Casein phosphopeptides drastically increase the secretion of extracellular proteins in Aspergillus awamori. Proteomics studies reveal changes in the secretory pathway

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The secretion of heterologous animal proteins in filamentous fungi is usually limited by bottlenecks in the vesicle-mediated secretory pathway.</p> <p>Results</p> <p>Using the secretion of bovine chymosin in <it>Aspergillus awamori </it>as a model, we found a drastic increase (40 to 80-fold) in cells grown with casein or casein phosphopeptides (CPPs). CPPs are rich in phosphoserine, but phosphoserine itself did not increase the secretion of chymosin. The stimulatory effect is reduced about 50% using partially dephosphorylated casein and is not exerted by casamino acids. The phosphopeptides effect was not exerted at transcriptional level, but instead, it was clearly observed on the secretion of chymosin by immunodetection analysis. Proteomics studies revealed very interesting metabolic changes in response to phosphopeptides supplementation. The oxidative metabolism was reduced, since enzymes involved in fermentative processes were overrepresented. An oxygen-binding hemoglobin-like protein was overrepresented in the proteome following phosphopeptides addition. Most interestingly, the intracellular pre-protein enzymes, including pre-prochymosin, were depleted (most of them are underrepresented in the intracellular proteome after the addition of CPPs), whereas the extracellular mature form of several of these secretable proteins and cell-wall biosynthetic enzymes was greatly overrepresented in the secretome of phosphopeptides-supplemented cells. Another important 'moonlighting' protein (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase), which has been described to have vesicle fusogenic and cytoskeleton formation modulating activities, was clearly overrepresented in phosphopeptides-supplemented cells.</p> <p>Conclusions</p> <p>In summary, CPPs cause the reprogramming of cellular metabolism, which leads to massive secretion of extracellular proteins.</p

DNA EXTRACTION FROM HEAVY OIL CONTAMINATED MICROCOSMS AND RPOB GENE PCR AMPLIFICATION EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE MICROCOSMOS CONTAMINADOS CON PETRÓLEO PESADO Y AMPLIFICACIÓN DEL GEN RPOB

This work describes a new method for extracting genomic DNA from heavy oil-contaminated soils. This method combines soil washes using three washing solutions with enzymatic lysis (SW-EL method). The suitability of the SW-EL method was validated by extracting DNA from samples as small as 0.5 g from model microcosms comprising soil artificially contaminated with 1 and 10% (w/w) heavy petroleum and seeded with a bacterial consortium. Compared with an established protocol for lysis and DNA purification using the commercial kit GeneReleaserTM (Bioventures) (GRL method), the novel SW-EL method provided higher DNA yields. With the addition of GeneReleaser to the PCR reaction to function as a chelating resin, rpoB genes (serving as model genes) could be successfully amplified. The SW-EL method has potential to be of use for DNA-based analysis of microbial consortia present in heavy-oil contaminated soils.<br>Este trabajo describe un nuevo método de extracción de ADN genómico de suelo contaminado con petróleo pesado. El método combina lavados del suelo usando tres soluciones de lavado con lisis enzimática de las células (método SW-EL). El método SW-EL fue validado mediante la extracción de ADN de muestras de 0,5 g tomadas de microcosmos preparados con suelo artificialmente contaminado con petróleo pesado al 1 y 10% (p/p) e inoculados con un consorcio bacteriano. Comparado con un protocolo establecido de lisis y obtención de ADN usando el kit comercial Gene ReleaserTM (Bioventures) (método GRL), el nuevo método SW-EL permitió obtener mayor cantidad de ADN. Con la adición de Gene Releaser como resina quelante a la reacción de PCR, los genes rpoB (usados como modelo) fueron amplificados, indicando que el método SW-EL puede ser usado para analizar los consorcios microbianos presentes en suelos contaminados con petróleos pesados

