Engineering of Three-Finger Fold Toxins Creates Ligands with Original Pharmacological Profiles for Muscarinic and Adrenergic Receptors

Protein engineering approaches are often a combination of rational design and directed evolution using display technologies. Here, we test “loop grafting,” a rational design method, on three-finger fold proteins. These small reticulated proteins have exceptional affinity and specificity for their diverse molecular targets, display protease-resistance, and are highly stable and poorly immunogenic. The wealth of structural knowledge makes them good candidates for protein engineering of new functionality. Our goal is to enhance the efficacy of these mini-proteins by modifying their pharmacological properties in order to extend their use in imaging, diagnostics and therapeutic applications. Using the interaction of three-finger fold toxins with muscarinic and adrenergic receptors as a model, chimeric toxins have been engineered by substituting loops on toxin MT7 by those from toxin MT1. The pharmacological impact of these grafts was examined using binding experiments on muscarinic receptors M1 and M4 and on the α1A-adrenoceptor. Some of the designed chimeric proteins have impressive gain of function on certain receptor subtypes achieving an original selectivity profile with high affinity for muscarinic receptor M1 and α1A-adrenoceptor. Structure-function analysis supported by crystallographic data for MT1 and two chimeras permits a molecular based interpretation of these gains and details the merits of this protein engineering technique. The results obtained shed light on how loop permutation can be used to design new three-finger proteins with original pharmacological profiles

Mise au point d'un milieu pour la cryopréservation de la semence équine et mécanismes de cryoprotection impliqués

Diplôme : Dr. d'UniversitéFor the success of artificial insemination of frozen semen, the composition of the freezing extender is a key factor. The objectives of the thesis were 1) to develop an extender to freeze stallion semen, ready to use and of optimized composition; 2) to acquire knowledge in gametes’ cryobiology. We showed that the cryoprotective ability of an extender based on native phosphocaseinate (INRA96®) supplemented with 2% egg yolk (EY) and 2.5% glycerol was significantly higher than the usual extender based on milk and EY (fertility/cycle of 71% versus 40%, p0.05, n=70cycles). These whole results permitted the development of an extender of standardized composition (patent FR2925917), sterile and marketable in a ready to use form (INRA-Freeze®, IMV-Technologies). In order to optimize the extender and to precisely identify the molecules implicated in the cryoprotection, the EY ,cryoprotectives ability of phospholipids liposomes mainly composed of EY phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine. The promising results we got (fertility/cycle of 55% with liposomes versus 68% with EY, p>0.05, n=80cycles) remain to be improved, in particular by increasing the insaturation degree of the phospholipids’ fatty acids of liposomes.Pour la réussite de l’insémination artificielle de semence congelée, la composition du milieu de congélation est un facteur clef. Les objectifs de la thèse ont été 1) de mettre au point un milieu pour congeler la semence équine, qui soit prêt à l’emploi et de composition optimisée ; 2) d’acquérir des connaissances en cryobiologie des gamètes. Nous avons démontré que le pouvoir cryoprotecteur d’un milieu à base de phosphocaséinate natif (l’INRA96®) supplémenté de 2% de jaune d’oeuf (JO) et de 2.5% de glycérol, était significativement supérieur à celui du milieu habituel, à base de lait et JO (71% de fertilité/cycle versus 40%, p0.05, n=70cycles). L’ensemble de ces résultats a permis la mise au point d’un milieu de formulation standardisée (brevet FR2925917), stérile et commercialisable prêt à l’emploi (INRAFreeze ®, IMV-Technologies). Dans le but d’optimiser le milieu et d’identifier précisément les molécules impliquées dans la cryoprotection, la démarche de fractionnement du JO a été poursuivie. Suite à des analyses in vitro, nous avons testé in vivo le pouvoir cryoprotecteur de liposomes de phospholipides composés essentiellement de phosphatidylcholine et de phosphatidyléthanolamine de JO. Les résultats encourageants obtenus (55% de fertilité/cycle avec les liposomes versus 68% avec le JO, p>0.05, n=80cycles) restent à améliorer, notamment en augmentant le degré d’insaturation des acides gras des phospholipides des liposomes

Mise au point d un milieu pour la cryopréservation de la semence équine et mécanismes de cryoprotection impliqués

