Distinctive EBV infection characteristics in children from a developing country

Background: In developing countries, Epstein–Barr virus (EBV) infection is mostly asymptomatic in early childhood. EBV persistence may lead to different malignancies, such as B cell derived lymphomas. In Argentina, most children are seropositive at three years and an increased association between EBV and lymphoma was proved in children under 10 years old by our group. Objective: Our aim was to characterize EBV infection at the site of entry and reactivation of viral infection —the tonsils— in order to better understand the mechanism of viral persistence in pediatric patients. Methods: A cohort of 54 patients was described. We assessed specific antibodies profiles in sera; viral proteins presence by IHC on FFPE samples and EBV type from fresh tissue. Results: EBV type 1 was prevalent, mostly in the youngest patients. Asymptomatic primary infected patients presented higher viral loads and Latency 0/I or II patterns, whereas the Latency III pattern was observed mostly in healthy carriers. There were no differences between groups in the expression of viral lytic antigens. This study discloses new features in patients undergoing primary infection from a developing population. Low viral inoculum and restricted viral antigen expression may be responsible for the lack of symptoms in children from our country.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Vistarop, Aldana Georgina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Moyano, Agustina Ayelén. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Preciado, María Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentin

Características de la infección por EBV y análisis de poblaciones NK en amígdalas comparados con pacientes sanos

La respuesta de NK juega un rol importante en el control de la infección y la transformación mediada por virus de Epstein Barr (EBV) en niños de países desarrollados. Se desconoce la respuesta de NK en el marco de la infección asintomática en niños de países subdesarrollados. Nuestro objetivo fue caracterizar la infección por virus de Epstein-Barr (EBV) y su relación con las células NK presentes en el sitio de entrada y reactivación viral, las amígdalas.Analizamos 61 pacientes (rango etario 1-15 años, mediana 5 años), que fueron amigdalectomizados en el servicio de otorrinolaringología del HNRG. El estatus de infección viral fue determinado por serología, identificando pacientes no infectados (NI), primoinfectados (PI), portadores (HC) y cursando reactivación viral (R). La carga viral se determinó por PCR en tiempo real. La expresión de antígenos virales se evaluó por Inmunohistoquímica (IHQ) para LMP1, LMP2A, EBNA2 y BMRF1 y por hibridación in situ (HIS) para EBERS. Para identificar las subpoblaciones de NK presentes en el tejido y su funcionalidad se realizó IHQ para CD56, CD16, IFNg y GrzB. Los resultados se expresaron como células positivas/mm2. Además, en un subgrupo de 34 pacientes se realizó citometría de flujo para CD3, CD56, CD16, CD94 y NKG2D con el objetivo de analizar los subgrupos de NK.A partir del suero de 61 pacientes se identificaron 21 PI, 28 HC, 8 R y 4 NI. Si bien la CV resultó ser baja en todos los grupos, fue mayor en PI ( p=0.0306, Kruskal-Wallis test).Respecto del perfil de latencia, la latencia III se observó casi exclusivamente en HC (p= 0.0429, test de X2), mientras que los PI sólo presentaron Latencias I y II, no se observaron diferencias en la expresión de BMRF1 entre grupos de pacientes, sin embargo se hallaron diferencias significativas solamente en el recuento de células CD16+ en presencia o ausencia de este antígeno lítico (p=0.0370. test de Mann-Whitney). Las células CD56+ e IFNg+ analizadas por IHC presentaron correlación positiva entre ellas en el conjunto de pacientes (r=0.4012, p=0,0047) y específicamente en PI (r=0.7, p=0.002). El análisis por CF demostró correlación negativa entre CD56+ y la CV en todos los pacientes (r=-0,5469, p=0.039). En PI observamos correlación entre la edad y las células CD94+NKG2D+ (r=0,6685, p=0.0245) , mientras que en HC se demostró correlación positiva entre la edad y las células CD94-NKG2D- ( r= 0,5903, p= 0,0099)En PI encontramos baja carga viral, expresión restringida de antígenos virales de latencia y/o de ciclo lítico -que gatilla la respuesta inmune mediada por NK-, factores que pueden estar relacionados a la ausencia de síntomas. La menor carga viral asociada a un mayor recuento de células CD56+ puede estar reflejando un reclutamiento de células NK para controlar la infección por EBV, particularmente en pacientes mayores, en los que predomina la población CD94+NKG2D+. A su vez, el control por parte de las NK podría estar mediado por la producción de IFNg.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Vistarop, Aldana Georgina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, M. I.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaXXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de VirologíaArgentinaSociedad Argentina de Virologí

