Differential activities of glutathione s-transferase isoenzymes in strains of fasciola hepatica susceptible and resistant to triclabendazole

Fasciolosis, a parasitic zoonosis of intrahepatic location, is caused by the trematode Fasciola hepatica. Its control is mainly based on the use of the anthelminthic Triclabendazole (TCBZ). The indiscriminate use of this drug has favored the development of anthelmintic resistance. The Glutation S-Transferases (GSTs) are multifunctional enzymes involved in the detoxification of xenobiotics and endogenous compounds using conjugation with endogenous glutathione. Recently, it has been shown an active participation of this family of enzymes in the detoxification of TCBZ related to the phenomenon of resistance. In F. hepatica, eight isoenzymes of the GST are present. Since it is well known that different isoenzymes do not necessarily have the same metabolic activity, this study evaluated the cytosolic activity of mu and pi GST isoenzymes in TCBZ resistant (Sligo and Oberon strains) and TCBZ susceptible (Cullompton strains) of F. hepatica. The results obtained in this study confirm that, although both isoenzymes are involved in different processes of detoxification in F. hepatica, only the GSTmu isoenzyme is involved in the manifestation of resistance to TCBZ.Fil: Fernandez, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Ortiz Oblitas P.. Universidad Nacional de Cajamarca; PerúFil: Solana, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Cientifíca y Tecnológica; ArgentinaFil: Solana, Hugo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentin

Control de la fasciolosis: Rol de las enzimas de fase II de detoxificación en la resistencia al Triclabendazole y evaluación de la inmunogenicidad y protección conferida por la proteína recombinante GST Mu (rFhGSTMu) contra Fasciola hepatica en el modelo