Pour la réussite de l insémination artificielle de semence congelée, la composition du milieu de congélation est un facteur clef. Les objectifs de la thèse ont été 1) de mettre au point un milieu pour congeler la semence équine, qui soit prêt à l emploi et de composition optimisée ; 2) d acquérir des connaissances en cryobiologie des gamètes. Nous avons démontré que le pouvoir cryoprotecteur d un milieu à base de phosphocaséinate natif (l INRA96®) supplémenté de 2% de jaune d oeuf (JO) et de 2.5% de glycérol, était significativement supérieur à celui du milieu habituel, à base de lait et JO (71% de fertilité/cycle versus 40%, p0.05, n=70cycles). L ensemble de ces résultats a permis la mise au point d un milieu de formulation standardisée (brevet FR2925917), stérile et commercialisable prêt à l emploi (INRAFreeze ®, IMV-Technologies). Dans le but d optimiser le milieu et d identifier précisément les molécules impliquées dans la cryoprotection, la démarche de fractionnement du JO a été poursuivie. Suite à des analyses in vitro, nous avons testé in vivo le pouvoir cryoprotecteur de liposomes de phospholipides composés essentiellement de phosphatidylcholine et de phosphatidyléthanolamine de JO. Les résultats encourageants obtenus (55% de fertilité/cycle avec les liposomes versus 68% avec le JO, p>0.05, n=80cycles) restent à améliorer, notamment en augmentant le degré d insaturation des acides gras des phospholipides des liposomes.For the success of artificial insemination of frozen semen, the composition of the freezing extender is a key factor. The objectives of the thesis were 1) to develop an extender to freeze stallion semen, ready to use and of optimized composition; 2) to acquire knowledge in gametes cryobiology. We showed that the cryoprotective ability of an extender based on native phosphocaseinate (INRA96®) supplemented with 2% egg yolk (EY) and 2.5% glycerol was significantly higher than the usual extender based on milk and EY (fertility/cycle of 71% versus 40%, p0.05, n=70cycles). These whole results permitted the development of an extender of standardized composition (patent FR2925917), sterile and marketable in a ready to use form (INRA-Freeze®, IMV-Technologies). In order to optimize the extender and to precisely identify the molecules implicated in the cryoprotection, the EY ,cryoprotectives ability of phospholipids liposomes mainly composed of EY phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine. The promising results we got (fertility/cycle of 55% with liposomes versus 68% with EY, p>0.05, n=80cycles) remain to be improved, in particular by increasing the insaturation degree of the phospholipids fatty acids of liposomes.RENNES-Agrocampus-CRD (352382323) / SudocSudocFranceF

Terrain migraineux et syndrome post traumatique, chez des enfants de 5 à 15 ans admis aux urgences pédiatriques pour traumatisme crânien mineur

Propos : La migraine est la première cause de céphalée primaire de l'enfant. Le traumatisme crânien est l'étiologie la plus fréquente de troubles neurologiques, c'est un motif courant de consultation, dans 80 % des cas il est bénin. La céphalée est le symptôme dominant après un traumatisme crânien. OBJECTIF : Evaluer le terrain migraineux chez les enfants présentant un syndrome post traumatique. METHODE : Un questionnaire a été rempli au cours des consultations dans le service des urgences pédiatriques de Bordeaux chez les enfants âgés de 5 à 15 ans se présentant pour traumatisme crânien léger. RESULTATS : 94 enfants sur une période de 3 mois ont été inclus dans l'étude, 70 % de garçons et 30 % de filles, d'âge moyen 9 ans et 3 mois. 58,5 % des enfants se plaignent de céphalées post traumatiques avec un terrain personnel ou familial prédisposant, statistiquement significatif. Les nausées présentes chez 41,5 % des traumatisés et les vomissements chez 36 % des enfants n'ont pas de lien statistiquement significatif retrouvé avec le terrain migraineux Les troubles neurologiques post traumatiques sont fréquents (45 % de la population cible). Les antécédents personnels et familiaux de céphalées sont plus fréquents chez les enfants symptomatiques avec troubles neurologiques. Seulement 6 TDM cérébral ont été effectués, tous étaient normaux. CONCLUSION : Un terrain migraineux prédisposerait à des syndromes post traumatiques avec parfois des troubles neurologiques spectaculaires. L'évolution favorable et la normalité de l'examen clinique doivent rassurer le praticien et permettent de surseoir à une imagerie complémentaire. La prise en charge des syndromes post-traumatiques doit être similaire à celle d'une crise migraineuse en dehors des AINS. Nous préconisons de placer l'enfant au repos, il doit être rassuré et recevoir une dose de charge de paracétamol.BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocSudocFranceF

Mise au point d'un milieu pour la cryoconservation de la semence équine et mécanismes de cryoprotection impliqués

Actualités en élevage équinNational audienc

Method for preserving sperm and applications thereof

Demande de dépôt de brevet le 27 décembre 2007 Fr-07 09145. Demande Internationale n°PCT/FR2008/001822 du 24 décembre 200

Du nouveau pour la congélation de la semence d'étalon.

National audienc

Vers un milieu de congélation de la semence d'étalon de composition optimisée et définie

National audienc

Digital squamous cell carcinoma in dogs: epidemiological, histological and imunohistochemical study

International audienc