Escherichia coli produtora de toxina Shiga resistentes a antimicrobianos isoladas de ovinos

A presença de Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC) e resistente a beta-lactâmicos em ovinos saudáveis, representa um risco potencial para a saúde pública. O objetivo deste estudo foi caracterizar isolados STEC presentes em fezes de ovinos, quanto a produção de toxina, bem como a resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. No presente estudo, dentre os quarenta isolados, foi observada a predominância do subtipo Stx1 (22/40), seguido do subtipo Stx1+ Stx2 (11/40), enquanto o grupo menos prevalente foi Stx2 (7/40). A resistência fenotípica aos antibióticos beta-lactâmicos foi observada em 50% (20/40) das cepas analisadas, formando dois grupos, um com isolados resistentes e outro de isolados não resistentes. A citotoxicidade dos isolados não variou entre os grupos. Alguns isolados multirresistentes, além de possuírem essa característica, produziram quantidades significativas de toxinas. Isto conclui, que os mecanismos de resistencia antimicrobiana, por meio de beta lactamases estão presentes em STEC de ovinos, e que a citotoxicidade desses isolados é variável com relação a esta resistência.The presence of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and resistance to beta-lactams in healthy sheep represents a potential public health risk. This study aimed to characterize STEC isolates in sheep feces for toxin production and resistance to beta lactam antibiotics. In the present study, among the 40 isolates, we found a predominance of subtype Stx1 (22/40), followed by subtype Stx1 + Stx2 (11/40), while the less prevalent group was Stx2 (7/40). Also, we found phenotypical resistance to beta-lactam antibiotics in 50% (20/40) of the strains analyzed, forming two groups, one with resistant isolates and the other with non-resistant isolates. The cytotoxicity of the isolates did not vary among the groups. In addition to having this characteristic, some multiresistant isolates produced significant amounts of toxins. This leads to the conclusion that the mechanisms of antimicrobial resistance via beta lactamases are present in sheep STEC and that the cytotoxicity of those isolates is variable regarding such resistance

Antimicrobial resistance of Shiga toxin‐producing Escherichia coli isolated from sheep

The presence of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and resistance to beta-lactams in healthy sheep represents a potential public health risk. This study aimed to characterize STEC isolates in sheep feces for toxin production and resistance to beta lactam antibiotics. In the present study, among the 40 isolates, we found a predominance of subtype Stx1 (22/40), followed by subtype Stx1 + Stx2 (11/40), while the less prevalent group was Stx2 (7/40). Also, we found phenotypical resistance to beta-lactam antibiotics in 50% (20/40) of the strains analyzed, forming two groups, one with resistant isolates and the other with non-resistant isolates. The cytotoxicity of the isolates did not vary among the groups. In addition to having this characteristic, some multiresistant isolates produced significant amounts of toxins. This leads to the conclusion that the mechanisms of antimicrobial resistance via beta lactamases are present in sheep STEC and that the cytotoxicity of those isolates is variable regarding such resistance

Effect of soybean peptidase inhibitors in the pattern of gene expression and gut enzyme activity of larvae of Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae)

Diante da busca por abordagens mais sustentáveis para o controle de insetos, os inibidores de peptidases de plantas surgem como uma ferramenta promissora para a proteção de culturas via obtenção de plantas transgênicas. Efeitos nocivos da ingestão de inibidores de peptidases de soja (IPS) sobre o desenvolvimento de Diatraea saccharalis já foram reportados em trabalhos anteriores, entretanto, esses efeitos não foram estudados em nível molecular para essa espécie. Esse trabalho teve como objetivos identificar e analisar a expressão gênica e a atividade de serino peptidases intestinais de D. saccharalis em resposta à ingestão de um concentrado ativo de inibidores de peptidases de soja, relacionando essas informações com a presença ou não de algum mecanismo adaptativo desse inseto em resposta à ingestão desses inibidores. Para isso, foi obtido o transcriptoma intestinal de lagartas de D. saccharalis no quinto ínstar do desenvolvimento, submetidas à ingestão crônica de IPS. Em seguida foram identificadas as sequências correspondentes a serino peptidases do tipo tripsinas e quimotripsinas nesse transcriptoma, as quais foram utilizadas para o estudo da expressão gênica relativa por RT-PCR quantitativo, em resposta à ingestão aguda (por 24 e 48 horas) e crônica e de 0,5% (m/v) de um concentrado ativo de IPS por lagartas de D. saccharalis no terceiro e no quinto ínstares do desenvolvimento larval. As mesmas sequências foram utilizadas para a proposição de filogenias, sendo comparadas inclusive com sequências de serino peptidases de Spodoptera frugiperda identificadas em outro estudo paralelo. Ensaios de atividade tríptica e quimotríptica foram realizados utilizando substratos específicos (BApNA e SApNA) para determinar o efeito da ingestão de IPS sobre a atividade enzimática e finalmente, a integridade e a atividade inibitória do IPS foram analisadas após sua passagem pelo trato digestório das lagartas. Os resultados obtidos permitiram concluir que, nas condições experimentais empregadas nesse estudo, as lagartas de D. saccharalis não foram capazes de modular a expressão gênica das serino peptidases em resposta à ingestão crônica ou aguda de IPS. Os resultados de atividade tríptica e quimotríptica em função da ingestão de IPS podem sugerir um sinergismo na ação dessas enzimas em lagartas do quinto instar. Não foram detectadas diferenças na atividade de tripsinas e quimotripsinas em lagartas do terceiro ínstar em função da ingestão de IPS. A separação eletroforética das proteínas das fezes de lagartas permitiu a visualização de uma banda com massa molecular em torno de 20 kDa possivelmente correspondente ao inibidor do tipo Kunitz presente em soja que, juntamente com os dados de atividade antitríptica das fezes, indicam que D. saccharalis não é capaz de hidrolisar esse inibidor como um mecanismo de adaptação à sua presença na dieta.Given the importance of search for more sustainable approaches for pest control, plant peptidases inhibitors emerge as a promising tool for the protection of crops by obtaining transgenic plants. Harmful effects of soybean peptidases inhibitors (SPI) intake by Diatraea saccharalis on its development were already reported in previous studies, however, these effects have not been studied at the molecular level for this specie. This study aimed to identify and analyze the gene expression and the gut serine peptidases activity of D. saccharalis in response to the intake of an active extract of soybean peptidases inhibitors. These informations were related to the presence or absence of some adaptive mechanism of this insect in response to these inhibitors. The gut transcriptome of larvae of D. saccharalis in the fifth developmental instar was obtained, undergoing chronic intake of IPS. Then, sequences of serino peptidases like trypsin and chymotrypsin were identified and used for gene expression studies on a real-time PCR in response to acute (for 24 and 48 hours) and chronic intake of 0.5 % (w/v) of SPI active extract by larvae of D. saccharalis in the third and fifth instars of larval development. The same sequences were used to propose phylogenies, including comparisons with sequences of Spodoptera frugiperda serine peptidases identified in another parallel study. Tryptic and chymotryptic activity assays were performed using specific substrates (BApNA and SApNA) to determine the effect of the SPI intake on enzyme activity and finally, the integrity and the inhibitory activity of the SPI were analyzed after passing through the digestive tract of caterpillars. The results showed that under the experimental conditions employed in this study, the larvae of D. saccharalis were not able to modulate the gene expression of serine peptidases in response to acute or chronic SPI intake. The results of tryptic and chymotryptic activity due to the SPI intake can suggest a synergism in the action of these enzymes in larvae of the fifth developmental instar. SPI intake did not cause differences in enzymatic activity of third instar larvae. Electrophoretic separation of proteins from the feces of caterpillars enabled visualization of a band with a molecular mass around 20 kDa possibly corresponding to the Kunitz inhibitor present in soybean. The antitryptic activity of the feces indicates that D. saccharalis is not able to hydrolyze soybean peptidases inhibitor as a mechanism of adaptation to their presence in the diet

Spatial and temporal myostatin gene expression during chicken (Gallus gallus) embryonic development

O padrão de expressão temporal e espacial do gene da miostatina foi investigado em embriões de galinha em 12 diferentes estádios do desenvolvimento e também nos tecidos hepático e muscular esquelético de uma ave jovem com a utilização das técnicas de RT-PCR (transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase) e hibridização in situ. Ovos recém postos foram incubados e embriões de galinha foram coletados e estadiados de acordo com sua fase de desenvolvimento. Amostras de RNA total foram extraídas dos embriões e tecidos mencionados acima e a partir destas foi realizada a síntese de cDNA, o qual foi utilizado nas reações de PCR com "primers" específicos a um fragmento do gene da miostatina de galinha. Embriões nos estádios HH20 e HH24 foram submetidos à hibridização in situ com sondas de RNA senso e antisenso específicas à miostatina, digoxigenina-marcadas. Visando uma determinação precisa do local de expressão da miostatina, também foram realizados cortes histológicos nos embriões hibridizados. Os resultados da RT-PCR revelaram que houve expressão do gene da miostatina em todos os estádios estudados, desde HH1 (ovo recém posto) até HH26 (5 dias) e também no tecido muscular esquelético de um frango com 14 dias, não sendo detectada expressão deste gene no tecido hepático. Além disso, foi possível identificar por esta técnica a presença de um transcrito alternativo deste gene. Análises em programas de computador específicos para este fim indicaram que a tradução deste produto alternativo geraria uma proteína truncada pela adição de um códon de terminação precoce na posição 129 da cadeia de aminoácidos. Para determinar as prováveis causas da presença deste transcrito alternativo, o intron 1, situado entre os sítios de ancoragem dos "primers" utilizados, foi sequenciado e a sua sequência foi analisada e submetida ao GenBank (gi|9739164). Nenhuma alteração foi encontrada nos sítios de processamento do intron 1, sendo ) mantido o padrão GT-AG. As análises de hibridização in situ permitiram a visualização de sinais da expressão da miostatina nos somitos dos embriões hibridizados. Embriões mais jovens (HH20) apresentaram um sinal menos intenso quando comparados com embriões mais desenvolvidos (HH24) e este sinal iniciou-se na região distal com relação ao complexo tubo neural/notocorda, abrangendo uma porção maior dos somitos em embriões mais desenvolvidos. Cortes histológicos transversais dos embriões hibridizados demonstraram que a expressão da miostatina ocorre no miótomo dos somitosThe temporal and spatial myostatin gene expression patterns were studied in chicken embryos at 12 different developmental stages and in hepatic and muscular tissues of a young chicken by RT -PCR (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction) and by whole mount in situ hybridization techniques. Fertilized eggs were incubated, and the chicken embryos were collected and assorted according to their developmental stage. Total RNA samples were extracted from the embryos and the above mentioned tissues. These samples were used as templates for cDNA synthesis, which was applied in PCR reactions with specific primers for chicken myostatin. Stage HH20 and HH24 embryos were submitted to whole mount in situ hybridization with myostatin specific sense and antisense DIG-Iabelled RNA probes. To accurately localize the myostatin expression region, embryos were submitted to histological sections. The RT-PCR results showed that myostatin was expressed in all stages studied, from HH1 (unincubated embryos) to HH26 (5-day-old embryos) as well as in skeletal muscle tissue from a 14-day-old chicken. Myostatin expresion was not detected in hepatic tissue. Moreover, this technique allowed the detection of an alternative transcript of this gene. Analyses using specific softwares indicate that translation of this alternative product would lead to a truncated protein caused by a precocious terminator codon at position 129 of the aminoacid chain. With the purpose of detecting the possible causes leading to the formation of the alternative product, intron 1, situated between the primer recognition sites, was sequenced and submitted to the GenBank (giI9739164). Alterations were not found at intron 1 splicing sites, which followed the GT-AG rule. With whole mount in situ hybridization analyses it was possible to visualize signs of myostatin expression in chicken somites. The younger embryos (HH20) presented a less intense signal than more developed embryos (HH24), and this signal began at the most distaI region in relation to the neural tube/notochord complex. Analyses of the transversal histological sections of the hybridizated embryos showed that myostatin expression occurs in the myotomal region of the somit

Seleção de descritores vegetativos para caracterização de acessos de guariroba (Syagrus oleracea (Mart.) Becc.) Vegetative describers selection for accesses characterization of Syagrus oleracea palm

O presente trabalho teve como objetivo selecionar descritores morfológicos vegetativos e determinar sua importância relativa na caracterização de acessos de guariroba, assim como verificar a associação entre os descritores descartados e os demais. Foram avaliados 18 descritores morfológicos, sendo 8 relativos à folha e 10 ao estipe, em 36 acessos de guariroba do Estado de Goiás. Os dados foram submetidos à análise de variáveis canônicas, e o descarte dos descritores foi realizado tendo como base no autovalor, o qual não excedeu 0,70. Foram descartados 55% dos descritores, sendo 5 relativos à folha e 5 ao estipe. O descarte destes descritores não ocasionou perda de informações, por apresentaram correlações significativas com os descritores selecionados. A contribuição relativa dos descritores selecionados foi semelhante para A7A, ENI7180, DFBF, D0, CPC e DPC, sendo os descritores ENI70 e ENS70 os que apresentaram as menores contribuições.<br>The present paper had the purpose of selecting morphological vegetative descriptors and to determine their relative importance in the characterization of guariroba accesses, as well as to verify the association between discarded and accepted descriptors.. Eighteen morphological descriptors, of which 8 relative to the leaf and 10 to the stipe, in 36 guariroba accessions in the State of Goiás were evaluated . The discarded descriptors did not cause loss of information, as they presented significant correlations with the descriptors that were accepted. The relative contribution of the selected descriptors was similar for A7A, ENI7180, DFBF, D0, CPC and DPC, with descriptors ENI70 and ENS70 having the lowest contribution