com idades variando de 3,5 -17 anos. Foram realizados avaliações do sêmen fresco, resfriado e congelado nas diferentes fases da criopreservação do sêmen analisando a morfologia espermática, integridade de membrana por coloração de eosina nigrosina e teste hiposmótico, além da avaliação subjetiva dos parâmetros físicos. Em adição, foi realizado teste de fertilidade com sêmen de três reprodutores em 51 éguas (60 ciclos), sendo 30ciclos/diluidor, com o objetivo de estudar alguns aspectos envolvidos na criopreservação do sêmen de jumentos da raça Pêga. As taxas de gestação aos 13, 25 e 35 dias foram: 53,33%, 43,66% e 16,6% Nagase & Niwa (1964) modificado e 50%, 46,66% e 10% Martim et al. (1979). O teste hiposmótico se mostrou adequado para indicar a população de células que sobrevivem ao congelamento, enquanto a coloração de eosina nigrosina se mostrou inapropriada na presente metodologia. As taxas de gestação foram altas aos 13 e 25 dias pós- inseminação, porém com elevadas taxas de perdas embrionárias. Os diluidores tradicionalmente empregados para sêmen de touros e garanhões podem ser empregados para a criopreservação do sêmen de jumentos.This dissertation is compounded for four trials. Experiment 1: This paper describes field results of some sexual behavior characteristics shown by donkeys when using an estrous mare for semen collection. Six donkeys (J: 1, 2, 3, 4, 5, 6) (Pêga breed), 3.5 16 year old and body weight from 230 to 330 kg. The jacks were conditioned to breed mares in a stud farm of mule production in Guacariaba, Minas Gerais, Brazil. For the semen collections, mares estrous signs were confirmed by a teaser stallion. The collections were done with an artificial vagina (Botucatu model), (water temperature 51° C) by the same veterinarian and far from the other donkeys. The collection intervals were from 48 to 72 h totaling 180 collections (17 to 40 semen collection/ breeder).The physical and morphological seminal parameters and were evaluated using a light microscope; gel fraction and semen volume were measured separated. Behavior data were analyzed by Kruskal Wallis test P 0.05). All the collections started with sniffing of external genitalia. The ejaculation time, Flehmen response, and mounting without erection were similar to that described in natural breeding of jennies. However, no clapping mouth response was observed in the donkeys, neither difference in the mount time between jacks. In conclusion the used estrous mare was an efficient method of semen collection in donkeys neither significant effects on the sexual behavior. Experiment 2: The present study was performed with six jacks of the Pêga breed, weight from 231 to 326 kg (272 ± 34, 97). The breeders were divided in into the adult group (J1, J2 e J3, mean 15 years old) and a young group (J4, J5 e J6, mean 3,5 years old). The jacks presented records of normal rates of fertility at natural mating. Afterwards breeding soundness evaluation was performed and all animals ensure they were of capable for reproduction. Hundred eighty semen collections were performed, and the jacks presented normal seminal parameters for the specie. From August/2006 to February/2007, after semen collection each jack was submitted to three or four measurements of the extern genital tract (both right and left side) for: testis length (TL cranio caudal); testis height (TH dorsal ventral); testis width (TW lateral-lateral) and thickness of spermatic funiculum (FUN third part). The biometric data from testis biometric were used for calculation of testis indices (TI) and testis volume (TV). The average of TI observed was 7,45 (5,94 a 9,64) and TV 155,51 ± 14,45 149,34 ± 14,92 respectively left and right. The mean of FUN were for the right 25,35 ± 3,38 mm (20,38 a 30,80 mm) and 24,61 ± 1,59 mm (22 a 26 mm) for the left side. The jacks presented lesser TI than those proposed for stallions, but the asinine were more efficient than average related to stallion for sperm production. The testis volume associated with IT can be used in addition to the evaluation of the normality of the jacks breeder s testis. The measurement in vivo of spermatic funiculum can be used with other new component for the breeding soundness evaluation of jacks. The biometric values of the genital extern tract of this study it can support routine breeding evaluation and be applied to news studies. Experiment 3: This study was development