Immunohistochemistry and biomolecular investigation for the evidence of JSRV-like retrovirus in human bronchiolo-alveolar carcinomas

The bronchioloalveolar adenocarcinoma was described in several species (human, bovine, ovine and domestic carnivores). Ovine pulmonary adenocarcinoma (OPA) or pulmonary adenomatosis is a contagious carcinoma of sheep caused by an exogenous type D retrovirus denominated also jaagsiekte sheep retrovirus (JSRV). JSRV is responsible of the neoplastic transformation of type II pneumocytes and Clara cells. The human bronchioloalveolar adenocarcinoma (BAC) have histo-morphological features much similar to OPA. We report the study about ten BAC cases and one negative human control (lung). DNA extraction, PCR, sequencing of amplified product, immunohistochemistry and insitu hybridization were performed on all paraffin-embedded samples. Our results demonstrated the presence of JSRVlike sequences in all cases of human bronchiolo-alveolar carcinoma

Associazione adenocarcinoma polmonare ovino-maedi in polmoni ovini naturalmente infetti: topologia di Jaagsiekte sheep retrovirus

L'Adenocarcinoma Polmonare Ovino (OPAC) o Adenomatosi Polmonare, è un tumore contagioso dei piccoli ruminanti a lento sviluppo e basso indice di metastatizzazione, il cui agente eziologico è un retrovirus tipo-D denominato Jaagsiekte Sheep Retrovirus (JSRV). Nel il 10% circa dei casi, la patologia risulta associata a pneumopatie interstiziali croniche causate da Maedi Visna Virus (MVV), lentivirus tipo-B responsabile anche di lesioni encefaliche, mammarie e articolari (1). L'esistenza e la qualità di eventuali sinergie fra i due virus è stata più volte sospettata ma non ha ancora trovato convincenti conferme sperimentali. Con l'obiettivo di verificare la distribuzione cellulare di JSRV in corso di OPAC associato a Maedi, abbiamo condotto prove ibridocitochimiche ed immunoistochimiche su polmoni ovini naturalmente infetti dai due virus e su controlli negativi e di reagente. Sono stati utilizzati a tal scopo: i) un protocollo di PCR-in situ specifico per DNA provirale di JSRV esogeno (Sanna et al, 2001); ii) un anticorpo policlonale sviluppato contro il major capsid antigen (MCA) di JSRV e gentilmente messo a disposizione dal Dr. Chris Cousens del Moredun Research Institute, Edinburgh (UK)

PCR <i>in situ</i> per Maedi Visna Virus: comparazione fra tecniche "dirette" e "indirette"

La PCR in situ (IS-PCR) è una tecnica impiegata presso numerosi laboratori di patologia molecolare, ormai quasi routinariamente, allo scopo di evidenziare DNA o RNA genomico, batterico e virale. Attualmente, le procedure utilizzate sono di tipo "diretto" o "indiretto": le prime marcano le sequenze di interesse già durante la fase di amplificazione mentre le seconde, dopo una PCR in assenza di marcatori, impongono il successivo impiego di sonde geniche contenenti le molecole rivelatrici. In letteratura sono comparsi studi basati su entrambi gli approcci, ma è opinione diffusa che le tecniche "dirette" possano causare la comparsa di segnali aspecifici dovuti all'attività primer-indipendente della TAQ polimerasi. Allo scopo di verificare l'affidabilità di procedure "dirette" di recente proposizione, abbiamo eseguito prove di PCR in situ per Maedi Visna Virus su tessuti polmonari e mammari ovini naturalmente infetti e su controlli negativi etero- e intraspecifici. In parallelo sono state eseguite tecniche "indirette" da lungo tempo in uso presso il nostro laboratorio

Detection of <i>Mycobacterium avium</i> subsp. <i>paratuberculosis</i> (MAP) in animals and human tissue

The aim of this work was the detection of MAP in human with CD and in ovine with natural and experimental PTBC, by in “situ” techniques. ISH showed strong signals in the macrophages infiltrating the mucosal and submucosal layers in PTBC samples and positive signals in macrophages of CD cases. Furthermore, ISPCR signals were more numerous than those obtained by ISH. This result indicate that ISPCR is able to detect also less copies of MAP DNA

Un Caso di linfoma a grandi linfociti granulosi (LGL) in un cavallo: caratterizzazione istochimica ed immunofenotipica = Large granular lymphoma (LGL) in a horse: histochemical and immunophenotype characterization

The aim of this study is to confirm lymphoma diagnosis, characterize the neoplasia immunophenotype and observe cell typologies by histochemical staining

Distribuzione del virus del tumore nasale enzootico in animali naturalmente infetti

Il tumore nasale enzootico è un adenocarcinoma contagioso a lento sviluppo che colpisce le prime vie respiratorie della capra e della pecora (1, 2, 3). L'agente eziologico è il retrovirus tipo-D denominato Enzootic nasal tumor virus (ENTV) il quale viene trasmesso orizzontalmente con il fluido nasale degli animali colpiti. ENTV è altamente correlato a Jaagsiekte Sheep Retrovirus (JSRV), agente causale dell'adenocarcinoma polmonare ovino, con cui condivide oltre il 95% del genoma e della struttura proteica (4). I meccanismi oncogenetici promossi da ENTV e le sue relazioni con quelli causati da JSRV non sono stati tuttavia sufficientemente chiariti

Effect of human amniotic epithelial cells on pro-fibrogenic resident hepatic cells in a rat model of liver fibrosis

Myofibroblasts are key fibrogenic cells responsible for excessive extracellular matrix synthesis characterizing the fibrotic lesion. In liver fibrosis, myofibroblasts derive either from activation of hepatic stellate cells (HSC) and portal fibroblasts (PF), or from the activation of fibroblasts that originate from ductular epithelial cells undergoing epithelial-mesenchymal transition. Ductular cells can also indirectly promote myofibroblast generation by activating TGF-\uce\ub2, the main fibrogenic growth factor, through \uce\ub1v\uce\ub26 integrin. In addition, after liver injury, liver sinusoidal cells can lose their ability to maintain HSC quiescence, thus favouring HSC differentiation towards myofibroblasts. The amniotic membrane and epithelial cells (hAEC) derived thereof have been shown to decrease hepatic myofibroblast levels in rodents with liver fibrosis. In this study, in a rat model of liver fibrosis, we investigated the effects of hAEC on resident hepatic cells contributing to myofibroblast generation. Our data show that hAEC reduce myofibroblast numbers with a consequent reduction in fibronectin and collagen deposition. Interestingly, we show that hAEC strongly act on specific myofibroblast precursors. Specifically, hAEC reduce the activation of PF rather than HSC. In addition, hAEC target reactive ductular cells by inhibiting their proliferation and \uce\ub1v\uce\ub26 integrin expression, with a consequent decrease in TGF-\uce\ub2 activation. Moreover, hAEC counteract the transition of ductular cells towards fibroblasts, while it does not affect injury-induced and fibrosis-promoting sinusoidal alterations. In conclusion, among the emerging therapeutic applications of hAEC in liver diseases, their specific action on PF and ductular cells strongly suggests their application in liver injuries involving the expansion and activation of the portal compartment

Localizzazione di sequenze retrovirali tipo-D in neoplasie mammarie di cagna e di gatta. Indagini preliminari

Il retrovirus tipo-D denominato Jaagsiekte Sheep Retrovirus è l’agente eziologico accertato del carcinoma polmonare dell’ovino e del muflone (OPC). Allo scopo di verificare la presenza di sequenze retrovirali JSRV-like in carcinomi mammari di cagna e di gatta, abbiamo sottoposto a tests di PCR in fase liquida e ibridazione in situ (ISH), specifici per la rivelazione di sequenze appartenenti al tratto U3-LTR del DNA provirale di JSRV (Palmarini et al. 1996; Sanna et al. 2001), i seguenti tessuti d’archivio: n. 4 carcinomi mammari di cagna, n. 9 casi di carcinoma mammario di gatta, n. 2 campioni di tessuto mammario normale (2 di cagna e due di gatta), un campione di OPC ovino e un campione di rene di coniglio

Indagini immunoistochimiche e biomolecolari per l’evidenziazione di retrovirus JSRV-correlati in carcinomi bronchiolo-alveolari dell’uomo

The bronchioloalveolar adenocarcinoma was described in several species (human, bovine, ovine and domestic carnivores). Ovine pulmonary adenocarcinoma (OPA) or pulmonary adenomatosis is a contagious carcinoma of sheep caused by an exogenous type D retrovirus denominated also jaagsiekte sheep retrovirus (JSRV). JSRV is responsible of the neoplastic transformation of type II pneumocytes and Clara cells. The human bronchioloalveolar adenocarcinoma (BAC) have histo-morphological features much similar to OPA. We report the study about ten BAC cases and one negative human control (lung). DNA extraction, PCR, sequencing of amplified product, immunohistochemistry and in situ hybridization were performed on all paraffin-embedded samples. Our results demonstrated the presence of JSRVlike sequences in all cases of human bronchiolo-alveolar carcinoma

Map lesions: <i>in situ</i> investigation on samples of multibacillar and paucibacillar ovine PTBC

Paratuberculosis (PTBC) is a chronic inflammation of the intestines of ruminants but it can also strike other species, including primates. Ovine paratuberculosis lesions have been the subject of authoritative observations (Perez et al., 1996). The macroscopic picture shows a thickening and wrinkling of the intestinal mucous membrane, regional lymphangitis and lymphandenopathy, principally found in the terminal part of the ileum but also in the colon, jejunum and duodenum. Histomorphological pictures are characterised by chronic granulomatous enterocolitis, whose typical clinical symptom is the loss of weight due to profuse diarrhea. The etiological agent of PTBC is the bacterium Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) (Marek, 1910); its presence gives rise to a persistent infection of the intestinal macrophages which appear foamy, in a small granuloma within the interfollicular-basal area of the Peyer’s plaques of the ileal tract. In some cases, even in the presence of marked lesions and clear, clinical symptomatology, coloration of the Ziehl-Nielsen (ZN) produces a negative result. DNA analysis of MAP has identified a peculiar insertion sequence, IS900, present in 15–20 pairs per genome (Green et al., 1989)