Role of NK cells in the control of EBV infection in pediatric patients

El virus de Epstein-Barr (EBV) es un miembro de la familia Herpesviridae que infecta, de forma latente y de por vida, al 90% de la población mundial. Su sitio de ingreso son las amígdalas, donde encuentra a sus células blanco, los linfocitos B. En países en vías de desarrollo la infección primaria ocurre mayoritariamente en la primera infancia de forma asintomática. Particularmente en Argentina, el 70% de los niños y niñas evaluados por nuestro grupo, presentaron serología positiva para EBV en los primeros 3 años de vida. El EBV posee potencial oncogénico dada la expresión de oncoproteínas mediante las cuales regula la supervivencia de los linfocitos B durante el establecimiento de la infección. Nuestro grupo de trabajo describió una asociación entre la presencia del EBV y el desarrollo de linfomas en pacientes pediátricos menores de 10 años. Las células NK cumplen funciones tanto antivirales como antitumorales, dada su capacidad de producir citoquinas como interferón gamma (IFNγ), y de reconocer células tumorales por el mecanismo conocido como respuesta missing-self. En pacientes pediátricos de países desarrollados se demostró que las células NK cumplen un rol fundamental en la infección primaria por EBV. Particularmente, se describió que la subpoblación caracterizada como CD56BrightCD94+, prevaleciente en pacientes pediátricos que se hallaban cursando la primoinfección, restringe la infección viral y la transformación mediada por EBV. El objetivo de este trabajo fue, por un lado, describirla infección por EBV en las amígdalas, sitio de ingreso y reactivación viral y, por otro lado, analizar las características de las células NK presentes en las amígdalas y su capacidad de controlar la infección por EBV in-vitro. Se analizó un total de 84 pacientes pediátricos de 1 a 15 años de edad (mediana 5 años), clasificados según su estatus serológico para EBV. Se determinó la carga viral mediante PCR en tiempo real y el tipo viral por PRC dirigida al gen codificante para la proteína EBNA3C. Mediante inmunohistoquímica para las proteínas virales LMP1, LMP2a, EBNA2 y BMRF1 e hibridización in- situ para los transcriptos virales EBERs, se determinó el perfil de latencia presente en cada paciente. Por inmunohistoquímica para CD56, IFNγ y Granzima B (GzB) se analizó de forma indirecta la presencia y actividad de las células NK en el tejido. Se caracterizaron por citometría de flujo los marcadores CD3, CD56 y CD16, CD94, NKG2D, CD34, CD57, c-kit (CD117) y CD69 y se evaluó la capacidad de las células NK de producir IFNγ luego de ser estimuladas. Se realizaron ensayos in-vitro para determinar la capacidad de las células NK de inhibir la infección por EBV y la producción de IFNγ en presencia del virus mediante ELISA. No se observaron diferencias en la edad ni en la carga viral entre los 4 grupos de pacientes. No hubo diferencias significativas en los perfiles de latencia entre grupos de pacientes, aunque el perfil LIII se presentó casi exclusivamente en portadores sanos. Se encontró un número significativamente mayor de casos positivos para BMRF1 en portadores sanos. El EBV tipo 1 prevaleció en la cohorte de pacientes. La infección por EBV-2 fue mayor en pacientes mayores de 10 años y sólo 3 pacientes presentaron coinfección. Por inmunohistoquímica se observó una correlación positiva entre CD56 e IFNγ particularmente en pacientes primoinfectados y un aumento en el número de células positivas para GzB en pacientes no infectados. Los pacientes infectados presentaron un mayor porcentaje de células CD56Bright respecto de los no infectados. No se observó un aumento significativo en ninguna de las subpoblaciones de CD56Bright ni en la producción de IFNγ en pacientes primoinfectados. Por el contrario, la producción de IFNγ fue mayor en pacientes no infectados. En línea con estos hallazgos, los ensayos in-vitro no arrojaron diferencias significativas en los números de células infectadas por EBV en presencia o ausencia de NK, mientras que el IFNγ producido fue, en casi todos los casos, menor al límite de detección del ELISA. La presencia de subpoblaciones de CD56Bright caracterizadas por una baja expresión de CD94, junto con la expresión de marcadores de inmadurez como CD34 y baja expresión de CD57, con una producción poco eficiente de IFNγ tanto en los pacientes como frente a células infectadas