Knocking down gene expression for growth hormone-releasing hormone inhibits proliferation of human cancer cell lines

Splice Variant 1 (SV-1) of growth hormone-releasing hormone (GHRH) receptor, found in a wide range of human cancers and established human cancer cell lines, is a functional receptor with ligand-dependent and independent activity. In the present study, we demonstrated by western blots the presence of the SV1 of GHRH receptor and the production of GHRH in MDA-MB-468, MDA-MB-435S and T47D human breast cancer cell lines, LNCaP prostate cancer cell line as well as in NCI H838 non-small cell lung carcinoma. We have also shown that GHRH produced in the conditioned media of these cell lines is biologically active. We then inhibited the intrinsic production of GHRH in these cancer cell lines using si-RNA, specially designed for human GHRH. The knocking down of the GHRH gene expression suppressed the proliferation of T47D, MDA-MB-435S, MDA-MB-468 breast cancer, LNCaP prostate cancer and NCI H838 non-SCLC cell lines in vitro. However, the replacement of the knocked down GHRH expression by exogenous GHRH (1–29)NH2 re-established the proliferation of the silenced cancer cell lines. Furthermore, the proliferation rate of untransfected cancer cell lines could be stimulated by GHRH (1–29)NH2 and inhibited by GHRH antagonists MZ-5-156, MZ-4-71 and JMR-132. These results extend previous findings on the critical function of GHRH in tumorigenesis and support the role of GHRH as a tumour growth factor

Beiträge zur Flora von Österreich, II

Stöhr, O., Pilsl, P., Essl, F., Hohla, M., Schröck, C. (2007): Beiträge zur Flora von Österreich, II. Linzer biologische Beiträge 39 (1): 155-292, DOI: http://doi.org/10.5281/zenodo.540754

Potenzierung der Tumorinhibition von experimetell- induziertem Mammkarzinom durch die kombinierte Applikation von Taxotere und GnRH- Antagonisten

Einleitung: Taxane stellen in der adjuvanten Situation des Mammakarzinoms eine etablierte Therapieform dar. GnRH- Antagonisten zeigen unter anderem einen starken inhibitorischen Effekt auf das Mammakarzinom. In dieser Studie sollte die Interaktion der beiden Substanzen in kombinierter Applikation auf das Proliferationsverhalten der experimentell induzierten Mammakarzinomzelllinien MX-1 in Nacktmäusen evaluiert werden. Hierzu wurden rezeptornegative, anthrazyklinresistente MX-1 Mammakarzinomzellen subcutan in Nacktmäuse xenotransplantiert. Methodik: Bei einem mittleren Tumorvolumen von 80mm 3 erfolgte die Randomisierung in folgende Behandlungsgruppen (n=8): Gruppe 1: Kontrolle, keine Therapie, Gruppe 2: an Tag 1 und 5 intraperitoneale Administration von Docetaxel 20mg/kg Kg, Gruppe 3: Taxotere 20/mg/kg mit MZ-J-138 at 10μg/d, Gruppe 4: Taxotere 20/mg/kg und MZ-J-138 20μg/d, Gruppe 5: Taxotere 20/mg/kg und JMR-132 10μg/d, Gruppe 6: MZ-J-138 10μg/d, Gruppe 7: MZ-J-138 20μg/d, Gruppe 8: JMR-132 10μg/d. Docetaxel wurde in den Kombinationsgruppen ebenfalls an Tag 1 und 5 appliziert. Ergebnisse: In der Docetaxel Gruppe (2) alleine, zeigt sich nach 4 wöchentlicher Therapie eine signifikante Reduktion des Tumorvolumens (78%) und Tumorgewichtes (59%) im Vergleich zur Kontrollgruppe. Bei den Gruppen (6,7,8), ergab sich bei den mit JMR-132 behandelten Mäusen eine signifikante Reduktion von Tumorvolumen und Gewicht gegenüber der Kontrollgruppe. Das mittlere Tumorvolumen beträgt in der Kombination von JMR-132 und Taxotere nach Abschluss der Therapie 35mm 3 und liegt somit unter dem initialen Ausgangsvolumen. Das mittlere Tumorgewicht (75mg) hat ebenfalls im Vergleich zur Kontrollgruppe (1700mg) signifikant abgenommen. Schlussfolgerung: Die Ergebnisse unserer Studie zeigen, dass die Kombination von GnRH- Antagonisten und Docetaxel in experimentell induziertem Mammakarzinom einen deutlichen Vorteil gegenüber der alleinigen Applikation hat

Beiträge zur Flora von Österreich, III

Stöhr, O., Pilsl, P., Essl, F., Wittmann, H., Hohla, M. (2009): Beiträge zur Flora von Österreich, III. Linzer biologische Beiträge 41 (2): 1677-1755, DOI: 10.5281/zenodo.527972

Potenzierung der Tumorinhibition von experimetell- induzierten Mammkarzinomen durch die kombinierte Applikation von Taxotere und eines GHRH Antagonisten

Fragestellung: Taxane sind effektive Substanzen in der Therapie des Mammakarzinoms. GHRH Antagonisten zeigten in einigen experimentellen Studien einen starken inhibitorischen Effekt auf verschiedene Malignome. Die Studie sollte die Interaktion beider Substanzen bei kombinierter Applikation auf das Proliferationsverhalten und die Expression des EGF Rezeptors im experimentell induzierten Mammakarzinom evaluiert werden. Methodik: Steroidhormon- rezeptornegative, anthrazyklinresistente MX-1 Mammakarzinomzellen wurden subcutan in Nacktmäuse xenotransplantiert. Bei einem mittleren Tumorvolumen von 80mm3 erfolgte die Randomisierung in folgende Behandlungsgruppen (n=8): Gruppe 1: Kontrolle, Gruppe 2: an Tag 1 und 5 intraperitoneale Administration von Docetaxel 20mg/kgKG, Gruppe 3: JMR 132 mit 10µg/tag. Gruppe 4: Docetaxel 20mg/kg KG mit JMR 132 mit 10µg/tag. Docetaxel wurde in den Kombinationsgruppen ebenfalls an Tag 1 und 5 appliziert. Tumorvolumen und KG wurden wöchentlich gemessen, nach Abschluss der Behandlung wurden die Tumore gewogen. Die Expression der EGF Rezeptoren wurde mittels kompetitiven Ligandenassay bestimmt. Ergebnisse: In der Gruppe 2 (Taxotere 20mg/kg KG alleine), zeigte sich nach 4 wöchiger Applikation eine signifikante Reduktion des Tumorvolumens (74%) und Tumorgewichtes (59%) im Vergleich zur Kontrollgruppe. Die Gabe von JMR 132 führte zu einer signifkanten Reduktion des Tumorvolumens (p<0,001). In der Kombinationsgruppe konnte in Bezug auf Tumorvolumen und Tumorgewicht ein additiver Effekt der beiden Substanzen gezeigt werden. Die Applikation von JMR 132 und deren Kombination zeigte im Vergleich zur alleinigen Gabe von Docetaxel eine signifikante Reduktion der EGF Rezeptoren. Schlussfolgerung: Die Ergebnisse dieser Arbeit zeigen, dass die kombinierte Gabe des GHRH Antagonisten und Docetaxel in experimentell induzierten Mammakarzinomen einen deutliche Steigerung der Wirksamkeit gegenüber der alleinigen Applikation hat

Potenzierung der Tumorinhibition von experimentell- induzierten Mammkarzinomen durch die kombinierte Applikation von Taxotere und eines GHRH Antagonisten

1. Fragestellung: Taxane sind effektive Substanzen in der Therapie des Mammakarzinoms. GHRH Antagonisten zeigten in einigen experimentellen Studien einen starken inhibitorischen Effekt auf verschiedene Malignome unter anderem auch auf Mammakarzinome. In dieser Studie sollte die Interaktion beider Substanzen bei kombinierter Applikation auf das Proliferationsverhalten und die Expression des EGF Rezeptors im experimentell induzierten Mammakarzinom evaluiert werden. 2. Methodik: Steroidhormon- rezeptornegative, anthrazyklinresistente MX-1 Mammakarzinomzellen wurden subcutan in Nacktmäuse xenotransplantiert. Bei einem mittleren Tumorvolumen von 80mm 3 erfolgte die Randomisierung in folgende Behandlungsgruppen (n=8): Gruppe 1: Kontrolle, keine Therapie, Gruppe 2: an Tag 1 und 5 intraperitoneale Administration von Docetaxel 20mg/kg Körpergewicht (KG), Gruppe 3: JMR 132 mit 10µg/tag. Gruppe 4: Docetaxel 20mg/kg KG mit JMR 132 mit 10µg/tag. Docetaxel wurde in den Kombinationsgruppen ebenfalls an Tag 1 und 5 appliziert. Tumorvolumen und KG wurden wöchentlich gemessen, nach Abschluss der Behandlung wurden die Tumore gewogen. Die Expression der EGF Rezeptoren wurde mittels kompetitiven Ligandenassay bestimmt. 3. Ergebnisse: In der Gruppe 2 (Taxotere 20mg/kg KG alleine), zeigte sich nach 4 wöchiger Applikation eine signifikante Reduktion des Tumorvolumens (74%) und Tumorgewichtes (59%) im Vergleich zur Kontrollgruppe. Die Gabe von JMR 132 führte zu einer signifkanten Reduktion des Tumorvolumens (p<0,001). Das Tumorgewicht war nach abgeschlossener Therapie um 47% reduziert. In der Kombinationsgruppe konnte in Bezug auf Tumorvolumen und Tumorgewicht ein additiver Effekt der beiden Substanzen gezeigt werden. Die Applikation von JMR 132 und deren Kombination zeigte im Vergleich zur alleinigen Gabe von Docetaxel eine signifikante Reduktion der EGF Rezeptoren. 4. Schlussfolgerung: Die Ergebnisse dieser Arbeit zeigen, dass die Kombinierte Gabe des GHRH Antagonisten und Docetaxel in experimentell induzierten Mammakarzinomen eine deutliche Steigerung der Wirksamkeit gegenüber der alleinigen Applikation hat