Fasciola hepatica es el agente causal de la fasciolosis, enfermedad parasitaria zoonótica. Desde un punto de vista productivo, la enfermedad cobra relevancia en la cría de ovinos y bovinos en diferentes partes del mundo, incluidas amplias regiones de la Argentina. De las diferentes medidas de control disponibles, el tratamiento químico es el más utilizado. Si bien se conocen distintos grupos químicos, el triclabendazole (TCBZ) ha sido el compuesto de elección en ovinos y bovinos debido a que el mismo presenta una elevada eficacia sobre estadios inmaduros y maduros de F. hepatica. El uso indiscriminado de estos compuestos químicos en diferentes regiones del mundo ha generado una importante presión de selección, reportándose el desarrollo de cepas de F. hepatica resistentes a la mayoría de los fasciolicidas, especialmente a TCBZ. En este contexto, la vacunación aparece como una herramienta interesante para el control de este parásito. Las enzimas Glutatión S-Transferasas (GSTs) son el principal sistema de detoxificación de fase II en parásitos helmintos. Se ha demostrado que F. hepatica presenta niveles elevados de GST con funciones fisiológicas importantes. En el presente proyecto de Tesis se evaluó la expresión y actividad de enzimas de las diferentes vías metabólicas de detoxificación involucradas en el proceso de metabolización de TCBZ de Fase I: Carboxil estearasa (CE) y de Fase II: Glutation S-Transferasa, Glutatión Peroxidasa y Glutatión Reductasa (GSR) por parte de diferentes cepas de F. hepatica susceptible y resistentes a TCBZ. Se detectó una respuesta multienzimática que involucra a toda la familia de enzimas dependientes de glutatión (GSH). La enzima CE no expresó diferencias significativas entre las cepas evaluadas. Dicha enzima no estaría involucrada en el fenómeno de resistencia. Se demostró que la actividad citosólica es aproximadamente 50% más efectiva en las GSTs correspondientes a cepas resistentes a TCBZ. Cuando se analizaron las diferentes isoenzimas se determinó que la isoenzima Mu no solo está implicada en los fenómenos de detoxificación sino que además participaría en el fenómeno de resistencia antihelmíntica. Al evaluar el grado de implicancia de dicha isoenzima Mu, hemos identificado y caracterizado genéticamente el gen GST Mu aislado de las cepas de F. hepatica susceptible (TCBZ-S) y resistente (TCBZ-R) a TCBZ. Se detectó una mutación en el gen la cual modifca el aminoácido 143 de la isoenzima GST Mu en la cepa TCBZ-R pudiendo ser la misma parte responsable de la sobreexpresión del sistema enzimático metabólico en estudio. Teniendo en cuenta la relevancia de GST Mu, se detectó por PCR el gen correspondiente a esta isoenzima y se envió a sintetizar la proteína recombinante (rFhGSTMu). Se confirmó su pureza por SDS-PAGE y se evaluó su actividad enzimática. Para cumplir con el otro objetivo de la Tesis, se estableció el número de metacercarias de F. hepatica para evaluar la actividad protectora de rFhGSTMu formulada en tres adyuvantes distintos contra F. hepatica en ratones Balb/c. Los animales fueron inmunizados en tres oportunidades cada 15 días por la via subcutánea con las siguientes formulaciones: rFhGSTMu+ Adyuvante de Freund Incompleto, rFhGSTMu+ Hidróxido de Aluminio (Al(OH)3), rFhGSTMu+ Quil A y Grupo Control (sin inmunizar). Se detectaron niveles de anticuerpos IgG y subisotipos (IgG1 e IgG2a), IL-4 e IFN-γ. Todas las formulaciones vacunales indujeron anticuerpos IgG específicos con una respuesta mixta IgG1/IgG2a (Th2//Th1), sin embargo, la formulación rFhGSTMu + Al (OH)3 estimuló principalmente un perfil Th2 coincidente con una mayor producción de IL-4 en comparación con IFN-γ. La formulación rFhGSTMu+ Al(OH)3 redujo entre 75-90% el número de parásitos y la diferencia en la curva de supervivencia de este grupo fue altamente significativa. En el resto de los grupos experimentales, el recuento de parásitos fue similar al grupo control no inmunizado con una reducción en el número de parásitos no mayor al 12,5%. El daño hepático se estimó indirectamente mediante la determinación de los valores séricos de las enzimas aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT), fosfatasa alcalina (FA) y por análisis histopatológico de las lesiones. Los valores de las enzimas hepáticas en el grupo inmmunizado con rFhGSTMu+ Al(OH)3 fueron significativamente más bajos (p<0,05) que los valores registrados en el grupo control y en el resto de los grupos experimentales. Los resultados obtenidos en la presente Tesis indican que la proteína recombinante rFhGSTMu formulada con Al (OH)3 es un candidato vacunal contra F. hepatica en el modelo murino.Fasciola hepatica is the causative agent of fasciolosis, a zoonotic parasitic disease. From a productive point of view, the disease becomes relevant in the breeding of sheep and cattle in different parts of the world, including many regions of Argentina. Among the different control measures available, chemical treatment is the most used one. Although different chemical groups are known, triclabendazole (TCBZ) remains the compound of choice in sheep and cattle because it has a high efficacy against immature and mature stages of F. hepatica. The indiscriminate use of these chemical compounds in different regions of the world has generated an important selection pressure, and the development of strains of F. hepatica resistant to most fasciolicides, especially to TCBZ, has been reported. In this context, vaccination appears as an interesting tool for the control of this parasite. The enzymes Glutathione S-Transferases (GSTs) are the main phase II detoxification system of helminth parasites. It has been demonstrated that F. hepatica exhibits high levels of GST with important physiological functions. In this thesis project, the expression of the different metabolic pathways of Phase I and II detoxification enzymes involved in the metabolism of TCBZ were evaluated. Phase I enzyme carboxyl esterase (CE) and phase II enzymes Glutathione S-Transferase, Glutathione Peroxidase and Glutathione Reductase (GSR) were evaluatedevaluated in different strains of F. hepatica susceptible and resistant to TCBZ. A multienzyme response was detected that involves the whole family of enzymes dependent on GSH. CE did not exhibit significant differences between strains. This could be due to a lack of involvement of this enzyme in the resistance phenomenon. It was demonstrated that the cytosolic activity is approximately 50% more effective in the GST corresponding to strains resistant to TCBZ. When the different isoenzymes were analyzed, it was determined that the Mu isoenzyme is not only involved in the detoxification phenomena but also participates in the anthelmintic resistance phenomenon. In evaluating the degree of implication of this Mu isoenzyme, we have identified and genetically characterized the Mu GST gene isolated from strains of F. hepatica susceptible (TCBZ-S) and resistant (TCBZ-R) to TCBZ. A gene mutation was detected which modifies the amino acid 143 of the isoenzyme GST Mu in the TCBZR strain, which could be responsible for the overexpression of the metabolic enzyme system under study. Given the probable relevance of GST Mu, a recombinant protein corresponding to the gene coding for said enzyme was generated. For this, the gene corresponding to GST Mu was detected by PCR, and the corresponding recombinant protein (rFhGSTMu) was then synthesized, expressed and purified. It was evaluated electrophoretically and the enzymatic capacity of rFhGSTMu was confirmed. In order to comply with the other objective of the Thesis, the number of metacercariae of F. hepatica was established to evaluate the protective activity of rFhGSTMu formulated in three different adjuvants against F. hepatica in Balb/c mice. The animals were immunized three times every 15 days by the subcutaneous route with the following formulations: rFhGSTMu+ Incomplete Freund's Adjuvant, rFhGSTMu+ Aluminum Hydroxide, rFhGSTMu+ Quil A and Control Group (without immunizing). Levels of IgG antibodies and sub-types (IgG1 and IgG2a), IL-4 and IFN-γ were detected. All the vaccine formulations induced specific IgG antibodies with a mixed IgG1 / IgG2a response (Th2 // Th1), however, the formulation rFhGSTMu+ Al (OH)3 mainly stimulated a Th2 profile coincident with a higher production of IL-4 compared with IFN-γ. The rFhGSTMu+ Al (OH)3 formulation reduced between 75-90% the number of parasites and the difference in the survival curve of this group was highly significant. In the rest of the experimental groups, the parasite count was similar to the non-immunized control group with a reduction in the number of parasites not greater than 12.5%. Liver damage was estimated indirectly by determining the serum values of the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (FA) and by histopathological analysis of the lesions. The liver enzyme values in the group immunized with rFhGSTMu+ Al (OH)3 were significantly lower (p<0.05) than the values recorded in the control group and in the rest of the experimental groups. The results obtained in this thesis indicate that the recombinant protein rFhGSTMu formulated with Al (OH) 3 is a vaccine candidate against F. hepatica in the murine model.Fil: Fernandez, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

A multienzyme response is involved in the phenomenon of resistance to triclabendazole on Fasciola

The trematode Fasciola hepatica is the producer of a parasitic zoonosis known as fasciolosis. Triclabendazole (TCBZ) is the most widely used fasciolicide anthelmintic. Today, its indiscriminate use has led to the expression of anthelmintic resistance. Our previous studies over the Sligo strain (TCBZ-R) confirmed in the Phase I of detoxification, an overexpression of Flavin-Monooxygenases. This phenomenon should not be the only response that the trematode has and should not rule out the involvement of other processes of detoxification of Phase I or II. In the processes of detoxification in Phase I, the Carboxylesterase (CE) is a serine esterase-dependent with broad substrate specificity. This family of enzymes are involved in many metabolic functions including detoxification of xenobiotics. In Phase II exists a system using the Glutathione (GSH). It is a sequence of certain enzymes that culminate adding reduced GSH to xenobiotic increasing its water solubility and facilitatingtheir excretion. Glutathione addition plays an important role in antioxidant defense in different tissues catalyze the reduction of oxidized to reduced GSH which will be utilized by GST to reduce the peroxide and lipoperoxide, which they are reactive oxygen species. This process involves Glutathione Peroxidase (GPx), Glutathione Reductase (GSR) and Glutathione S-Transferase (GST). In the present work, we evaluate, in vitro, the cytosolic activity of different xenobiotic metabolizing enzymes of Phase I: CE and Phase II: GST, GPx and GSR in adults of F. hepatica TCBZ susceptible (TCBZ-S) and TCBZ resistant (TCBZ-R),respectively Cullompton strain and Sligo and Oberon strains. In the TCBZ-R Sligo and Oberon strains, the GST activity was 1277±32 and 1216±16 nmol/min/mg protein, respectively, higher than that in the TCBZ-S Cullompton strain 800±60 nmol/ min/mg protein. Regarding the GPx activity in the Sligo and Oberon strains, TCBZ-R was 83±3.41 and 81±2.45 nmol/min/ mg protein, respectively, higher than that in the TCBZ-S Cullompton strain 49±2.58 nmol/min/mg protein. The GSR activity in Sligo and Oberon strains was 38±2.07 and 41±1.25 nmol/min/mg protein, respectively, higher than that in the TCBZ-S Cullompton strain 29±1.22 nmol/min/mg protein, whereas CE activity did not differ between the different strains tested. In this work, a multienzyme response involving at all the family of enzymes GSH dependent is detected. Carboxylesterase expressed no significant differences not being involved in the resistance phenomenon. These results contribute to the understanding of the mechanisms referred to the phenomenon of resistance to TCBZ.Fil: Fernandez, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Acevedo, Maria E.. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Solana, Hugo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaInternational Conference on ParasitologyPhiladelphiaEstados UnidosOMICS Publishing Grou

