Activation of innate and specific immune responses in hemolytic uremic syndrome (HUS)- patients

La función primaria del sistema inmunológico es preservar al individuo sano frente a infinidad de agentes microbianos patógenos o injuriantes. Sin embargo, en determinadas circunstancias los mecanismos agresores normalmente montados contra un agente invasor, pueden tornarse altamente injuriantes para el propio individuo. Hay importantes evidencias tanto clínicas como experimentales, de que la reacción inflamatoria inducida por los distintos componentes de las bacterias Escherichia coli productoras de toxina Shiga (Stx) (STEC), fundamentalmente la Stx y los lipopolisacáridos (LPS), contribuye decisivamente en la evolución a la forma completa de SUH Así los pacientes al ser diagnosticados de SUH, presentan evidencias de haber sufrido un proceso de activación del sistema inmune innato, o reacción inflamatoria muy aguda y temprana en la evolución de la enfermedad. Algunas de estas evidencias pueden resumirse como: una neutrofilia marcada, leucocitos neutrófilos (PMN) circulantes que se encuentran “agotados o exhaustos”, los monocitos diferenciados hacia un fenotipo inflamatorio (menor expresión de CD14 y aumento de CD16), y se encuentra un significativo descenso en los leucocitos que presentan el receptor para la quimioquina Fractalquina (FKN, CX3CL1)) (CX3CR1): los. monocitos clásicos y células Natural Killer (NK). Estas células tienen un alto potencial citotóxico. La FKN se expresa en endotelio y epitelio renal y ha sido involucrada en los mecanismos patogénicos en distintas nefropatías. Llamativamente, encontramos una correlación significativa entre la severidad del cuadro renal y las alteraciones mencionadas. Por último se discute el papel protector que la respuesta inmune específica podría ejercer, fundamentalmente a través de la producción de anticuerpos neutralizantes de la Stx.The central role of the immune system is the preservation of the health against several pathogenic microbes and injury agents. However, on special conditions defensive mechanisms triggered towards the foreign agent can damage the host. Clinical and experimental evidence indicate that inflammatory reaction triggered by the main components of Shiga toxin (Stx)- producing Escherichia coli (STEC), participate in the evolution to the complete form of HUS. When children are diagnosed of HUS, they present evidence that have suffered a very strong and early inflammatory response. These features include: the presence of a marked neutrophilia, the polymorfonuclear leucocytes (PMN) are “deactivated or exhausted” and the monocytes are differentiated towards an inflammatory phenotype (CD14-reduced and CD16-enhanced membrane expression). In addition, HUS-patients show a marked reduction in the absolute and relative number of leucocytes carrying the receptor (CX3CR1) for the chemokine “Fractalkine” (FKN, CX3 CL1), which are the classic monocytes and Natural Killer cells (NK). All these cells express a high cytotoxic potencial. The chemokine FKN is expressed in endothelial and epithelial renal cells, and is involved in the pathogenic mechanism of different nephropathies. Noteworthy, we found a significant correlation between the severity of the renal damage (as days of anuria) and the alterations described above. Finally, the protective role of specific immune response, mainly through the antibody production with Stx-neutralizing capacity, is discussed.Fil: Palermo, Marina Sandra. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernandez, Gabriela C.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Bentancor, Leticia. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Fernández Brando, Romina Jimena. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Dran, Graciela I.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Isturiz, Martín Amadeo. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Detection of serum anti-lipopolysaccharides (lps) antibodies from enterohemorrhagic e. coli (ehec) in asymptomatic kindergarten teachers of buenos aires province

EHEC is responsible for developing typical Hemolytic Uremic Syndrome (HUS) and Argentina has the highest incidence in the world. The endemo-epidemic behavior that HUS presents in our countrywas associated with person-to-person transmission. Since children below 5 years old are the most affected, our objective was to determine the frequency of kindergarten teachers with anti-LPS-EHECantibodies in serum. One hundred and fifty teachers from J.C. Paz district from Buenos Aires Province participated in an informative talk given by LuSUH, a non-governmental association, about good practices to reduce HUS transmission. Then, 63 of them voluntarily gave, under a signedwritten informed consent, a sample of blood obtained by finger puncture. A commercial ELISA (Chemtest, Arg) was used to detect specific IgM and IgG isotypes against 4 types of LPS-EHEC: O157, O145, O121 and O103. These variants represent approximately 87% of the EHEC serotypes associated with HUS in Argentina. The IgM finding was considered as indirect evidence of current infection with the EHEC specific serotype. Forty-two samples were evaluated, 60% (25/42) of them were positive for at least one type of LPS. Fifty-six percent of them (14/25) were IgM positive. Fifty percent of the positive samples were reactive for LPS O157, 26% for LPS O121, 12% for LPS O145 and 2% for LPS O103. Among the samples positive for LPS O157, 5% belonged to IgM isotype, 31% to IgG and 14% had both. The IgG isotype was the unique detected for LPS O145 and O103 (12 and2%, respectively). For LPS O121, the IgM isotype was detected in 2%, IgG in 12% and both isotypes in 12% of the samples. The elevated frequency of LPS-EHEC reactive samples (60%) reflects the high circulation of EHEC strains in our country. This agrees with the prevalence of anti-Stx2 antibodies reported in our population previously. Very strikingly, nearly half of these individuals carry IgM, suggesting that they would be in the active phase of infection.Fil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sacerdoti, Flavia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay; ArgentinaFil: Amaral, María Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay; ArgentinaFil: Bernal, Alan Mauro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Da Rocha, Marcelo. No especifíca;Fil: Belardo, Marcela. Universidad Nacional de Jose Clemente Paz; ArgentinaFil: Palermo, Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ibarra, Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay; ArgentinaLXV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXVIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología y Reunión anual de la Sociedad Argentina de FisiologíaArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina De Fisiologí

Differential expression of the fractalkine chemokine receptor (CX3CR1) in human monocytes during differentiation

Circulating monocytes (Mos) may continuously repopulate macrophage (MAC) or dendritic cell (DC) populations to maintain homeostasis. MACs and DCs are specialized cells that play different and complementary immunological functions. Accordingly, they present distinct migratory properties. Specifically, whereas MACs largely remain in tissues, DCs are capable of migrating from peripheral tissues to lymphoid organs. The aim of this work was to analyze the expression of the fractalkine receptor (CX3CR1) during the monocytic differentiation process. Freshly isolated Mos express high levels of both CX3CR1 mRNA and protein. During the Mo differentiation process, CX3CR1 is downregulated in both DCs and MACs. However, MACs showed significantly higher CX3CR1 expression levels than did DC. We also observed an antagonistic CX3CR1 regulation by interferon (IFN)-γ and interleukin (IL)-4 during MAC activation through the classical and alternative MAC pathways, respectively. IFN-γ inhibited the loss of CX3CR1, but IL-4 induced it. Additionally, we demonstrated an association between CX3CR1 expression and apoptosis prevention by soluble fractalkine (sCX3CL1) in Mos, DCs and MACs. This is the first report demonstrating sequential and differential CX3CR1 modulation during Mo differentiation. Most importantly, we demonstrated a functional link between CX3CR1 expression and cell survival in the presence of sCX3CL1.Fil: Panek, Cecilia Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Mejias, María Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Abrey Recalde, Maria Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Gori, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Salamone, Gabriela Veronica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; Argentin

Development of camelid single chain antibodies against Shiga toxin type 2 (Stx2) with therapeutic potential against Hemolytic Uremic Syndrome (HUS).

Shiga toxin (Stx)-producing Escherichia coli (STEC) infections are implicated in the development of the life-threatening Hemolytic Uremic Syndrome (HUS). Despite the magnitude of the social and economic problems caused by STEC infections, no licensed vaccine or effective therapy is presently available for human use. Single chain antibodies (VHH) produced by camelids exhibit several advantages in comparison with conventional antibodies, making them promising tools for diagnosis and therapy. In the present work, the properties of a recently developed immunogen, which induces high affinity and protective antibodies against Stx type 2 (Stx2), were exploited to develop VHHs with therapeutic potential against HUS. We identified a family of VHHs against the B subunit of Stx2 (Stx2B) that neutralize Stx2 in vitro at subnanomolar concentrations. One VHH was selected and was engineered into a trivalent molecule (two copies of anti-Stx2B VHH and one anti-seroalbumin VHH). The resulting molecule presented extended in vivo half-life and high therapeutic activity, as demonstrated in three different mouse models of Stx2-toxicity: a single i.v. lethal dose of Stx2, several i.v. incremental doses of Stx2 and intragastrical STEC infection. This simple antitoxin agent should offer new therapeutic options for treating STEC infections to prevent or ameliorate HUS outcome.Fil: Mejias, María Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Hiriart, Yanina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Inmunova S.A; ArgentinaFil: Lauché, Constanza Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Inmunova S.A; ArgentinaFil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pardo, Romina Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Inmunova S.A; ArgentinaFil: Bruballa, Andrea Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Inmunova S.A; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Zylberman, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Inmunova S.A; Argentin

Shiga toxin-producing Escherichia coli O157: H7 shows an increased pathogenicity in mice after the passage through the gastrointestinal tract of the same host

Haemolytic uraemic syndrome (HUS) is a rare but life-threatening complication of Shiga toxin (Stx)-producing Escherichia coli (STEC) infections, characterized by acute renal failure, thrombocytopenia and haemolytic anaemia. Although the main infection route is the consumption of contaminated food or water, person-to-person transmission has been suggested in several situations. Moreover, epidemiological data indicate that the horizontal transmission of several pathogens, including STEC, among individuals of the same species requires significantly lower doses than those used in animal models infected with laboratory-cultured bacteria. Thus, the aim of this study was to evaluate whether the passage of a clinically isolated STEC strain through the gastrointestinal tract of mice affects its pathogenicity in mice. To test this, weaned mice were orally inoculated by gavage with either an E. coli O157: H7 isolate from an HUS patient, or the same strain recovered from stools after one or two successive passages through the gastrointestinal tract of the mice. We show that stool-recovered strains are able to induce a more generalized and persistent colonization than the parent strain. Furthermore, a 10 4-fold-reduced inoculum of the stool-recovered strains still causes gut colonization and mouse mortality, which are not observed with the parent strain. These results indicate an increased pathogenicity in stool-recovered strains that may be associated with an increased ability to colonize the mouse intestine.Fil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Miliwebsky, Elizabeth. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; Argentina. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; ArgentinaFil: Mejias, María Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Baschkier, Ariela. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Panek, Cecilia Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Abrey Recalde, Maria Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Cabrera, Gabriel Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rivas, Marta. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Functional Capacity of Shiga-Toxin Promoter Sequences in Eukaryotic Cells

Shiga toxins (Stx) are the main virulence factors in enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) infections, causing diarrhea and hemolytic uremic syndrome (HUS). The genes encoding for Shiga toxin-2 (Stx2) are located in a bacteriophage. The toxin is formed by a single A subunit and five B subunits, each of which has its own promoter sequence. We have previously reported the expression of the B subunit within the eukaryotic environment, probably driven by their own promoter. The aim of this work was to evaluate the ability of the eukaryotic machinery to recognize stx2 sequences as eukaryotic-like promoters. Vero cells were transfected with a plasmid encoding Stx2 under its own promoter. The cytotoxic effect on these cells was similar to that observed upon incubation with purified Stx2. In addition, we showed that Stx2 expression in Stx2-insensitive BHK eukaryotic cells induced drastic morphological and cytoskeletal changes. In order to directly evaluate the capacity of the wild promoter sequences of the A and B subunits to drive protein expression in mammalian cells, GFP was cloned under eukaryotic-like putative promoter sequences. GFP expression was observed in 293T cells transfected with these constructions. These results show a novel and alternative way to synthesize Stx2 that could contribute to the global understanding of EHEC infections with immediate impact on the development of treatments or vaccines against HUSFil: Bentancor, Leticia Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bilen, Marcos Fabian. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Mejias, María Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Panek, Cecilia Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernández, Gabriela Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Isturiz, Martín Amadeo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ghiringhelli, Pablo Daniel. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Role of shiga toxins in cytotoxicity and immunomodulatory effects of escherichia coli O157:H7 during host-bacterial interactions in vitro

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) strains are food-borne pathogens that can cause different clinical conditions. Shiga toxin 2a and/or 2c (Stx2)-producing E. coli O157:H7 is the serotype most frequently associated with severe human disease. In this work we analyzed the hypothesis that host cells participate in Stx2 production, cell damage, and inflammation during EHEC infection. With this aim, macrophage-differentiated THP-1 cells and the intestinal epithelial cell line HCT-8 were incubated with E. coli O157:H7. A time course analysis of cellular and bacterial survival, Stx2 production, stx2 transcription, and cytokine secretion were analyzed in both human cell lines. We demonstrated that macrophages are able to internalize and kill EHEC. Simultaneously, Stx2 produced by internalized bacteria played a major role in macrophage death. In contrast, HCT-8 cells were completely resistant to EHEC infection. Besides, macrophages and HCT-8 infected cells produce IL-1β and IL-8 inflammatory cytokines, respectively. At the same time, bacterial stx2-specific transcripts were detected only in macrophages after EHEC infection. The interplay between bacteria and host cells led to Stx production, triggering of inflammatory response and cell damage, all of which could contribute to a severe outcome after EHEC infections.Fil: Bruballa, Andrea Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Shiromizu, Carolina Maiumi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bernal, Alan Mauro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pineda, Gonzalo Ezequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sabbione, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Trevani, Analía Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bentancor, Leticia Verónica. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Oyuela Ramos, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Muñoz, Manuel Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Relevance of Bacteriophage 933W in the development of the Hemolytic Uremic Syndrome (HUS)

Hemolytic uremic syndrome (HUS), principally caused by shiga toxins (Stxs), is associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) infections. We previously reported Stx2 expression by host cells in vitro and in vivo. As the genes encoding the two Stx subunits are located in bacteriophage genomes, the aim of the current study was to evaluate the role of bacteriophage induction in HUS development in absence of an E. coli O157:H7 genomic background. Mice were inoculated with a non-pathogenic E. coli strain carrying the lysogenic bacteriophage 933W (C600Φ933W), and bacteriophage excision was induced by an antibiotic. The mice died 72 h after inoculation, having developed pathogenic damage typical of STEC infection. As well as renal and intestinal damage, markers of central nervous system (CNS) injury were observed, including aberrant immunolocalization of neuronal nuclei (NeuN) and increased expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP). These results show that bacteriophage 933W without an E. coli O157:H7 background is capable of inducing the pathogenic damage associated with STEC infection. In addition, a novel mouse model was developed to evaluate therapeutic approaches focused on the bacteriophage as a new target

Participación de la respuesta inflamatoria en el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH)

Los episodios de diarrea debido a infecciones con cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga (Stx) (STEC) permanecen como un problema de salud importante en el mundo entero debido a su asociación con la morbilidad y la mortalidad de los niños, principalmente aquéllos menores de 5 años de edad. Dada su alta incidencia en Argentina es aquí fundamentalmente, donde deben extenderse y profundizarse todas las medidas de acción posibles para lograr un efectivo control de esta enfermedad. Además, en los últimos 5 años, han surgido nuevas cepas de E. coli patógenas que expresan Stx y nuevos serotipos altamente virulentos, lo que constituye un nuevo desafío para su estudio y control. Por lo tanto, es imperativo que las estrategias de diagnóstico, tanto clínico como de laboratorio, puedan implementarse en los hospitales, clínicas, centros de salud, etc., para identificar, clasificar y estudiar los STEC aislados. Un paso importante en esta tarea, es sin duda, reforzar la educación y formación específica en todos los niveles de atención primaria. Esta capacitación, debe incluir la actualización teórica que abarque los avances realizados en el conocimiento de los mecanismos fisiopatogénicos que intervienen en las complicaciones derivadas de la infección primaria. Pero también la derivada de la práctica médica que tiene una experiencia acumulada en el tratamiento de miles de niños en los últimos 40 años. Es importante recalcar una vez más la importancia del trabajo conjunto entre los médicos y los laboratorios, ya que esta enfermedad requiere de manera central la correcta identificación del agente causal de manera rápida y certera, para decidir la conducta médica a seguir y despertar los alertas epidemiológicos que permitan localizar las fuentes probables de contagio y así poder tomar las medidas de intervención necesarias a nivel de Salud Pública para prevenir nuevos casos. Además, nuevas y eficaces medidas preventivas y de tratamiento deben desarrollarse para disminuir las consecuencias sistémicas más graves asociadas a las infecciones con STEC. Aunque esta última es un área aún en fase de investigación, es también un desafío para nuestros países de América Latina: poder lograr un aprovechamiento más eficiente de los conocimientos surgidos de la investigación básica a través de una interacción más estrecha y fluida entre los Ministerios de Salud y los organismos de Promoción Científica. Obviamente no se trata sólo de aunar voluntades, sino de plantear Políticas de Salud sostenidas a lo largo del tiempo y fijar metas que permitan revertir el alto gasto actual en la atención y tratamiento de niños con SUH en pos de aplicar medidas de prevención. Teniendo en cuenta el conjunto de estos fundamentos, el objetivo de este libro ha sido contribuir a la difusión y actualización del conocimiento entre los actores principales del área de Salud Pública hispano-parlantes: enfermeros, pediatras, nefrólogos pediátricos y médicos de Atención Primaria en general, considerando que esta formación debe ser permanente y asumiendo que la barrera del idioma es un obstáculo, dado que muchas de las publicaciones médico-científicas de actualización se encuentran en idioma inglés.Fil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Participación de la respuesta inmune en el desarrollo del síndrome urémico hemolítico

La forma típica o post-diarreica del Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es la complicación más grave de las infecciones por cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga (STEC). En Argentina el SUH es un problema crítico en salud pública, ya que representa la principal causa de falla renal aguda en la infancia, la segunda causa de falla renal crónica, y aporta el 20% de los casos de trasplante renal durante la infancia y la adolescencia. A pesar de los avances en el conocimiento de su patogénesis, el único tratamiento actual de los pacientes con SUH es sintomático, y no existen terapias específicas ni preventivas. En la presente revisión expondremos los conocimientos básicos de los mecanismos patogénicos, profundizando particularmente en los avances referidos a la contribución de la respuesta inmune, y discutiremos los enfoques terapéuticos tradicionales e innovadores. La esperanza de que una mejor comprensión de la dinámica de transmisión y la patogénesis de esta enfermedad genere nuevos tratamientos más eficaces para prevenir la mortalidad y la morbilidad a largo plazo de las infecciones por cepas STEC y el SUH es la fuerza impulsora para intensificar la investigación en este campo.The typical form of hemolytic uremic syndrome (HUS) is the major complication of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) infections. HUS is a critical health problem in Argentina since it is the main cause of acute renal failure in children and the second cause of chronic renal failure, accounting for a 20% of renal transplants in children and adolescents in our country. In spite of the extensive research in the field, the mainstay of treatment for patients with HUS is supportive therapy, and there are no specific therapies preventing or ameliorating the disease course. In this review, we present the current knowledge about pathogenic mechanisms with special focus in the contribution of immune response, and discuss traditional and innovative therapeutic approaches. The hope that a better understanding of transmission dynamics and pathogenesis of this disease will produce better therapies to prevent the mortality and the long-term morbidity of STEC-infections and HUS is the driving force for intensify research.Fil: Abrey Recalde, Maria Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Cabrera, Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernández Brando, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Mejias, María Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Panek, Cecilia Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ramos, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin