IMPORTÂNCIA DO PAINEL DE SCREENING DE IMUNOFENOTIPAGEM POR CITOMETRIA DE FLUXO PARA O DIAGNÓSTICO DE LEUCEMIAS AGUDAS

As leucemias agudas compreendem um grupo heterogêneo de neoplasias clonais que diferem quanto à etiologia, patogênese, história natural e prognóstico. A proliferação, nesses casos, está acelerada afetando a produção de células hematopoéticas, ocasionando insuficiência da medula óssea e acometimento extracelular. Classicamente as leucemias dividem-se nas duas principais linhagens leucocitárias: linfóides e mielóides. A imunofenotipagem, realizada pela técnica de citometria de fluxo, é útil tanto no diagnóstico como na classificação, prognóstico, estadiamento e monitoramento das leucemias através da caracterização fenotípica das células hematopoiéticas patológicas. É um método multiparamétrico, que utiliza anticorpos monoclonais marcados com fluorocromos para analisar qualitativa e quantitativamente padrões de expressão de antígenos. O tubo de triagem contendo 8 anticorpos, foi idealizado para uma análise rápida e eficiente de uma amostra, para a identificação, enumeração e caracterização das populações de células suspeitas

IMPORTÂNCIA DO PAINEL DE SCREENING DE IMUNOFENOTIPAGEM POR CITOMETRIA DE FLUXO PARA O DIAGNÓSTICO DE LEUCEMIAS AGUDAS

As leucemias agudas compreendem um grupo heterogêneo de neoplasias clonais que diferem quanto à etiologia, patogênese, história natural e prognóstico. A proliferação, nesses casos, está acelerada afetando a produção de células hematopoéticas, ocasionando insuficiência da medula óssea e acometimento extracelular. Classicamente as leucemias dividem-se nas duas principais linhagens leucocitárias: linfóides e mielóides. A imunofenotipagem, realizada pela técnica de citometria de fluxo, é útil tanto no diagnóstico como na classificação, prognóstico, estadiamento e monitoramento das leucemias através da caracterização fenotípica das células hematopoiéticas patológicas. É um método multiparamétrico, que utiliza anticorpos monoclonais marcados com fluorocromos para analisar qualitativa e quantitativamente padrões de expressão de antígenos. O tubo de triagem contendo 8 anticorpos, foi idealizado para uma análise rápida e eficiente de uma amostra, para a identificação, enumeração e caracterização das populações de células suspeitas

Valor de corte para linfócitos absolutos como alternativa para análise imunofenotípica de células T CD3+ no monitoramento de terapia imunossupressora com timoglobulina

Introduction: Immunosuppression of T lymphocytes is required for preventing acute rejection after transplantation and for the treatment of chronic autoimmune and inflammatory diseases. The laboratory monitoring for this therapy is the measurement of T cells by immunophenotyping, aiming the target value of less than 20 cells per µL. Objective: To establish a cut-off point for the total number of lymphocytes in the automated blood cell count that reflects less than twenty T cells µL by immunophenotyping. Methods: We studied and evaluated 242 kidney transplant patients that had results of automated blood cell count and quantification of T cells by immunophenotyping technique. The patients were divided into two groups, depending on the T lymphocyte immunophenotyping rates established by lower and higher than 20 cells per µL. After, we evaluated the cut-off point for lymphocytes in the blood cell count with a specificity of 100% to exclude patients with high levels of T lymphocytes. Results: We found that the cut-off point of 70 lymphocytes per µL obtained by automated blood cell count showed 100% of specificity to exclude patients with T-cell counts higher than 20 cells per µL by immunophenotyping. Conclusion: The results found in this study may be helpful to monitor the immunosuppressive therapy in kidney transplant patients in places where a flow cytometer is not available, or when this equipment is not present in the full routine.Introdução: A imunossupressão de linfócitos T é necessária para a prevenção da rejeição aguda em transplantes e no tratamento de doenças autoimunes e inflamatórias crônicas. O seu monitoramento laboratorial consiste na quantificação dos linfócitos T realizada pela técnica de imunofenotipagem, na qual o valor preconizado é manter inferior a 20 células/ µL. Objetivo: Estabelecer um ponto de corte para o número de linfócitos totais no hemograma automatizado que reflita uma contagem de linfócitos T inferior a 20 células/µL por imunofenotipagem. Métodos: Foram avaliados 242 pacientes transplantados renais que continham resultados do hemograma automatizado e quantificação de linfócitos T por imunofenotipagem. Os pacientes foram divididos em dois grupos, conforme os valores de linfócitos T estabelecidos pela imunofenotipagem: inferiores e superiores a 20 células/µL. A partir disto, foi avaliado o ponto de corte de linfócitos no hemograma com especificidade de 100% para excluir os pacientes com valores elevados de linfócitos T. Resultados: Este estudo evidenciou que o ponto de corte de 70 linfócitos/µL obtidos pelo hemograma automatizado apresentou especificidade de 100% para excluir os pacientes com contagens de linfócitos T superiores a 20 células/µL na imunofenotipagem. Conclusão: Esta pesquisa poderá auxiliar no monitoramento da terapia imunossupressora em pacientes transplantados renais em locais que não possuem um citômetro de fluxo disponível, ou ainda quando este equipamento não se faz presente na rotina integral