Mangrove timber use as an ecosystem service in the Colombian Pacific

Mangroves provide ecosystem services for local communities. However, in coastal systems it is yet unknown how human settlements are directly interacting with mangroves. We assessed the use of mangroves as an ecosystem service at Málaga and Buenaventura bays, on the Colombian Pacific coast, by interviewing local communities and examining the impact of mangrove harvest on the structure of the forest, an often overlooked effect. Results showed that mangroves are mainly harvested for their wood. Rhizophora spp. are the main source of wood for fuel purposes, whereas Mora oleifera (Triana ex Hemsl.) Ducke, a mangrove associate, provides 100% of the wood used for the construction of stilt houses. The selective extraction of these species has altered the composition and structure of the forest. Sample sites undergoing harvest have relatively low densities of mangroves; however, one site at Quebrada Valencia shows signs of copious regeneration (>9000 seedlings/ha). Due to the importance of mangroves for the subsistence of coastal communities, and the threat that mangroves are exposed to in Colombia, the management of mangroves should be a priority. Managers must address the sustainability of critical species as part of conservation strategies in order to maintain ecosystem services for local communitie

La dinámica de las firmas: un análisis desde la economía del conocimiento

Este documento hace un análisis de la transformación estructural de dos sectores de la economía; para su desarrollo se hace un recorrido por la construcción teórica que diversos autores han realizado sobre conceptos como la sociedad del conocimiento, sociedad de la información, la sociedad en red, la economía del conocimiento y cómo influye en las dinámicas productivas de los territorios y de las firmas, contiene también un análisis de los indicadores pertinentes para determinar si hay un avance hacia una transformación estructural que evidencie el acercamiento de las Pequeñas y Medianas Empresas (PYMES) con la innovación tecnológica, las Tecnologías de Información y la Comunicación (TIC's), la Investigación y Desarrollo en los procesos y los productos de las empresas. También se hace referencia al trabajo de campo elaborado con las pymes de los sectores alimentos (biotecnología) y textil-confección (diseño) en Medellín-Valle del Aburrá y Manizales- Villamaría. Se presenta una nota metodológica, describiendo el proceso, el enfoque, los métodos y las herramientas utilizadas para el análisis de la información, seguido de la descripción estadística y análisis de los factores más representativos en dichas pymes con referencia a la transformación estructural basada en la economía del conocimiento

Caracterización y obtención de cepas mejoradas de hongos entomopatógenos.

IP 2251-12-330-95Incluye también Etapa 3.aislamientos de Beauveria bassiana de una coleccion de hongosentomopatogenos de Cenicafe / Beatriz Elena;Valdes Duque, Patricia Eugenia Velez Arango. -- En: Revista colombiana deentomologia. -- vol. 24, no. 1-2;(ene.-jun. 1998); p.61-66. -- ISSN 01200488 -- Analisis delavariabilidadgenetica del hongo entomopatogeno;Beauveria bassiana con marcadores RAPD / Ana Milena ValderramaF., Marco Aurelio Cristancho A., Bernardo;Chaves C. -- En: Revista colombiana de entomologia. -- vol. 26,no. 1-2 (ene.-jun. 2001); p. 25-29. -- ISSN;01200488 -- Estandarizacion de una metodologia para obtener cultivos monoesporicos del hongo Beauveria;bassiana / Maria Nancy Estrada V., Patricia E. Velez A., JuanCarlos LopezN. -- En: Cenicafe : revista del;Centro Nacional de Investigaciones de Cafe. -- vol. 48, no. 1(ene.-mar. 1997); p. 59-65. -- ISSN 01200488 --;detection of Beauvericin from the entomopathogenic fungus: Beauveria bassiana / J.W.V. Arboleda, F.B. Deldago;and A.J. Valencia. -- En: International Colloquium on Invertebrate Pathology and Microbial Control (ICIPMC),;Annual Meeting of the SIP, International Conference on BacillusThuringiensis (ICBt). (8, 25, 6 : 2002 Aug.;18-23) -- ARTICULO(S) EN REVISTA: Actividad enzimatica dehongosy su patogenicidad sobre Hypothenemus hampei;/ Fernando Delgado Blandon, Yamel Lopez Forero, Elsa MariaGiraldo Cardozo. -- En: Revista manejo integrado de;plagas. -- No. 60 (2001); p. 43-49 -- Actividad lipoliticay proteoliticade Beauveria bassiana y Metarhizium;anisopliae y su relacion con la patogenicidad sobre Hypothenemushampei (Coleoptera: Scolytidae) / Elsa Maria;Giraldo Cardozo ... [et al.]. -- En: Revista colombiana deentomologia. --vol. 27, no. 1-2 (ene.-jun. 2001);p. 61-65. -- ISSN 01200488 -- Caracterizacion de aislamientosdeBeauveriabassiana y Metarhizium anisopliae;de la coleccion de Cenicafe / Patricia E. Velez A... [et al.].-'- en: Revista colombiana de entomologia. --;vol. 25, no. 3-4 (jul.-dic. 1999); p. 191-207. -- ISSN 012488'-- Caracterizacion bioquimica cualitativa de;Colombiana de Entomologia, Socolen (28 : 2001 ago. 8-10 :Pereira, Colombia) -- [s.l. : s.n.], 2001 -- p. ; 28;cm. -- Avances en el estudio de la toxina beauvericina producidapor el hongo Beauveria bassiana patogenico a;Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Scolytidae) / JorgeWilliam Arboleda V., Fernando Delgado B. -- En:;Congreso de la Sociedad Colombiana de Entomologia, Socolen(28:2001 ago.8-10 : Pereira, Colombia) -- [s.l.;: s.n.], 2001 -- p. ; 28 cm. -- Biologia de Phymastichus coffeaLasalle (Hymenoptera: Eulophidae);endoparasitoide de la broca del cafe, en tres altitudes diferentes de la zonacafetera colombiana / Fernando;Cantor R. ... [et al.]. -- En: Congreso de la Sociedad Colombiana de Entomologia, Socolen (28 : 2001 ago. 8-10;: Pereira, Colombia) -- [s.l. : s.n.], 2001 -- p. ; 28 cm.--Produccion de anticuerpos policlonales para;deteccion de Beauvericina del hongo entomopatogeno Beauverianabassiana /Jorge W. Arboleda V., Fernando;Delgado B., Arnubio Valencia J. -- En: Congreso de la SociedadColombianade Entomologia, Socolen. (29 : 2002;jul. 18-19 : Monteria, Colombia) -- [s.l. : s.n.], 2002 --p.;28 cm. --Polyclonal antibodies productions to;Caracterizacion de cultivos monoesporicos del hongo Beauveriabassiana / Maria Nancy Estrada Valencia,;Patricia Eugenia Velez Arango, Esther Cecilia Montoya Restrepo.'-- en: Cenicafe : revista del Centro Nacional;de Investigaciones de Cafe. -- vol. 48, no. 4 (oct.-dic. 1997);p. 217-224. -- ISSN 01200275 -- Esporulacion,;germinacion y patogenicidad de aislamientos monoesporicosde Beauveria bassiana / Maria Nancy Estrada Velez;... [et al.]. -- Cenicafe : revista del Centro Nacional deInvestigacionesde Cafe. -- vol. 50, no. 1;(ene.-mar. 1999); p. 5-23. -- ISSN 01200275 -- Caracterizacionenzimaticay patogenicidad de aislamientos de;Beauveria bassiana sobre la broca del cafe / Beatriz ElenaValdes D., Patricia Eugenia Velez Arango, Esther;Cecilia Montoya Restrepo. -- Cenicafe : revista del CentroNacional de Investigaciones de Cafe. -- vol. 50,;no. 2 (abr.-jun. 1999); p. 106-118. -- ISSN 01200275 -- Evaluacion en campo de un aislamiento de Beauveria;bassiana seleccionado por resistencia a la luz ultravioleta /Sandra Patricia Tobar H., Patricia Eugenia Velez;Arango, Esther Cecilia Montoya Restrepo. -- En: Revista del Centro Internacional de Investigacion de Cafe. --;01200275.;PONENCIA(S) EN CONGRESO: Transformacion de Beauveria bassianacon la proteina verde fluorescente y proteasas;de Metarhizium anisopliae / Carmenza E. Gongora B. -- En:Congreso de la Sociedad Colombiana de Entomologia,;Socolen (28 : 2001 ago. 8-10 : Pereira, Colombia) -- [s.l.: s.n.], 2001 -- p. ; 28 cm. -- Taller con;caficultores experimentadores para evaluar Beauveria bassianaenel control de Hypothenemus hampei (Ferrari);(Coleoptera: Scolytidae) / Francisco Javier Posada Florez...[et al.]. --En: Congreso de la Socieda