Effective treatment of triple-negative breast cancer with targeted cytotoxic somatostatin analogue AN-162 (AEZS-124)

619 Background: Triple negative breast cancers (TNBC) represent a distinct subtype of breast cancer being negative to ER, PR and HER2 and are associated with poor prognosis. Limited systemic treatment options exist for TNBC. TNBC cells express somatostatin receptors (SSTR). Therefore, to investigate preclinical characteristics of TNBC we used a novel targeted cytotoxic somatostatin analogue AN-162 containing doxorubicin (DOX) which binds to the subtypes 2, 3 and 5 of SSTR. Methods: The expression of SSTR in HCC 1806 human TNBC cell line was detected by RT-PCR. Cytotoxic effect of AN-162 in vitro was visualized by ethidium bromide staining fluorescence microscopy. Internalization of AN-162 into HCC 1806 cells was tested by 125Iodide-labeled AN-162 uptake assays and the presence of DOX in the nucleus was measured by fluorescence assays after separating the nucleus from the cytoplasm. For in vivo experiments, HCC 1806 TNBC cells were xenografted subcutaneously into nude mice which were then randomized into four groups receiving AN-162, DOX, an unconjugated mixture of DOX and somatostatin analogue RC-160 at the same equimolar dose of 2.5 μmol/kg (1.45 mg/kg Dox equivalent) i.v. (q7d 4x) and vehicle solution control. Results: HCC 1806 TNBC cell line was positive for the expression of all five SSTR receptor subtypes. Ethidum bromide staining of cells treated with 2.5 μM of AN-162 for 30 min demonstrated cell death after 24h by fluorescence microscopy. Uptake assays with AN-162 showed specific internalization of AN-162 into the cells mediated through the sstrs. After treatment of the cells with 2.5 μM AN-162 for 10 or 30 min, DOX could be detected in the nucleus by fluorescence assays. In vivo, AN-162 significantly (p<0.05) inhibited tumor growth of HCC 1806 xenografts compared to Control, DOX and the unconjugated mixture of DOX+RC-160 from day 14 and the inhibition remained significant until the end of the study on day 35. Conclusions: Our results indicate that treatment with targeted cytotoxic somatostatin analogue AN-162 produces a greater inhibition of tumor growth than DOX alone in somatostatin receptor positive TNBC. Our findings support the concept of targeted chemotherapy based on cytotoxic peptide analogues for the treatment of breast cancer and other cancers. No significant financial relationships to disclose

Preclinical evaluation of properties of a new targeted cytotoxic somatostatinanalog, AN-162 (AEZS-124), and its effects on tumor growth inhibition.

In view of findings that various tumors express receptors for somatostatin, a new targeted cytotoxic analog of somatostatin, AN-162 (AEZS-124), consisting of doxorubicin linked through glutaric acid to the somatostatin octapeptide RC-121 was developed in our laboratory. We studied the toxicity in vivo and the effect of AN-162 on growth of the MDA-MB-231 estrogen-independent human breast cancer cell line xenografted into nude mice. AN-162 induced significant tumor growth inhibition compared with the control and the group treated with doxorubicin in equimolar doses. We also evaluated the stability of AN-162 in various sera in vitro, as this conjugate is susceptible to hydrolysis by serum carboxylesterase enzymes in the circulation. This study shows for the first time that AN-162 is a safe and effective compound for the treatment of experimental breast cancer. Our findings support the concept of targeted chemotherapy based on cytotoxic peptide analog AN-162 for the treatment of breast cancers and other cancers expressin