Caracterización ecológica de Astragalus gines-lopezii, un endemismo extremeño En Peligro (EN, LR2008)

Astragalus gines-lopezii Talavera et al. es un endemismo de la provincia de Badajoz que cuenta con menos de 1000 ejemplares en 2 poblaciones: la más importante está en la Sª de Mª Andrés, en un matorral dominado por Cistus albidus, con Genista hirsuta, Cistus monspeliensis, Teucrium gr. polium, Retama sphaerocarpa, Quercus coccifera, etc. y pies dispersos de encina (Quercus ilex ssp. ballota) y acebuches (Olea europaea var. sylvestris). La población de la Sª Calera, se encuentra en medios más antropizados: en un olivar y como ruderal. Los sustratos presentan pH en agua claramente básicos (entre 7,9 y 8,37) y en KCl oscila entre 7,3 y 7,6; ligados a unos contenidos significativos de carbonatos procedentes de rocas calizas compactas cuasi marmóreas. También destacan los contenidos de materia orgánica (entre 1,33 % y 3,56 %,) así como unos valores de nitrógeno total entre 0,31% y 0,15%. Se trata por tanto de suelos con altas tasas de descomposición de la materia orgánica (C/N ¿ 8). Desde el punto de vista físico presentan significativos contenidos de elementos gruesos (% elementos mayor que 2 mm ¿ 48 ) y con texturas en las que tiende a predominar la fracción limosa (% limo ¿ 50) Clima. La precipitación total anual oscila entre 754 y 650 mm y la temperatura media anual entre 16,2 y 15,3 ºC. Las medias de las máximas del mes más cálido 33,9 y las mínimas del mes más frío 3,48 º

Is it appropriate protective figure "Plant Micro-Reserves" to protect tree species? The example of Betula pendula subsp. fontqueri in "La Garganta de los Caballeros" (Ávila)

The figure of protection "micro-reserves" was created in the Region of Valencia (ANONYMOUS, 1994) with the aim of protecting endangered plant species. This is one of the areas of greatest floristic richness and uniqueness of the western Mediterranean. In this area rare, endemic or threatened vascular flora has a peculiar distribution: they appear to form small fragments spread over the entire region (LAGUNA, 1994; LAGUNA, 2001) The protection of every these small populations of great scientific value has significant challenges. It doesn´t try to protect every species that set out in Annex IV of the by then existing Law 4 / 1989 (repealed in 2007), or to protect to the most ecological level with the creation of Natural Protected Area but an intermediate level: the plant community of small size. According to the decree: “as Micro-Reserve will be declared the natural parcels of land under 20 hectares that contain a high concentration of rare plants, endemic, threatened or of high scientific interest” (ANONYMOUS, 1994) . Of course, the statement of an area as micro-reserve carries certain prohibitions that are harmful to the vegetal communit

Biología reproductiva de Astragalus gines-lopezii Talavera et al.

Astragalus gines-lopezii Talavera et al. se encuentra incluido en la Lista Roja 2008 en la categoría En Peligro (EN). Es un endemismo de área de distribución muy reducida, que tan solo cuenta con 2 poblaciones y un escaso número de ejemplares (menos que 1000). Con el objetivo de detectar posibles amenazas, hemos estudiado diferentes aspectos de su biología reproductiva: 1.- Capacidad de producir semillas viables. De 50 individuos hemos contamos, in situ, el nº de inflorescencias y el nº de flores de cada una. Posteriormente colectamos las legumbres maduras y contamos, medimos y pesamos sus semillas. En laboratorio realizamos ensayos de germinación 2.- Análisis de la capacidad germinativa de la especie en su conjunto y de cada una de sus poblaciones Las semillas se incubaron a las Tas alternas 25/15ºC, fotoperiodo de 16 h/luz y 8/oscuridad. Unas, sin ningún tratamiento previo, alcanzaron porcentajes de germinación entre 0 % y 60 %, según los diferentes individuos; sin embargo, las escarificadas alcanzaron porcentajes finales entre 60 y 100 %. En conclusión, se puede afirmar que las semillas de Astragalus gines-lopezii presentan dormición física debida a su cubierta dura e impermeable al agua. En condiciones naturales, el progresivo desgaste de la cubierta seminal por diversos factores (erosión, microorganismos, variación de temperaturas, etc.) permiten la germinación de las semillas de esta especie de forma gradual

Census, reproductive biology, and germination of Astragalus gines-lopezii (Fabaceae),a narrow and endangered endemic species of SW Spain.

Astragalus gines-lopezii Talavera, Podlech, Devesa & F.M.Vazquez (Fabaceae) is a threatened endemic species with a distribution restricted to a very small area in Badajoz Province (Extremadura Region, SW Spain) and only 2 populations are known.This species was catalogued in the "Endangered" category in the 2008 Red List and the 2010 Threatened Spanish Vascular Flora List. Despite its status as an endangered species, at present very little is known about the distribution, census, and reproductive biology of this species. In this study we have carried out anexhaustive census of A. gines-lopezii, and we have evaluated the production of flowers, fruits, and seeds and the existence or not of intra- and interpopulation variability in seed germination. Results have highlighted the high reproductive capacity of this species on the basis of a high production of flowers, fruits, and seeds. Mechanical scarification of seeds was effective for increasing germination. Thus, initial germination (22%-60%) was increased to 97%-99% when seeds were rubbed with sandpapers. A high intra- and interpopulation variability in seed germination was found in this species. A. gines-lopezii produces seeds with different degrees of physical dormancy, varying this grade among different individuals within a population

Comparative genetic analysis of glutathione S-transferase Fasciola hepatica from different definitive hosts

La fasciolosis, parasitosis zoonótica de ubicación intrahepática, es ocasionada por Fasciola hepatica. La resistencia de F. hepatica a TCBZ está progresando mundialmente por lo cual es necesario ampliar el conocimiento sobre los mecanismos de detoxificación que este helminto posee. Las glutatión S-transferasas (GSTs), enzimas multifuncionales implicadas en la detoxificación de compuestos endógenos y xenobióticos, podrían participar en la expresión de resistencia al TCBZ. En este trabajo se determinó el nivel de expresión del ARNm y se caracterizó el gen para GST (genGST) correspondiente a fasciolas provenientes de tres hospedadores diferentes infectados naturalmente. Las secuencias del genGST de las fasciolas analizadas se compararon con las secuencias de las cepas Sligo (triclabendazol resistente: TCBZ-R) y Cullompton (triclabendazol sensible: TCBZ-S) (GenBank ID: KF680281- KF680284, respectivamente) obtenidas en nuestro laboratorio. Las fasciolas de las tres especies hospedadoras expresaron diferencias significativas en el ARNm: cerdo 2> bovino 1.7> ovino 1 y un genGST idéntico al de la cepa TCBZ-S. La diferencia de expresión podría relacionarse con el nivel de resistencia de los diferentes huéspedes a F. hepatica. Estos resultados aportarían a la comprensión de los mecanismos generadores de resistencia a F. hepatica en los distintos huéspedes definitivos.Fasciolosis, a zoonotic intrahepatic parasitosisis caused by Fasciola hepatica. Resistance of F. hepatica to TCBZ is progressing globally so it is necessary to increase the knowledge of the mechanisms of detoxification that this helminth possesses. The multifunctional enzymes glutathione S- transferases (GSTs) are involved in the detoxification of endogenous and xenobiotic compounds and could be involved in the expression of resistance to TCBZ. In this work the level of mRNA expression was determined and the gene for GST (genGST) from flukes from three different naturally infected hosts was characterized. The sequence of the genGST was compared with the sequences of resistant (TCBZ-R) (Sligo) and sensible (TCBZ-S) (Cullompton) strains of F. hepatica (GenBank ID: KF680281 - KF680284, respectively) obtained in our laboratory. Flukes of three different hosts expressed significant differences in their mRNA: porcine 2> bovine 1.7 > ovine 1 and the genGST sequence was identicalto TCBZ-S strain of F. hepatica. The difference in expression of the genGST could be related to the level of resistance of the different hosts against F. hepatica. These results would contribute to the understanding of the mechanisms of resistance to F. hepatica in different definitive hosts.Fil: Fernandez, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Estein, Silvia Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Ortiz, Pedro. Universidad Nacional de Cajamarca; PerúFil: Solana, Hugo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentin

Pomegranate transplant stress can be ameliorated by rhizophagus intraradices under nursery management

Arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) establish an obligate mutualistic symbiosis with many plant species, increasing the uptake of phosphorous and other low-mobile nutrients by roots. In addition, AMF improve biotic and abiotic stress tolerance of host plants. Under these conditions, reactive oxygen species (ROS) increase occasional damage to proteins, lipids and DNA. Antioxidative enzymes in plants can play an important role in detoxifying ROS, thereby alleviating oxidative stress. In nursery practices, plants are subjected at least to two transplant conditions before being transplanted outside. It is important to achieve an optimal plant size to withstand environmental or other stresses when plants are transplanted into the field. The transplantation process can be considered a stress because plants have to adapt to new abiotic and biotic (rhizospheric) conditions. The aim of this study was to evaluate the effect of two Rhizophagus intraradices (N.C. Schenck & G.S. Sm.) C. Walker & A. Schüßler strains, GA5 and GC2, single and co-inoculated under two-transplant soil conditions, sterile and non-sterile, using cuttings of pomegranate (Punica granatum L.) as a model plant. These results showed that the GA5 single strain-inoculated plants improved growth and antioxidative enzyme responses to two transplant stress conditions. In conclusion, early mycorrhizal inoculation generates healthy plants that are more protected against environmental conditions, thereby improving plant transplant stress tolerance.Fil: Bompadre, Maria Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Colombo, Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Silvani, Vanesa Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Fernandez Bidondo, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Pardo, Alejandro Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Micología Molecular; ArgentinaFil: Ocampo, Juan Antonio. Consejo Superior de Investigaciones Científicas. Estación Experimental del Zaidín; EspañaFil: Godeas, Alicia Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; Argentin

Design, synthesis and application of luminescent rhenium complexes in cell imaging

This thesis describes the development of a new variety of lumophores, in particular luminescent rhenium(I) complexes of the type Re(bisim)(CO)3L n+, where bisim represents a bisimine derivative, e.g. bipyridine, and Lisa pyridine derivative (n = 1) or a chloride (n = 0), suitable for specific cell imaging and whose modified photophysical properties overcome some of the problems associated with traditional imaging agents (small Stokes shift, short lifetimes, etc). Specifically the successful synthesis and photophysical studies of a chemical model to validate the concept of a membrane permeable cell-imaging device, fac-Re0)ipyXCO)3(PyCH2COO(CH2)3OTBD) +, are presented. Further investigations towards and improved cell imaging agent, considering different issues like water solubility, lipophilicity and cell encapsulation rate, are then undertaken. Consequently, a new range of water soluble rhenium complexes, ykc- Re(bisimXCO)3(L) n" where bisim is a water soluble bathophenanthroline and L is a pyridine derivative (n = 2) or a chloride (n = 1), as well as a variety of novel yac-Re(bisimXCO)3Cl complexes, where bisim is a terpyridine derivative bearing a self destruction device which can be triggered by nitroreductase, are also presented. Additionally, the synthesis and structural description of a trinuclear rhenium complex is reported, along with a discussion of its use in inclusion experiments and attempts at analogue formation. The design and synthesis of a thiol selective luminescent rhenium complex, fac-Re(bipyXCO)3(PyCH2Cl) +, is described, along with the demonstration of its thiol selectivity both in vitro and in vivo as demonstrated by specific mitochondrial localization. Finally, studies of membrane permeability in liposome models, cellular uptake and localization in different cells such as Spironucleous vortens, yeast cells and human breast cancer cells of a variety of rhenium complexes above cited are also reported. These results combine to demonstrate the promising future of this new class of imaging probes as specific cell imaging agents and therefore, this work represents the initial step in the growing area of the development of transition metal based imaging agents