in stud farm for mule and donkey production aiming to establish normal values of seminal parameters of jacks Pêga breed. Six jacks are used and arrangement in two groups adults (16, 15, 14 years old) an young (3.5, 3.5, 3.5 years old) weighting 272 ± 34,97 kg (231 326 kg). The animals were submitted to breeding soundness evaluation and all were approved for reproduction, beside that all animals present record of normal fertility. Were performed 180 semen collections (17 to 40/ jacks) by use artificial vagina Botucatu model. The values registered for physical seminal parameters and sperm morphology were: semen volume 47,27 ± 28,66 mL, gel fraction volume 71,75 ± 54,80 mL, total motility 84,22% ± 6,04, progressive motility 74,47 ± 7,06%, spermatic vigor 3,87 ± 0,51, sperm concentration 254,64 ± 91,25 x106/mL e, total sperm 10,3 ± 4525, 26 x 109, major spermatic defects and minor defects were 7,97 ± 3,02 % e 6,80 ± 1,59% in order. Were observed effect of class about seminal parameters, despite of the presence gel fraction was measurable in 30% of semen collections (54/180 collections) and the volume of gel fraction were influenced individually. This data may be used as references values for new studies. However, fields records and new studies involving greater number of breeders it should be done to establish real values for the specie. Experiment 4: This study comprehend the evaluation of the semen freezing methodology for jacks, with the application f the curve cooling pre freezing, and the use of two semen dilutors: Martim et al. (1979) and Nagase & Niwa (1964) modified. Twenty five semen collection were performed of five jacks Pêga breed; weighting 272 ± 34,97 kg and with age vary from 3,5 years to 17 years. Evaluations were performed in raw semen, cooled, and freezing semen in different phases of semen cryopreservation of the jacks Pêga breed. The analyses were: sperm morphology, membrane integrity by test stress hyposmotic and supravital stain and also physical seminal parameters. In addition, was realized fertility test in 51 mares (60 estrous cycles), 30 estrous cycles/dilutor with the semen from three breeders. The pregnancy rates were 13, 25 and 35 days were: 53,33%, 43,66% e 16,6% for Nagase & Niwa (1964) modified and 50%, 46,66% e 10% Martim et al. (1979).The hiposmotic test showed suitable test for indication the sperm cells survivors to the cryopreservation procedures, while the supravital stain was unsuitable for the present methodology. The pregnancy rates were elevated between days 13th and 25th, but slight rates of embryo loss. The traditionally dilutors used for semen bulls and stallions can be used for jacks semen cryopreservation.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

Alguns aspectos biométricos do aparelho genital externo de jumentos doadores de sêmen da raça Pêga

O presente estudo foi conduzido com seis jumentos reprodutores da raça Pêga, com peso médio de 272±34,9 (231-326kg), sendo subdivididos em adultos (J1, J2 e J3, média 15 anos) e jovens (J4, J5 e J6, média 3,5 anos). Os reprodutores apresentavam histórico normal de fertilidade à monta natural e, após realização de exame andrológico, foram classificados como aptos à reprodução. Foram realizadas 180 coletas de sêmen. Os reprodutores apresentaram parâmetros seminais considerados normais para a espécie. De agosto/2006 a fevereiro/2007, após a realização do exame andrológico, cada reprodutor foi submetido a três ou quatro mensurações do aparelho genital externo para: comprimento testicular (CT - crânio caudal), altura testicular (AT - dorso ventral), largura testicular (LT - médio lateral) e espessura do funículo (FUN - terço médio). Os dados de biometria testicular foram utilizados para o cálculo do índice testicular (IT) e volume testicular (VT). O IT médio observado foi de 7,4 (5,9 a 9,6), e o VT esquerdo foi de 155,5±14,4mL, enquanto o direito foi de 149,3±14,9. A medida de FUND foi de 25,3±3,3mm (20,3a 30,8mm), e de FUNE foi 24,6±1,5mm (22 a 26mm). Jumentos, mesmo com IT menor do que o proposto para garanhões; se apresentaram mais eficientes que os últimos para a produção espermática. O volume espermático, associado ao IT, pode ser usado como ferramenta auxiliar na estimativa da constatação de normalidade para testículos de jumentos. A mensuração in vivo do funículo espermático pode ser uma nova variante na utilização do exame andrológico de jumentos. Os dados descritos podem servir de valores de referência e valores práticos quanto à biometria do aparelho genital externo de jumentos.The present study was performed with six Pêga breed donkeys, weight from 231 to 326kg (272±34.9). The breeders were divided into the adult group (J1, J2 e J3, 15 years old average) and the young group (J4, J5 e J6, 3.5 years old average). . The donkeys presented normal rates of fertility at natural mating. After breeding soundness evaluation all animals were considered capable for reproduction. A hundred eight semen collections were realized, and the donkeys presented normal seminal parameters for the specie. From August/2006 to February/2007, after semen collection each donkey was submitted to three or four measurements of the extern genital tract (both right and left side) for: testis length (LT - cranio caudal); testis height (TH - dorso ventral) and thickness of spermatic funiculum (FUN - third part). The biometric data from biometric testis were used to calculate the testis indices (TI) and testis volume (TV). The TI observed was 7.4 (5.9 a 9.6) and TV was 155.5±14.4, 149.3±14.9 respectively left and right. The average FUN was 25.3±3.3mm (20.3 a 30.8mm) to the right and 24.6±1.5mm (22 a 26mm) to the left side. The donkeys presented lesser TI than those proposed for the stallions, but the asinine were more efficient for sperm production than the average reported to stallions . The testis volume associated with IT can be used as an additional tool to estimate the normality of the breeder's testis. The measurement in vivo of spermatic funiculum can be used as a new component for the breeding soundness evaluation of donkeys. The genital extern tract biometric values can support routine breeding evaluation and can be applied to news studies

Freezing of donkey semen (Equus asinus)

For decades, the development and use of the artificial insemination in the equine, especially with frozen semen, was restricted due to impositions of equine breeders associations that opposed the use of the technique. Recently, these legislations have become more flexible in several countries, allowing the registration of products originating from frozen semen. In Brazil, based on these changes, the main donkey breed association (Brazilian Breeders Association of the Pêga Donkeys) revised their concepts and started to allow the use of this biotechnology. The current interest in many countries for the donkey sire is the production of mules, because their acceptability as these animals inherits suitable characteristics of both donkeys and horses. The first reports on donkey frozen semen used extenders based on egg yolk and glycerol, packed in glass ampoules, and followed the existing methodology for freezing bull semen. However, despite of the elapsed time, few research works have been carried out on this species, especially on semen. This literature review discussed the main techniques of freezing equine semen and describes studies on freezing of sperm of asinine species.Por muchas décadas, el desarrollo y utilización de la inseminación artificial en loséquidos, especialmente con semen congelado, estuvo restringido, principalmente, porimposiciones de las asociaciones de criadores. Recientemente, las legislaciones de criadoresde équidos en varios países se han tornado más flexibles, permitiendo el registro deproductos oriundos de semen congelado. En el Brasil, frente a ese nuevo cambio, laprincipal asociación de criadores de burros (Associação Brasileira de Criadores de JumentoPêga) revisó sus conceptos y comenzó a permitir la utilización de esta biotecnología.Asimismo, en muchos países, el mayor interés en el asno o burro como semental estárelacionado a la producción de mulares, pues estos animales son deseables en el mediorural, debido a que reúnen las mejores características del burro y del caballo. Los primerostrabajos en congelamiento de semen de asnos utilizaron dilutores a base de yema dehuevo y glicerol, y ampolletas de vidrio como sistema de envase, basados en la metodologíade congelamiento de toros. Sin embargo, pese al tiempo transcurrido, pocas investigacioneshan sido dirigidas a esta especie, en especial a biotecnologías del semen. Enesta revisión de literatura se discuten las principales técnicas de congelamiento de semende équidos y se describen estudios referentes al congelamiento de semen de laespecie asnal