Genetic manipulation of tobacco against osmotic stress via proline overproduction

Ph.D. - Doctoral Progra

Target-specific delivery of doxorubicin to human glioblastoma cell line via ssDNA aptamer

WOS:000426370500010PubMed:29485118Targeted drug delivery approaches have been implementing significant therapeutic gain for cancer treatment since last decades. Aptamers are one of the mostly used and highly selective targeting agents for cancer cells. Herein, we address a nano-sized targeted drug delivery approach adorned with A-172 glioblastoma cell-line-specific single stranded DNA (ssDNA) aptamer in which the chemotherapeutic agent Doxorubicin (DOX) had been conjugated. DNA aptamer, GMT-3, was previously selected for specific recognition of glioblastoma and represented many advantageous characteristics for drug targeting purposes. Flow cytometry analysis proved the binding efficiency of the specific aptamer to tumour cell lines. Cell-type-specific toxicity of GMT-3:DOX complex was showed by XTT assay and terminated cytotoxic effects were screened for both target cell and a control breast cancer cell line. The result of this contribution demonstrated the potential utility of GMT-3 aptamer-mediated therapeutic drug transportation in the treatment of gliomas specifically. It was concluded that aptamer-mediated drug delivery can be applied successfully for clinical use

Patatesde tuz kuraklık stresine toleranslı transgenik bitkilerin geliştirilmesi

TÜBİTAK TOGTAG01.09.2004Bitkiler üretimi ve büyümeyi engelleyen çeşitli çevresel faktörlere maruz kalırlar. Bu çevresel stresler içinde, kuraklık ve tuzluluktan kaynaklanan ozmotik stres en ciddi, problemlerden biridir. Yürütülen çalışmanın amacı gen teknolojisi yöntemleri kullanılarak tuz ve kuraklık stresine toleranslı patates bitkilerinin geliştirilmesidir. Bu amaçla bitkilerde sentezlenen ozmokoruyuculardan biri olan prolinin akümülasyonunu arttırmak için biyosentez yolundaki anahtar enzim olan PSCS'yi kodlayan genin patatese transferi gerçekleştirilmiştir. Çalışmanın ilk aşamasında transformasyon ve analiz çalışmalarında kullanılmak üzere Ausonia cinsi patateslerden ana kültür kurulmuştur. P5CS genini taşıyan iki farklı plasmid vektörü E.coli hücrelerinde amplifiye edilmiş, elektroporasyon ile A.tumefadens hücrelerine aktarılmış, ve bu A.tumefaciens hücreleriyle transformasyon rejenerasyon çalışmalarına başlanmıştır. Elde edilen 88 hat transgenîk bitkiden prolini en fazla akümüle eden 10 hat bitki seçilmiş, bu bitkiler île moleküler ve biyokimyasal analizler gerçekleştirilmiştir. Analizlerin sonunda tüm bitkilerin kontrol bitkilere oranla tuz stressine daha toleranslı oldukları gösterilmiştir. Elde edilen bulgular, patatesde prolin biyosentezinin genetik manipülasyonlar yolu ile arttırılmasının, osmotik stres toleransı iyileştirilmiş bitkilerin geliştirilmesinde kullanılabileceği yönündedir

Bazı baklagillerde in planta elektroporasyon yöntemi ile gen transferine yönelik araştırmalar

TÜBİTAK TOGTAG TARP01.08.2001Proje kapsamında yürütülen araştırmalar iki ana başlık altında gerçekleştirilmiştir. Birinci bölümde yabani şekerpancarı orijinli ve bitkilere nematod direnci sağladığı gösterilmiş olan Hslpro1 genini taşıyan bitki transformasyon vektörlerinin konstrüksiyonu konusunda çalışmalar yürütülmüştür. Bu çalışmalar sonucunda Hslpwl genini CAMBIA1300 ve 3300 bitki transformasyon vektörlerine klonlanmış ve pDNEMİS ve 33 olarak adlandırdığımız ikili bitki transformasyon vektörleri oluşturulmuştur. Çalışmanın diğer bölümünde, mercimek ve nohut üzerinde, in planla elektroporasyon ve Agrobacterium yöntemleri ile gen transferi çalışmaları yürütülmüştür. Öncelikle sistem mercimek üzerinde denenmiş ancak bitkiler tep vurma ve enjeksiyon sonrası çok düşük sürgün oluşumu gösterdiğinden, çalışmalara nohut üzerinde devam edilmiştir. Sistemin optimizasyonu amacıyla özellikle farklı elektroporasyon parametreleri (voltaj miktarı ve süresi)ve DNA koruyucu ajanların (spermidin ve lipofektin)transformasyon frekansına etkileri araştırılmıştır. Sonuçta toplam 850 bitki üzerinde yürütülen 13 set deneyde olumlu sonuç alınamamıştır. Bu nedenle proje kapsamında önerilmemiş olmasına karşın nohutta Agrobacterium ile gen transferi sistemi de denenmiş ve gerçekleştirilen ön çalışmalar sonrası başarılı sonuçlar elde edilmiştir