Hemofagocitose por células blásticas em paciente pediátrico com leucemia monocítica aguda após quimioterapia

Objective: To describe the case of a child who presented hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH) associated with acute monocytic leukemia after chemotherapy, with hemophagocytosis caused by leukemic cells. Case description: In a university hospital in Southern Brazil, a 3-yearold female was diagnosed with acute monocytic leukemia with normal karyotype. The chemotherapy regimen was initiated, and she achieved complete remission six months later, relapsing after four months with a complex karyotype involving chromosomes 8p and 16q. The bone marrow showed vacuolated blasts with a monocytic aspect and evidence of hemophagocytosis. The child presented progressive clinical deterioration and died two months after the relapse. Comments: HLH is a rare and aggressive inflammatory condition characterized by cytopenias, hepatosplenomegaly, fever, and hemophagocytosis in the bone marrow, lymph nodes, spleen, and liver. Although rare, malignancy-associated HLH (M-HLH) is fatal. The patient in this case report met five out of the eight established criteria for HLH. The evolution of the patient’s karyotype, regardless of the diagnostic profile, seemed secondary to the treatment for acute monocytic leukemia. In this case, the cytogenetic instability might have influenced the abnormal behavior of leukemic cells. This is a rare case of HLH in a child with acute monocytic leukemia.Objetivo: Descrever um caso de um paciente pediátrico que apresentou linfo-histiocitose hemofagocítica (LHH) associada à leucemia monocítica aguda pós-quimioterapia, com hemofagocitose causada pelas próprias células leucêmicas. Descrição do caso: Em um hospital universitário do Sul do Brasil, uma menina de três anos foi diagnosticada com leucemia monocítica aguda com cariótipo normal. Após receber protocolo quimioterápico, atingiu remissão seis meses depois do início do tratamento, recaíndo quatro meses após com um cariótipo complexo envolvendo ambos os cromossomos, 8p e 16q. A medula óssea mostrava-se infiltrada por células blásticas vacuolizadas com aspecto monocítico, com evidências de hemofagocitose. A criança apresentou um declínio clínico progressivo e dois meses após a recaída foi a óbito. Comentários: A LHH é uma condição inflamatória rara e agressiva caracterizada por citopenias, hepatoesplenomegalia, febre e hemofagocitose na medula óssea, linfonodos, baço e fígado. A LHH associada a doenças malignas, embora seja uma condição rara, é potencialmente fatal. A paciente deste caso apresentou cinco dos oito critérios estabelecidos para o diagnóstico de LHH. A evolução do cariótipo do paciente, independentemente do perfil do diagnóstico, pareceu ser secundária ao tratamento da leucemia monocítica aguda, sendo que a instabilidade citogenética pode ter influenciado o comportamento atípico observado nas células leucêmicas. Este é um dos raros casos de LHH em uma criança com leucemia monocítica aguda

Impacto da análise molecular da mutação JAK2V617F no diagnóstico de neoplasias mieloproliferativas crônicas de acordo com os critérios da OMS 2016