por EBV in-vitro, podrían estar asociadas a defectos en el control de la infección por EBV.Epstein-Barr virus is a member of the Herpesviridae family that infects, latently and for the host life, 90% of the population worldwide. Its site of entry is de tonsils where it infects the target cells, the B cells. In developing countries, the primary infection occurs mostly in childhood and is usually asymptomatic. Particularly in Argentina, 70% of the children evaluated by our group, presented positive serology for EBV in the first 3 years of life. EBV has oncologic potential given the expression of oncoproteins which regulates the survival of the B cells during the infection establishment. Our group has described an association between the presence of EBV and different types of lymphoma development in patients under 10 years of age. NK cells have both antiviral and antitumoral roles, thanks to their capacity to produce cytokines such as gamma interferon (IFNγ), and the capacity to recognize tumor cells through the “missing self” mechanism. In pediatric patients from developed countries, it was demonstrated that NK cells play a key role in the control of EBV infection. Particularly, it was reported that the CD56BrightCD94+ population, predominant in pediatric patients undergoing primary infection, restricts both viral infection and EBV-mediated transformation. The aim of this work was, in one hand, to characterize EBV infection in tonsils, the site of viral entry and reactivation and, on the other, to analyze the characteristics of the NK cells present in the tissue and its capacity to control EBV infection in-vitro. A total of 84 patients between 1 and 15 years of age (median 5 years) were analyzed, classified according to their serological status for EBV infection. Viral load was determined by real time PCR and viral type was assessed by PCR directed against the gene coding for EBNA3C protein. Immunohistochemistry (IHC) was performed to assess the presence of viral proteins LMP1, LMP2a, EBNA2 and BMRF1 and in-situ hybridization was performed to detect viral transcripts EBERs, with this data the latency profile expressed in each patient was determined. CD56, IFNγ and Granzime B (GzB) were detected by IHC to indirectly determine the presence and activity of NK cells in the tissue. Flow Cytometry was performed to analyze the expression of CD3, CD56 y CD16, CD94, NKG2D, CD34, CD57, c-kit (CD117) y CD69 and to determine the capacity of NK cells to produce IFNγ after being stimulated. In-vitro assay was performed in order to determine the capacity of NK cells to restrict EBV infection and ELISA was used to measure the IFNγ produced by NK cells during the assay. There were no differences neither in age nor in viral load between the 4 groups of patients. No differences were observed in the latency profile when the groups of patients were compared, although LIII profiles was almost exclusively present in healthy carriers. BMRF1 positive cells were found mostly in healthy carriers. EBV type 1 prevailed in the entire cohort of patients. EBV type 2 infection was higher in patients of 10 years or older and only 3 patients were co-infected. When IHC results were analyzed, a positive correlation between CD56 e IFNγ was found, particularly in primary infected patients, also, a high number of GzB positive cells were found in non-infected patients. Infected patients presented a higher percentage of CD56Bright cells compared with non-infected patients. No significant increase of any CD56Bright subpopulation or IFNγ production was observed in the primary infected group. On the contrary, IFNγ production was higher in non-infected patients. In-vitro assays showed no differences in the number of infected cells regardless the presence or absence of NK cells. IFNγ levels assessed by ELISA were lower than the detection limits in almost all cases. The presence of CD56Bright subpopulations characterized by low CD94 expression, together with a high expression of immaturity features such as high percentage of CD34 and low expression of CD57, together with the inefficient IFNγ production in patients as well as against EBV-infection in-vitro, might be associated with defects in the control of EBV infection.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Mujer y revolución: políticas del Partido Bolchevique en el poder con respecto a la emancipación femenina (1917-1930)

El presente artículo tiene como objetivo dar cuenta de los alcances y los límites de la Revolución Rusa en materia de las medidas y prácticas para la emancipación de las mujeres, teniendo en cuenta el periodo de 1917 hasta 1930, momento en que se consuma la contrarrevolución estalinista. Para desarrollar este objetivo comenzaremos recuperando algunas ideas en torno la situación de las mujeres en la época pre‐revolucionaria en Rusia para, luego, exponer las ideas bolcheviques sobre la opresión de las mujeres y las políticas para su emancipación y, por último, expondremos cómo se han puesto en práctica dichas políticas y los problemas que implicó llevarlas adelante a través de departamentos como el Zhenotdel

Tonsillar cytotoxic CD4 T cells are involved in the control of EBV primary infection in children

Abstract CD4 T cells play a key role in Epstein Barr virus (EBV) infection, by modulating latent antigen expression, and exhibiting cytotoxic and regulatory properties. Our aim was to evaluate the presence of Granzyme B (GZMB) and Foxp3 CD4 T cells at different EBV infection status and latency profiles. We examined CD4, GZMB, Foxp3, IL10, TGF-β, CD4-GZMB and CD4-Foxp3 expression at the tonsils of pediatric patients with different infective status and EBV latency profiles. CD4+, GZMB+, Foxp3+, CD4-GZMB+ and CD4-Foxp3+ cell counts were higher at the interfollicular region. Higher expression of CD4-GZMB was found in primary infected patients compared to healthy carriers. In patients that expressed latency III antigens, we demonstrated lower CD4+, CD4-GZMB+, CD4-Foxp3+ expression; a negative correlation between the immunoregulatory cytokine IL-10+ and GZMB+ as well as a positive correlation of IL-10+ and CD4+. In patients expressing the lytic protein BMRF1, a positive correlation of TGF-β+ with CD4-GZMB+ and CD4-Foxp3+ was observed. Our findings indicate that CD4-GZMB+ cells are involved in the restriction of primary EBV infection in pediatric patients, which could partially explain the lack of symptoms, whereas both CD4-GZMB+ and CD4-Foxp3+ cells could be involved in the modulation of latency

M1 macrophage polarization prevails in EBV infected children in an immuneregulatory environment

Macrophages can be polarized toward a proinflammatory phenotype (M1) (CD68+) or to an anti-inflammatory one (M2) (CD163+). Polarization can be triggered by cytokines such as IFN-γ for M1, or IL-10 and TGF-β, for M2. In the context of pediatric EBV infection, little is known about macrophage polarization in EBV primary or persistent infection. When studying tonsils of patients undergoing primary infection (PI), healthy carrier (HC), reactivation (R) and not infected (NI), M1 profile prevailed in all infection status. However, an increase in M2 cells was observed in those patients with broader expression of latency antigens, in particular EBNA2. Tonsils from primary infected patients showed an increased IL-10 expression, whereas, unexpectedly, TGF-β expression correlated with M1 marker. Furthermore, an inverse correlation was demonstrated between CD68 and IFN-γ. Therefore, in the context of asymptomatic infection in children, M1 macrophage polarization prevails, even in the presence of IL-10 and TGF-b immunomodulatory cytokines, and it might be independent from lymphomagenesis process. Our finding indicates that macrophages may have a significant plasticity in response to different types of extrinsic stimuli, and further studies are required to investigate M1 polarization under anti-inflammatory stimuli.Fil: Moyano, Agustina Ayelén. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentin

Expression of EBV-encoded genes in children with asymptomatic infection detected by sensitive methods

Epstein–Barr virus (EBV) is an usually harmless virus whose oncogenic properties in vitro are related to its ability to transform lymphoid cells, and, in consequence, it can be associated with lymphomas. Since a few studies detected EBV presence in supposedly EBV-negative lymphomas, our aim was to evaluate EBV presence by sensitive gene expression assays in the tonsils from healthy pediatric donors from a region with high incidence of EBV-associated lymphomas. EBERs transcripts were detected by View RNA ISH in all cases, even in cases assessed negative by widely used in situ hybridization. The presence of LMP1 transcripts was proved in 93% of cases, co-expressed with EBNA2 in 30%. In this study, evidence for the expression of different latent and lytic viral genes in a population of young age of primary infection, detected with more sensitive methods, in particular at the germinal center, where most EBV-associated lymphomas originate, was provided.Fil: Vistarop, Aldana Georgina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, María Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentin

PD-L1 is upregulated in CD163+ tonsillar macrophages from children undergoing EBV primary infection

Epstein–Barr Virus (EBV) is a tumor associated virus that modulates not only the infected cells but also innate and adaptive immunity. Macrophages play a key role in tumor development and progression. Particularly, the M2 phenotype (CD163) with anti-inflammatory activity contributes to a favorable microenvironment for tumor development while the M1 (CD68) proinflammatory phenotype contributes to a restrictive one. In the context of pediatric EBV infection, little is known about macrophage contribution to PD-L1 expression, a molecule involved in immune exhaustion. We studied tonsils of primary infected (PI), healthy carriers (HC), reactivated (R), and not infected (NI) pediatric patients. Positive correlations were demonstrated for CD68+PD-L1+ in R and for CD163+PD-L1+ only in PI. Furthermore, CD163+PD-L1+ cell numbers were higher than PD-L1+CD68+ in PI patients. In addition, a positive correlation between PD-L1+CD163+ cells and LMP1 viral latent protein was observed in PI patients, and a positive correlation between PD-L1+CD68+ cells and BMRF1 lytic antigen was demonstrated. A positive correlation between TGF-β and PD-L1 expression was demonstrated in HC patients. Our findings indicate that EBV’s lytic and latent antigens might be regulating macrophages’ PD-L1 expression, particularly in PI patients, whereas, surprisingly, only TGF-β could be related to total PD-L1 upregulation. Given the relevance of macrophages and the PD-1/PD-L1 pathway in tumor progression and survival, more studies in early EBV infection could help to develop EBV-associated tumor therapies.Fil: Moyano, Agustina Ayelén. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, María Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentin

Epidemiological presentation of EBV infection and characterization of NK subpopulations in the tonsils of pediatric patients compared with non-infected patients

Several studies demonstrated the keyrole of NK cells in the control of early infection and EBVmediated transformation in children from developed countries. Therefore, our aim wasto characterizeEBV infectionin relation to NK cell subsets at the tonsils, site of viral entry and reactivation, inchildren from Argentina.We analyzed 76 patients (1-15 years, median 5) undergoing tonsillectomy. EBV primary infection(PI), reactivation (R), carrier (HC), or non-infected (NI) status was defined by serology. Viral load(VL) was evaluated by qPCR.Viral antigen expression was assessed by Immunohistochemistry(IHC) for LMP1, LMP2A, EBNA2 and BMRF1, and byEBERS in situ Hybridization (ISH). CD56,CD16, IFNg and GrzB IHC (expressed as positive cells/mm2) was performed tocharacterize NKcells. CD3, CD56, CD16, NKG2A and NKG2DNK subsets were identifiedin 44patients by FlowCytometry (FC). EBV typification was performed using primers directed against EBNA3C gene.Twenty-three PI patients,38HC,10 R patients and 5 NI patients were discriminated. No significantdifferences regarding age and VL among groups were demonstrated(p> 0.05) even though PI patientshad a higher VL mean. Unexpectedly, latency III pattern was observed exclusively in HC (p=0.0342,X2 test). CD56+ and IFNg+ cells by IHC displayed a positive correlation between them in the wholeseries (r=0.3009, p=0,0256) and specifically in PI (r=0.5298, p=0.0163). FC analysis revealed nospecific NK cell population in the three groups of EBV- infected patients (p>0.05), while a negativecorrelation between CD56+ and VL in all patients (r=-0,6623, p=0.005) and particularly in PI (r=-0,6623, p=0.005) was proved. In PI we observed correlation between age and NKG2A+NKG2D+NK cells (r=0,6685, p=0.0245).Regarding EBV types in cases with good quality DNA, EBV1 was prevalent in the whole series,given that 19 patients were positive for EBV-1, 6 for EBV-2 and one PI patient was co- infected,moreover, EBV1 was statistically distributed in patients younger than 10 years (p=0.0468, Fisherexact test)The low viral inoculum along with restricted expression of EBV latent and lytic proteins was foundin PI, maybe related to the lack of symptoms. Even though no specific NK subpopulation wasdescribed, IFNg- producing NK cells may be involved the control of viral infection in all EBV-infectedpatients.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Moyano, Agustina Ayelén. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, M. I.. No especifíca;Fil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaInternational Centre for Genetic Engineering and Biotechnology DNA Tumour Virus MeetingTriesteItaliaInternational Centre for Genetic Engineering and Biotechnolog

EBV Impact in Peripheral Macrophages’ Polarization Cytokines in Pediatric Patients

Macrophages are exceptionally flexible cells. The presence of inflammatory cytokines such as IFN-γ and TNF-α results in an M1 (CD68) activation, while cytokines such as IL-10 or TGF-β induce the M2 (CD163) activation. Our aim was to study the behavior of peripheral cytokines involved in macrophage polarization and relate them with tissue findings to further comprehend the role of macrophages in EBV pediatric infection. We studied cytokine expression in tonsils and peripheral blood samples of children in different stages of infection. Peripheral cytokines were compared with macrophage polarization markers and viral protein expression in tonsils. Only IL-10 showed a negative correlation between compartments, exclusively in patients undergoing viral reactivation (R). Higher expressions of peripheral IL-1β, IL-23, and IL-12p40 in R children were observed. Lower expressions of local and peripheral TNF-α in patients with broader expressions of latent and lytic viral proteins were demonstrated. In healthy carrier (HC) patients, IL-23 positively correlated with CD163, and IP-10 positively correlated with CD68. Our results indicated that EBV might modulate antigen expression in the presence of TNF-α and influence peripheral cytokine expression differently in each stage of infection. Moreover, peripheral cytokines might have a particular role in macrophage polarization in HC.Fil: Moyano, Agustina Ayelén. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Amarillo, María Eugenia. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentin