Sphingomyelin metabolism is involved in the differentiation of MDCK cells induced by environmental hypertonicity

Sphingolipids (SLs) are relevant lipid components of eukaryotic cells. Besides regulating various cellular processes, SLs provide the structural framework for plasma membrane organization. Particularly, SM is associated with detergent-resistant microdomains. We have previously shown that the adherens junction (AJ) complex, the relevant cell-cell adhesion structure involved in cell differentiation and tissue organization, is located in an SM-rich membrane lipid domain. We have also demonstrated that under hypertonic conditions, Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells acquire a differentiated phenotype with changes in SL metabolism. For these reasons, we decided to evaluate whether SM metabolism is involved in the acquisition of the differentiated phenotype of MDCK cells. We found that SM synthesis mediated by SM synthase 1 is involved in hypertonicity-induced formation of mature AJs, necessary for correct epithelial cell differentiation. Inhibition of SM synthesis impaired the acquisition of mature AJs, evoking a disintegration-like process reflected by the dissipation of E-cadherin and β- and α-catenins from the AJ complex. As a consequence, MDCK cells did not develop the hypertonicity-induced differentiated epithelial cell phenotype.Fil: Favale, Nicolas Octavio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Santacreu, Bruno Jaime. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Pescio, Lucila Gisele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Marquez, Maria Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de la Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación; ArgentinaFil: Sterin, Norma Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Implication of Sphingosine-1-Phosphate Receptor 2 (S1PR2) in Differentiation and Dedifferentiation of Epithelial Renal Cells

Epithelial cell differentiation is a process that involves the mesenchymal-epithelial transition (MET) and includes cell cycle arrest, cell-cell junction maturation in addition to changes in cell migration capacity. The epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a dynamic process by which fully differentiated epithelial cells can acquire a mesenchymal phenotype. During EMT, cell adhesion and apical-basal polarity are lost, and the cytoskeleton is reorganized. Previous results from our laboratory showed that in Madin-Darby canine kidney cells (MDCK) under different culture conditions can achieve different stages of differentiation resembling MET. Sphingosine 1-phosphate (S1P) is a bioactive sphingolipid, produced by the phosphorylation of sphingosine by sphingosine kinases (SKs), which is involved in different processes such as proliferation, cell growth, differentiation, and migration. S1P can act both intracellularly as a second messenger or extracellularly as a ligand of 5 different G protein-coupled receptors (S1PR1-5). In the present work, we evaluated the importance of S1P acting on S1PR2 in the modulation of MET and EMT. We found that there are differences in the action of S1PR2 in MDCK cells that depends on the differentiation stage. S1PR2 positively modulates the passage from polarized to differentiated cells through MET. Inhibition of S1PR2 blocks adherens junction establishment, as well as apical and basal polarity. On the other hand, once cells have acquired the differentiated phenotype, S1PR2 induces the dedifferentiation of epithelial cells through EMT. Inhibition of S1PR2 triggers changes in EMT markers, such as rearrangements of the actin cytoskeleton, expression of vimentin, and nuclear translocation of beta-catenin, as well as Slug. The expression levels of S1PR2 in the different stages of differentiation of MDCK cells did not show significant differences. Instead, immunofluorescence studies showed that during cell differentiation, S1PR2 was progressively enriched at the plasma membrane. These results suggest that the location of S1PR2 depends on the stage of cell differentiation, and this determines its role. These findings highlight the great versatility of S1P on the control of physiological and pathophysiological processes.Fil: Romero, Daniela Judith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Santacreu, Bruno Jaime. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Tarallo, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaLVI Annual Meeting Argentine Society for Biochemistry and Molecular Biology; XV Annual Meeting Argentinean Society for General MicrobiologyArgentinaSociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecula

Glycosphingolipid synthesis is essential for MDCK cell differentiation

Glycosphingolipids (GSLs), which are highly concentrated at the apical membrane of polarized epithelial cells, are key components of cell membranes and are involved in a large number of processes. Here, we investigated the ability of hypertonicity (high salt medium) to induce Madin?Darby Canine Kidney (MDCK) cell differentiation and found an increase in GSL synthesis under hypertonic conditions. Then, we investigated the role of GSLs in MDCK cell differentiation induced by hypertonicity by using two approaches. First, cultured cells were depleted of GSLs by exposure to D-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1- propanol (D-PDMP). Second, cells were transfected with an siRNA specific to glucosylceramide synthase, the key enzyme in GSL synthesis. Exposure of cells to both treatments resulted in the impairment of the development of the apical membrane domain and the formation of the primary cilium. Enzymatic inhibitions of the de novo and the salvage pathway of GSL synthesis were used to determine the source of ceramide responsible of the GSL increase involved in the development of the apical membrane domain induced by hypertonicity. The results from this study show that extracellular hypertonicity induces the development of a differentiated apical membrane in MDCK cells by performing a sphingolipid metabolic program that includes the formation of a specific pool of GSLs. The results suggest as precursor a specific pool of ceramides formed by activation of a Fumonisin B1-resistant ceramide synthase as a component of the salvage pathway.Fil: Pescio, Lucila Gisele. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Marquez, Maria Gabriela. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Sterin, Norma Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Environmental hyperosmolality regulates phospholipid biosynthesis in the renal epithelial cell line MDCK

Hyperosmolality is a key signal for renal physiology. On the one hand, it contributes to the differentiation of renal medullary structures and to the development of the urinary concentrating mechanism. On the other, it is a stress factor. In both cases, hyperosmolality activates processes that require an adequate extension of cellular membranes. In the present work, we examined whether hyperosmolality regulates phospholipid biosynthesis, which is needed for the membrane biogenesis in the renal epithelial cell line Madin-Darby canine kidney (MDCK). Because phospholipids are the structural determinants of all cell membranes, we evaluated their content, synthesis, and regulation in MDCK cultures subjected to different hyperosmotic concentrations of NaCl, urea, or both. Hyperosmolality increased phospholipid content in a concentration-dependent manner. Such an effect was exclusively due to changes in NaCl concentration and occurred at the initial stage of hyperosmolar treatment concomitantly with the expression of the osmoprotective protein COX-2. The hypertonic upregulation of phosphatidylcholine (PC) synthesis, the main constituent of all cell membranes, involved the transcriptional activation of two main regulatory enzymes, choline kinase (CK) and cytidylyltransferase α (CCTα) and required ERK1/2 activation. Considering that physiologically, renal medullary cells are constantly exposed to high and variable NaCl, these findings could contribute to explaining how renal cells could maintain cellular integrity even in a nonfavorable environment.Fil: Casali, Cecilia Irene. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; ArgentinaFil: Weber, Karen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; ArgentinaFil: Fernandez, Maria del Carmen. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentin

La captación de colesterol por Tetrahymena thermophila se realiza principalmente por fagocitosis

The free-living ciliate Tetrahymena thermophila is a unicellular model organism in which landmark biological processes have been discovered, such as the first description of telomerase activity and the molecular structure of telomeres, the mechanism of self-splicing RNA and ribozymes, the function of histone acetylation in transcription regulation and a number of pioneer experiments on the interference (RNAi) mechanism for programmed genome rearrangements, among others...Fil: Elguero, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Sánchez Granel, María Luz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Montes, María Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Cid, Nicolás Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Nudel, Berta Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Nusblat, Alejandro David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Changes in membrane lipid composition cause alterations in epithelial cell-cell adhesion structures in renal papillary collecting duct cells

In epithelial tissues, adherens junctions (AJ) mediate cell-cell adhesion by using proteins called E-cadherins, which span the plasma membrane, contact E-cadherin on other cells and connect with the actin cytoskeleton inside the cell. Although AJ protein complexes are inserted in detergent-resistant membrane microdomains, the influence of membrane lipid composition in the preservation of AJ structures has not been extensively addressed. In the present work, we studied the contribution of membrane lipids to the preservation of renal epithelial cell-cell adhesion structures. We biochemically characterized the lipid composition of membranes containing AJ complexes. By using lipid membrane-affecting agents, we found that such agents induced the formation of new AJ protein-containing domains of different lipid composition. By using both biochemical approaches and fluorescence microscopy we demonstrated that the membrane phospholipid composition plays an essential role in the in vivo maintenance of AJ structures involved in cell-cell adhesion structures in renal papillary collecting duct cells.Fil: Marquez, Maria Gabriela. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Leocata Nieto, Francisco. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Pescio, Lucila Gisele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Sterin, Norma Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Sphingosine kinase and sphingosine-1phosphate regulate epithelial cell architecture by the modulation of de novo sphingolipid synthesis

Sphingolipids regulate several aspects of cell behavior and it has been demonstrated that cells adjust their sphingolipid metabolism in response to metabolic needs. Particularly, sphingosine-1-phosphate (S1P), a final product of sphingolipid metabolism, is a potent bioactive lipid involved in the regulation of various cellular processes, including cell proliferation, cell migration, actin cytoskeletal reorganization and cell adhesion. In previous work in rat renal papillae, we showed that sphingosine kinase (SK) expression and S1P levels are developmentally regulated and control de novo sphingolipid synthesis. The aim of the present study was to evaluate the participation of SK/S1P pathway in the triggering of cell differentiation by external hypertonicity. We found that hypertonicity evoked a sharp decrease in SK expression, thus activating the de novo sphingolipid synthesis pathway. Furthermore, the inhibition of SK activity evoked a relaxation of cell-cell adherens junction (AJ) with accumulation of the AJ complex (E-cadherin/β-catenin/α-catenin) in the Golgi complex, preventing the acquisition of the differentiated cell phenotype. This phenotype alteration was a consequence of a sphingolipid misbalance with an increase in ceramide levels. Moreover, we found that SNAI1 and SNAI2 were located in the cell nucleus with impairment of cell differentiation induced by SK inhibition, a fact that is considered a biochemical marker of epithelial to mesenchymal transition. So, we suggest that the expression and activity of SK1, but not SK2, act as a control system, allowing epithelial cells to synchronize the various branches of sphingolipid metabolism for an adequate cell differentiation program.Fil: Santacreu, Bruno Jaime. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Pescio, Lucila Gisele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Romero, Daniela Judith. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Corradi, Gerardo Raul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Sterin, Norma Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Virtual Microscope, a contribution to microscopy remote learning: the tool which creates bridges between laboratory microscope analysis and new technologies

En el ámbito de las ciencias naturales, el microscopio resulta indispensable pero a la vez un desafío dada la actual situación de pandemia del COVID-19 que ha generado el cierre temporal de las instituciones de Educación Superior. Así mismo, el entrenamiento en el manejo de un microscopio, la experticia y el criterio en la observación son metas que requieren de tiempos de observación, disponibilidad de equipamiento y de la supervisión de un docente calificado. En este sentido, el uso de simuladores se presenta como una sólida estrategia para salvaguardar el sistema educativo en base a su implementación exitosa en epidemias previas. En base a estos principios, cobra relevancia el desarrollo del Microscopio Virtual, el cual consiste en un entorno digital que simula la observación e interacción a través de un microscopio, tal como se haría en el laboratorio físico. La plataforma permite a los alumnos analizar preparados obtenidos a partir de muestras reales y resolver ejercicios diseñados por los docentes, en el lugar y por el tiempo que elijan. Tomando en cuenta que nuestros alumnos son en mayoría nativos digitales, la posibilidad de aprender y adquirir experticia gracias al nexo que establece el Microscopio Virtual entre la práctica de mesada y los dispositivos móviles constituye una herramienta invaluable en la enseñanza de esta disciplina. Si bien puede concebirse a esta herramienta en primera instancia como parte de una sólida estrategia de enseñanza remota de emergencia frente a la pandemia, el Microscopio Virtual nos revela una fidedigna posibilidad que amerita su integración a la educación formal en el desarrollo de un marco híbrido de la currícula y el aprendizaje ubicuo, potenciando así el aprendizaje significativo. Reconocemos la introducción del Microscopio Virtual como parte de un nuevo ambiente que propicia una revolución significativa en la forma en que hacemos y entendemos la Educación Superior.In the field of natural sciences, the microscope is essential but at the same time a challenge considering the current pandemic situation of COVID-19 which has generated the temporary closure of Higher Education institutions. Likewise, training in the use of a microscope, experience and observation criteria are goal that require observation time, equipment availability and the supervision of a qualified teacher. In this sense, the use of simulators is presented as a solid strategy to safeguard the educational system based on its successful implementation in previous epidemics. Based on these principles, the development of the Virtual Microscope becomes more relevant, which consists of a digital environment that simulates observation and interaction through a microscope, as would be done in the physical laboratory. The platform allows students to analyze slides obtained from real samples and solve exercises designed by teachers, in the place and for the time that they choose. Taking into account that our students are mostly digital natives, the possibility of learning and acquiring expertise considering the link established by the Virtual Microscope between “laboratory microscope analysis” and mobile devices constitutes an invaluable tool in teaching this discipline. Although this tool can be conceived in the first instance as part of a solid emergency remote teaching strategy in the face of a pandemic situation, the Virtual Microscope reveals a reliable possibility that merits its integration into formal education in the development of an hybrid frame in the curriculum and ubiquitous learning, thus enhancing meaningful learning. We acknowledge the introduction of the Virtual Microscope as part of a new environment that promote a significant revolution in the way we do and understand Higher Education.Fil: Moreira Szokalo, Rocío Ayelén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Romero, Daniela Judith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Carballo, Marta Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Bradykinin mediates the association of collecting duct cells to form migratory colonies, through B2 receptor activation

