Serological, molecular characterization and epidemiological situation of equine influenza in the Arabic Maghreb countries between 1972 to 2010

AbstractEquine influenza is an infectious and contagious disease of horses. Studies on this topic are rare in the Maghreb countries. Therefore, the aim of this work is to present the various studies conducted on serological and molecular equine influenza virus since 1972 in the Maghreb region in particular in Morocco, Algeria and Tunisia.A total of four equine influenza strains were isolated in the Maghreb Arab region. A/equine/Nador/1/1997(H3N8), A/equine/Essaouira/2/2004(H3N8), A/equine/Essaouira/3/2004(H3N8) and A/equine/Algiers/1/1972(H3N8).The highest homology of HA nucleotide sequences of A/equine/Nador/1/1997(H3N8) with European strains: A/equine/Italy/1199/1992(H3N8) and A/equine/Brescia/1999(H3N8) clearly clustered A/equine/Nador/1/1997(H3N8) with the strains belonging to the European lineage. However, A/equine/Algiers/1/1972(H3N8), A/equine/Essaouira/2/2004(H3N8) and A/equine/Essaouira/3/2004(H3N8) were placed in the predivergent lineage indicating that like-Miami/63 strains infected equids in Morocco in 2004.This finding does not corroborate the recent studies of the H3N8 subtype of equine influenza viruses which have demonstrated that the oldest equine H3N8 strains, circulating before 1990 apparently went extinct

Arabidopsis thaliana cells: a model to evaluate the virulence of Pectobacterium carotovorum.

Pectobacterium carotovorum are economically important plant pathogens that cause plant soft rot. These enterobacteria display high diversity world-wide. Their pathogenesis depends on production and secretion of virulence factors such as plant cell wall-degrading enzymes, type III effectors, a necrosis-inducing protein, and a secreted virulence factor from Xanthomonas spp., which are tightly regulated by quorum sensing. Pectobacterium carotovorum also present pathogen-associated molecular patterns that could participate in their pathogenicity. In this study, by using suspension cells of Arabidopsis thaliana, we correlate plant cell death and pectate lyase activities during coinfection with different P. carotovorum strains. When comparing soft rot symptoms induced on potato slices with pectate lyase activities and plant cell death observed during coculture with Arabidopsis thaliana cells, the order of strain virulence was found to be the same. Therefore, Arabidopsis thaliana cells could be an alternative tool to evaluate rapidly and efficiently the virulence of different P. carotovorum strains

Diagnostic moléculaire par RT-PCR de la grippe équine au Maroc

Twenty-four nasopharyngeal swabs from suspect horses with equine influenza, taken from the Casablanca region, were analyzed by RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) to research for the gene encoding the matrix protein M of equine influenza virus. The aim of this article is to check the specificity of each methods: RT-PCRq (real time) and conventional RT-PCR (classic), in order to confirm their correct application and comparison of their analytical sensitivity. The results of the sensitivity confirmed the high sensitivity of RT-PCRq detecting the virus diluting at 5.10.4 (viral charging: 150DCPE50/100μl), while the classical RT-PCR revealed a detection limit at the dilution 5.10-3 (viral Charging: 1,5.103DCPE50/100µl). Due to its high sensitivity, RT-PCRq was used to test the 24 swabs from horses with suspected equine influenza whose results were negative. However, the simultaneous amplification of a sequence of the gene Beta-actin specific equine increases the reliability of our results by the RT-PCRq inhibition control.Vingt quatre écouvillons naso-pharyngiens issus de chevaux suspects atteints de la grippe équine, prélevés dans la région de Casablanca, ont été analysés par la technique RT- PCR (Reverse transcription Polymerase Chain Reaction» pour la recherche du gène codant la protéine de la matrice M des virus d’influenza équins. L’objectif du présent article, est la vérification de la spécificité de deux méthodes RT-PCRq (= RT-PCR quantitative = RT-PCR en temps réel) et la RT-PCR conventionnelle ou classique dans le but de confirmer leur application correcte et la comparaison de  leur sensibilité analytique. Les résultats  de la sensibilité ont confirmé la haute sensibilité de la RT-PCR en temps réel détectant le virus porté à une dilution de 5.10-4 (Charge virale de 150DECP50/100μL), tandis que la PCR  classique, a révélé un seuil de détection au niveau de la dilution 5.10-3 (Charge virale de 1,5.103 DECP50/100μL). Vu sa haute sensibilité,  la RT-PCRq a été utilisée pour  tester les 24 prélèvements de chevaux  suspects atteints de la grippe équine  dont les résultats étaient négatifs.  Toutefois, l’amplification simultanée d’une séquence du gène Béta-actine spécifique des équidés augmente la fiabilité de nos résultats par un contrôle d’inhibition de la RT-PCRq

Etude de la diversité de Pectobacterium spp et des effets induits par les lipopolysaccharides chez les plantes

Les bactéries Pectobacterium sont classées parmi les agents pathogènes les plus importants économiquement pour la culture de la pomme de terre. Au cours des dernières années, une augmentation des maladies dues à ces bactéries a pu être observée. Le but de ce travail de thèse était d analyser certains aspects de la diversité liés aux Pectobacterium sp à savoir : (i) la diversité génétique liée aux régulateurs du pouvoir pathogène de la bactérie (ii) la diversité de virulence et d agressivité des souches de Pectobacterium vis-à-vis de leurs hôtes et (iii). Le rôle et la diversité des effets induits par le lipopolysaccharides (LPS), composants de la surface bactérienne de bactéries phytopathogène ou non phytopathogène. Ce travail de thèse souligne également le rôle potentiel que pourrait jouer ces molécules LPS dans le biocontrôledes Pectobacterium sp. Différentes expérimentations cellulaires et moléculaires allant de l identification de la bactérie à la compréhension des voies de signalisation ont été utilisées. Les résultats obtenus nous ont permis de montré, en premier lieu que, le séquençage du gène pmrA, gène connu pour être impliqué dans la régulation du pouvoir pathogène desPectobacterium, est un outil moléculaire complémentaire d identification de sous espèces de Pcc et pourrait être aussi un moyen efficace d évaluation de la diversité génétique intraspécifique. Dans un second temps, nous avons montré que les cultures cellulaires d Arabidopsis thaliana pourraient être un modèle végétal d évaluation de l agressivité des Pectobacterium. Ceci a été obtenu par quantification des cinétiques de trois paramètres associés à la pathogénie de ces bactéries à savoir : l activité des pectate-lyases, déterminant majeur du pouvoir pathogène des Pcc, la fuite des électrolytes, considérée comme un marqueur précoce de la mort cellulaire, et la mort cellulaire des cultures elle-même. Enfin nous avons également montré que les effets induits par les LPS chez les cellules d Arabidopsis thaliana sont dépendant du type bactérien. En effet Les résultats obtenus nous ont permis de mettre en évidence trois types de réponses différentes aux LPS en fonction de leur origine: les réponses identiques (régulation des flux d ions), des réponses communes mais présentant des intensités et de cinétiques différentes (production de ROS, induction de gènes de défense) et des réponses spécifiques (induction d une PCD, alcalinisation du milieu). Ces résultats indiquent que différentes voies de signalisation pourraient être activées chez Arabidopsis thaliana. Ils nous ont permis également de mieux comprendre l implication des LPS dans le biocontrôle contre les Pectobacterium sp.Pectobacterium are classified among the most economically important pathogens of culture of potato. Recently, an increase in diseases caused by these bacteria was observed. The work presented in this thesis has allowed highlighting some aspects on diversity associated with Pectobacterium sp namely: (i) genetic diversity related with the pathogenicity of thebacterium (ii) the diversity in virulence and aggressiveness of Pectobacterium strains on its hosts and (iii) the role and the diversity of effects induced by lipopolysaccharide (LPS), bacterial surface components of phytopathogenic and non- phytopathogenic bacteria. First, we have demonstrated that sequencing the pmrA gene, known to be involved in the regulation of pathogenicity of Pectobacterium, is an additional molecular tool for identification of Pectobacterium subspecies. Moreover, pmrA gene could be an effective tool for evaluation of genetic diversity within species. In a second time, we have showed that cell cultures of Arabidopsis thaliana, could be used as an alternative system to evaluate rapidly and efficiently the virulence of different Pectobacterium strains. This was achieved by quantification of different parameters associated to the pathogenesis of these bacteria namely, the activity of pectate lyases, major determinant of the pathogenicity of Pcc, the electrolyte leakage, considered an early marker of cell death and the cell death itself. Finally, our data further suggest the effects induced by LPS from different origin on Arabidopsis thaliana cells, could be different. Indeed, three different types of responses to LPS have been shown: the identical responses (regulation of ion flux), the common responses but having different intensities and kinetics (ROS production, induction defense genes) and specific responses (induction of PCD, alkalinization of the medium). These results indicate that different signaling pathways could be involved in Arabidopsis thaliana in response to LPS and allowed us to highlight the potential role of LPS in the biocontrol of Pectobacterium sp.PARIS11-SCD-Bib. électronique (914719901) / SudocSudocFranceF

Évaluation de la primo- vaccination contre le virus influenza équin (H3N8) au Maroc

The present work is to evaluate the humoral response provided by two injections of primary vaccination (day 0 and day 28) recombinant vaccine in 31 seronegative equids against equine influenza (9 horses, 16 donkeys and 6 mules), of which eight sets of blood samples were performed weekly. After centrifugation, the sera obtained were analyzed by the hemagglutination inhibition test. The results of the follow of the variation in antibodies showed that the primary vaccination of recombinant vaccine provides a protective humoral response against equine influenza for the three species studied. The protective antibody levels well above the range of vaccine protection adopted by several authors (1 / 20, 1 / 40).  Antibody production exceeds the title of 1 / 20 (> 4log2) in less than a week and to the maximum immunity from the 14 to 21 day of the first injection of the primary vaccination. The mules have increased antibody titers of 2 log2 after the second injection. For all equines tested the antibody titer remained high two months after primary vaccination (1/64 or (8 log 2)).Le présent travail consiste à  évaluer la réponse humorale procurée par deux injections de primo-vaccination  (J0 et J28) d’un vaccin recombinant  chez 31 équidés séronégatifs pour la grippe équine (9 chevaux, 16 ânes et 6 mulets), sur lesquels  huit séries de prélèvements sanguins ont été réalisés. Les sérums ainsi obtenus sont analysés par le test d’inhibition de l’hémagglutination. Les résultats de la cinétique d’anticorps anti-hémagglutinine (H3) ont montré  que la primo-vaccination par le vaccin recombinant confère une réponse humorale protectrice contre la grippe équine pour les trois espèces étudiées, les titres d’anticorps protecteurs dépassent largement l’intervalle de protection vaccinale (1/20, 1/40). La production d’anticorps dépasse le titre de 1/20 (> 4log2) en moins d’une  semaine et l’immunité est obtenue à  son maximum à partir des 14 à 21 jours de la première injection de la primo-vaccination. Les mulets ont augmenté leurs titres en anticorps de 2 log2 après la deuxième injection. Pour l’ensemble des équidés testés le titre d’anticorps est maintenu élevé deux mois après la primo- vaccination (1/64 ou (8 log2))

Investigation of Legionella Pneumophila in Hot Water Systems in Morocco

ABSTRACT Legionnaires' disease, the pneumonic form of legionellosis, usually is acquired by inhalation or aspiration of Legionella from contaminated environmental sources. Potable water is an important source of both nosocomial and community acquired Legionella infections. The species of Legionella are widely distributed in water environments. Legionella pneumophila is a relatively common cause of pneumonia. In patients with community-acquired pneumonia, the incidence ranges from 2 -15%. Legionella pneumophila serogroups were differently distributed according to heater type, water temperature, suggesting that Legionella strains may have a different sensibility and resistance to environmental factors and different ecologic niches. The aim of the present study was to determine the prevalence colonization of Legionella pneumophila in hot water distribution systems of hospitals and hotels and factories in Morocco and to examine the possible association with bacterial contamination and physic chemical parameters