As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) são um grupo de doenças derivadas de uma transformação clonal de célula tronco hematopoiéticas no qual a linhagem celular mielóide é predominantemente expandida no sangue periférico. As NMPs Philadelphia-negativas incluem policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose primária (MFP) que compartilham muitas características hematológicas, clínicas e evolutivas. A mutação da JAK2 (JAK2V617F) está presente em cerca de 95% dos pacientes com PV, entre 50 a 70% com TE e 40 a 50% com MFP. No entanto, os testes moleculares para diagnóstico são muitas vezes um desafio devido ao alto custo e a disponibilidade de equipamentos especializados. Objetivo: Verificar o impacto do teste molecular da mutação JAK2V617F para o diagnóstico de NMPs nos pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Métodos: Foram avaliados 87 pacientes com suspeita de NMPs. As amostras de sangue periférico foram analisadas para a mutação JAK2V617F pelo método genético molecular de PCR alelo-específico e os resultados correlacionados com os dados clínico-laboratoriais. Para estabelecimento do diagnóstico, foram utilizados os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2016. Resultados: Dos 87 pacientes avaliados, 27,6% foram diagnosticados como PV, 39,1% como TE, 4,6% como MFP e 28,7% não contemplavam os critérios para o diagnóstico NMPs. A comparação da utilização do teste da mutação JAK2V617F mostrou que, apenas 41,7% dos pacientes com PV sem utilizar o teste, teriam sido diagnosticados comparados a 91,7% utilizando este teste como um dos critérios no diagnóstico final (p = 0,004). Na TE e na MFP, este critério não foi estatisticamente significativo. Conclusão: O teste molecular para a mutação de JAK2V617F no nosso hospital teve um impacto significativo no diagnóstico dos pacientes com PV, mostrando ser uma ferramenta importante para o diagnóstico final desta NMP.Myeloproliferative neoplasms (MPNs) are a group of disorders derived from a clonal transformation of stem cell on which myeloid cell lineage is predominantly expanded in the peripheral blood. Philadelphia-negative MPNs include polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), and primary myelofibrosis (PMF) which share many hematological, clinical, and evolutionary characteristics. The JAK2 mutation (JAK2V617F) is present in about 95% of patients with PV, between 50 to 70% with ET and 40 to 50% PMF. However, the molecular diagnostic tests are often a challenge due to the high cost and the availability of specialized equipment. Objective: To verify the impact of molecular testing of the JAK2V617F mutation for the diagnosis of MPNs in patients attended at Hospital de Clinics, Porto Alegre. Methods: A total of 97 patients were evaluated with suspected of MPNs. The peripheral blood samples were analyzed for the JAK2V617F mutation by the molecular genetic allelespecific PCR method and the results correlated with the clinical-laboratory data. To establish the diagnosis, the 2016 World Health Organization (WHO) criteria were used. Results: Of the 87 patients evaluated, 27.6% were diagnosed as PV, 39.1% as ET, 4.6% as PMF and 28.7% did not meet criteria for MPNs diagnosis. Comparison of the use of the JAK2V617F test showed that only 41.7% of patients with PV without the mutation test were diagnosed compared to 91.7% using this test as one of the criteria for the final diagnosis (p = 0.004). In the ET and the PMF, this criterion was not statistically significant. Conclusion: The molecular test for the JAK2V617F mutation in our hospital had a significant impact in the diagnosis of patients with PV, showing to be an important tool for the final diagnosis of this MPN

Impacto da análise molecular da mutação JAK2V617F no diagnóstico de neoplasias mieloproliferativas crônicas de acordo com os critérios da OMS 2016

As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) são um grupo de doenças derivadas de uma transformação clonal de célula tronco hematopoiéticas no qual a linhagem celular mielóide é predominantemente expandida no sangue periférico. As NMPs Philadelphia-negativas incluem policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose primária (MFP) que compartilham muitas características hematológicas, clínicas e evolutivas. A mutação da JAK2 (JAK2V617F) está presente em cerca de 95% dos pacientes com PV, entre 50 a 70% com TE e 40 a 50% com MFP. No entanto, os testes moleculares para diagnóstico são muitas vezes um desafio devido ao alto custo e a disponibilidade de equipamentos especializados. Objetivo: Verificar o impacto do teste molecular da mutação JAK2V617F para o diagnóstico de NMPs nos pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Métodos: Foram avaliados 87 pacientes com suspeita de NMPs. As amostras de sangue periférico foram analisadas para a mutação JAK2V617F pelo método genético molecular de PCR alelo-específico e os resultados correlacionados com os dados clínico-laboratoriais. Para estabelecimento do diagnóstico, foram utilizados os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2016. Resultados: Dos 87 pacientes avaliados, 27,6% foram diagnosticados como PV, 39,1% como TE, 4,6% como MFP e 28,7% não contemplavam os critérios para o diagnóstico NMPs. A comparação da utilização do teste da mutação JAK2V617F mostrou que, apenas 41,7% dos pacientes com PV sem utilizar o teste, teriam sido diagnosticados comparados a 91,7% utilizando este teste como um dos critérios no diagnóstico final (p = 0,004). Na TE e na MFP, este critério não foi estatisticamente significativo. Conclusão: O teste molecular para a mutação de JAK2V617F no nosso hospital teve um impacto significativo no diagnóstico dos pacientes com PV, mostrando ser uma ferramenta importante para o diagnóstico final desta NMP.Myeloproliferative neoplasms (MPNs) are a group of disorders derived from a clonal transformation of stem cell on which myeloid cell lineage is predominantly expanded in the peripheral blood. Philadelphia-negative MPNs include polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), and primary myelofibrosis (PMF) which share many hematological, clinical, and evolutionary characteristics. The JAK2 mutation (JAK2V617F) is present in about 95% of patients with PV, between 50 to 70% with ET and 40 to 50% PMF. However, the molecular diagnostic tests are often a challenge due to the high cost and the availability of specialized equipment. Objective: To verify the impact of molecular testing of the JAK2V617F mutation for the diagnosis of MPNs in patients attended at Hospital de Clinics, Porto Alegre. Methods: A total of 97 patients were evaluated with suspected of MPNs. The peripheral blood samples were analyzed for the JAK2V617F mutation by the molecular genetic allelespecific PCR method and the results correlated with the clinical-laboratory data. To establish the diagnosis, the 2016 World Health Organization (WHO) criteria were used. Results: Of the 87 patients evaluated, 27.6% were diagnosed as PV, 39.1% as ET, 4.6% as PMF and 28.7% did not meet criteria for MPNs diagnosis. Comparison of the use of the JAK2V617F test showed that only 41.7% of patients with PV without the mutation test were diagnosed compared to 91.7% using this test as one of the criteria for the final diagnosis (p = 0.004). In the ET and the PMF, this criterion was not statistically significant. Conclusion: The molecular test for the JAK2V617F mutation in our hospital had a significant impact in the diagnosis of patients with PV, showing to be an important tool for the final diagnosis of this MPN

Analysis of Rules of Origin

原產地規則已形成一項重要的貿易問題，其對商業進口型態與工廠尋求供應來源決策之決定有相當影響。因此，企業於尋求最具成本效益之零組件購買時，必須考慮零組件和最終產品之原產地將會如何被定義，如此才能了解通關條件和關稅適用情形。於選擇製造廠和裝配工廠的設廠地點時，企業也必須考慮於最終市場，其產品的原產地將如何被定義，以求能使其產品之關稅和非關稅貿易障礙降至最低。企業全球化之增加與各國經濟的互相依賴，使得產品原產地的決定變得相當困難。而且，進口產品的差別待遇，傳統貿易障礙使用之額外限制，與企業的全球化策略，均使原產地規則愈來愈重要。雖然政府目前正在草擬“進口貨品原產地認定標準”草案，但目前國內對原產地規則之研究尚屬有限。基於使我國企業界進一步了解此重要議題於世界主要貿易體之適用情形，以作為企業於本國與海外投資和設廠等決策之參考，以及因應我國加入 GATT 及將成立之世界貿易組織（ World Trade Organization； WTO）後，於原產地規則之國際多邊談判需要，特對產品與生產者之原產地規則，及原產地規則之政治經濟學加以探討。最後，再提出個人淺見以供後續研究者及政府決策者於起草我國原產地規則時參考