It is known that bradykinin (BK) B2 receptor (B2R) is expressed in the collecting duct (CD) cells of the newborn rat kidney, but little is known about its role during early postnatal life. Therefore, we hypothesize that BK could participate in the mechanisms that mediate CD formation during the postnatal renal development. Performing primary cultures, combined with biochemical, immunocytochemical, and time‐lapse analysis, we studied the role of BK in CD cell behavior isolated from renal papilla of neonatal rats. A reverse relationship was observed between B2R expression and the degree of CD epithelial cell sheet maturation. BK stimulation induced CD cell association upon B2R activation. The lack of B2R expression in cells showing mature adherens junctions suggested that BK is mostly involved in early adhesive events, thus favoring the initial formation of CD during development. Time‐lapse analysis revealed that BK induced a high protrusive activity of CD cells, denoted by ruffle formation and lamellipodia extension. PI3K was involved in the BK‐induced CD cell‐cell association and the acquisition of the migratory phenotype since, when inhibited, membrane ruffles, and filopodia between cells diminished. Results indicate that the actions of BK mediated by PI3K activation were due to the downstream Akt and Rac pathways. This study, performed with CD cells that were not genetically manipulated, provides new experimental evidence supporting a novel role of BK in rat renal CD organization. As B2R blockade results in abnormal tubular differentiation, our results contribute to better understanding the etiology of human congenital renal malformation and diseases.Fil: Guaytima, Edith del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; ArgentinaFil: Brandán, Yamila Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Santacreu, Bruno Jaime. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Sterin, Norma Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Marquez, Maria Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; Argentin

The cytochrome b(5) dependent C-5(6) sterol desaturase DES5A from the endoplasmic reticulum of Tetrahymena thermophila complements ergosterol biosynthesis mutants in Saccharomyces cerevisiae.

Tetrahymena thermophila is a free-living ciliate with no exogenous sterol requirement. However, it can perform several modifications on externally added sterols including desaturation at C5(6), C7(8), and C22(23). Sterol desaturases in Tetrahymena are microsomal enzymes that require Cyt b5, Cyt b5 reductase, oxygen, and reduced NAD(P)H for their activity, and some of the genes encoding these functions have recently been identified. The DES5A gene encodes a C-5(6) sterol desaturase, as shown by gene knockout in Tetrahymena. To confirm and extend that result, and to develop new approaches to gene characterization in Tetrahymena, we have now, expressed DES5A in Saccharomyces cerevisiae. The DES5A gene was codon optimized and expressed in a yeast mutant, erg3Δ, which is disrupted for the gene encoding the S. cerevisiae C-5(6) sterol desaturase ERG3. The complemented strain was able to accumulate 74% of the wild type level of ergosterol, and also lost the hypersensitivity to cycloheximide associated with the lack of ERG3 function. C-5(6) sterol desaturases are expected to function at the endoplasmic reticulum. Consistent with this, a GFP-tagged copy of Des5Ap was localized to the endoplasmic reticulum in both Tetrahymena and yeast. This work shows for the first time that both function and localization are conserved for a microsomal enzyme between ciliates and fungi, notwithstanding the enormous evolutionary distance between these lineages. The results suggest that heterologous expression of ciliate genes in S. cerevisiae provides a useful tool for the characterization of genes in Tetrahymena, including genes encoding membrane protein complexes.Fil: Poklépovich Caride, Tomás Javier. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rinaldi, Mauro A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Tomazic, Mariela Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Turkewitz, Aaron P. University of Chicago. Department of Molecular Genetics and Cell Biology; Estados UnidosFil: Nudel, Berta Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Nusblat, Alejandro David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentin