Impact of Lactic Acid Bacteria on Dendritic Cells from Allergic Patients in an Experimental Model of Intestinal Epithelium

Lactic acid bacteria (LAB) are Gram positive nonpathogenic commensal organisms present in human gastrointestinal tract. In vivo, LAB are separated from antigen-presenting cells such as dendritic cells (DC) by the intestinal epithelial barrier. In this study, the impact of one LAB strain (Lactobacillus casei ATCC393) on human monocyte-derived DC from allergic and healthy donors was assessed by using a polarized epithelium model. Confocal and flow cytometer analyses showed that immature DC efficiently captured FITC-labelled L. casei through the epithelial layer. After interaction with L. casei, DC acquired a partial maturation status (i.e., CD86 and CD54 increase) and increased their interleukin (IL)-10 and IL-12 production. Interestingly, after activation by L. casei in the presence of experimental epithelium, DC from allergic patients instructed autologous naïve CD4(+) T cells to produce more interferon-γ than without the epithelium. Thus by modulating human DC reactivity, LAB and intestinal epithelium might modify T cell immune response and regulate the development of allergic reaction

In vivo depletion of lung CD11c+ dendritic cells during allergen challenge abrogates the characteristic features of asthma

Although dendritic cells (DCs) play an important role in sensitization to inhaled allergens, their function in ongoing T helper (Th)2 cell–mediated eosinophilic airway inflammation underlying bronchial asthma is currently unknown. Here, we show in an ovalbumin (OVA)-driven murine asthma model that airway DCs acquire a mature phenotype and interact with CD4+ T cells within sites of peribronchial and perivascular inflammation. To study whether DCs contributed to inflammation, we depleted DCs from the airways of CD11c-diphtheria toxin (DT) receptor transgenic mice during the OVA aerosol challenge. Airway administration of DT depleted CD11c+ DCs and alveolar macrophages and abolished the characteristic features of asthma, including eosinophilic inflammation, goblet cell hyperplasia, and bronchial hyperreactivity. In the absence of CD11c+ cells, endogenous or adoptively transferred CD4+ Th2 cells did not produce interleukin (IL)-4, IL-5, and IL-13 in response to OVA aerosol. In CD11c-depleted mice, eosinophilic inflammation and Th2 cytokine secretion were restored by adoptive transfer of CD11c+ DCs, but not alveolar macrophages. These findings identify lung DCs as key proinflammatory cells that are necessary and sufficient for Th2 cell stimulation during ongoing airway inflammation

VEB-1 in Achromobacter xylosoxidans from Cystic Fibrosis Patient, France

Multidrug-resistant Achromobacter xylosoxidans was recovered from the sputum of a patient with cystic fibrosis. The VEB-1 extended-spectrum β-lactamase was detected on a class 1 integron. This first report of a VEB-1–producing isolate in this population requires further investigation to determine its distribution

Régulation de la réaction allergique pulmonaire (inhibition par un BCG recombinant dans un modèle murin et déficit de la réponse des cellules Natural Killer de patients allergiques à la chimiokine CCL18)

L'augmentation importante de la prévalence des pathologies allergiques dans les pays industrialisées en fait l'une des préoccupations de santé publique. Une diminution de la stimulation du système immunitaire par des agents microbiens est l'une des hypothèses avancées pour expliquer ce phénomène. Cette hypothèse dite de l'hygiène postule que, au cours de la petite enfance, ces agents microbiens permettraient l'établissement de mécanismes de régulation aptes à limiter les réponses immunes délétères comme celles mises en jeu dans les pathologies allergiques ou auto-immunes. Par exemple des mycobactéries comme le Bacille Calmette Guérin (BCG) et Mycobacterium vaccae sont capables de moduler la réaction allergique pulmonaire dans des modèles murins. Si tous les mécanismes d'action de ces mycobactéries ne sont pas connus, il semble néanmoins qu'elles agissent à la fois par l'induction d'IFN- et de populations régulatrices. Au-delà des populations T régulatrices classiques, d'autres cellules comme les cellules Natural Killer (NK) pourraient être impliquées dans la régulation des pathologies allergiques. En effet, bien qu'essentiellement connues pour leurs propriétés anti-virales, anti-bactériennes et anti-tumorales, les cellules NK sécrètent des cytokines (IFN- , IL-5, IL-13) et chimiokines leur permettant de réguler la réponse lymphocytaire. De plus chez le patient asthmatique, la proportion de cellules NK circulantes produisant des cytokines Th2 (IL-5 et IL-13) est augmentée par rapport aux sujets sains. Ces propriétés et leur présence au niveau du poumon font des cellules NK des régulateurs potentiels de la réaction asthmatique. Cependant leur implication dans la pathologie allergique reste encore largement méconnue. Le but de notre travail était d'étudier 2 aspects de la régulation de la réaction allergique. Dans un premier temps nous avons évalué la régulation de la réaction allergique pulmonaire par un BCG recombinant produisant de l'IL-18 (BCG-IL-18) dans un modèle murin. Nous avons caractérisé phénotypiquement les populations T régulatrices et NK dans ce modèle d'inhibition. Dans un deuxième temps nous avons comparé la réponse aux chimiokines des cellules NK de sujets allergiques et non allergiques ; les chimiokines participant à la régulation des réactions inflammatoires. Dans une première partie, nous avons étudié si la production d'IL-18 (cytokine participant à la production d'IFN- ) par un BCG recombinant pouvait améliorer l'effet du BCG sur la réaction allergique pulmonaire dans un modèle murin. Dans le cadre d'un protocole préventif, les BCG et BCG-IL-18 ont été administrés par voie systémique au cours de la sensibilisation et les différents paramètres de la réaction allergique ont été évalués 24 (protocole primaire) et 64 (protocole secondaire) jours après la première sensibilisation. Les BCG-IL-18 et BCG inhibent de façon similaire, aussi bien dans les protocoles primaire et secondaire, l'hyperréactivité bronchique (HRB), la production de mucus, l'éosinophilie pulmonaire et la production de cytokines Th2 au niveau du lavage bronchoalvéolaire (LBA). Dans le cadre d'un protocole curatif, les BCG et BCG-IL-18 ont été administrés localement après la phase de sensibilisation. Leurs effets ont été évalués 3 semaines et 6 semaines après la phase de sensibilisation. Dans les deux cas, seul le BCG-IL-18 diminue significativement l'HRB, l'éosinophilie pulmonaire, la production d'IL-5 au niveau du LBA et la production de mucus développées par les souris sensibilisées. Le traitement par le BCG ou le BCG-IL-18 augmente le nombre, l'activation (CD86, CD69) et la maturation (CD11b, CD27) des cellules NK au niveau du poumon et des ganglions médiastinaux. Seul le BCG-IL-18 induit une augmentation du nombre de cellules T régulatrices CD4+CD25high FoxP3+ au niveau du poumon. Nous avons ainsi montré qu'un BCG-IL-18 administré localement pouvait inhiber à long terme la réaction allergique pulmonaire de manière plus efficace qu'un BCG. Cet agent induit des modifications (recrutement, activation) des cellules NK et T régulatrices locales pouvant participer à son effet inhibiteur. Dans une deuxième partie, nous avons évalué la réponse des cellules NK de sujets allergiques vis-à-vis de chimiokines, et plus particulièrement de CCL18, préférentiellement produite au niveau du poumon et impliquée dans la pathologie allergique. Nos travaux ont montré que CCL18 pouvait attirer in vitro les cellules NK mais uniquement chez les patients non allergiques. Ce défaut de migration des cellules NK chez les patients allergiques semble spécifique de CCL18 puisque leur migration par rapport à CXCL10, CXCL12, CCL22 et CCL25 est significative par rapport au témoin négatif CCL11 et que l'expression des récepteurs correspondant (CXCR3, CXCR4, CCR4, CCR9) n'est pas modifiée chez les patients allergiques comparativement aux sujets sains. CCL18 est également capable d'augmenter le potentiel cytotoxique des cellules NK chez les patients non allergiques mais reste sans effet sur leur prolifération. En résumé, ces travaux ont permis de montrer que seul le BCG-IL-18 pouvait inhiber à long terme la réaction allergique pulmonaire dans le cadre d'un protocole curatif. Ce modèle d'inhibition constitue un outil d'intérêt pour l'étude des mécanismes impliqués dans la résolution de la réaction allergique pulmonaire comme l'activation des cellules NK et l'induction ou le recrutement de populations T régulatrices. Nous avons également montré une réponse différentielle des cellules NK d'allergiques et de non allergiques vis-à-vis de CCL18, suggérant un dysfonctionnement des cellules NK dans la pathologie allergique. Des expériences complémentaires permettront de préciser leur implicationLILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

On-chips microelectrophoresis for the study of ex vivo NHEJ

info:eu-repo/semantics/nonPublishe

Rôle des cellules Natural Killer dans l'asthme allergique

Les maladies allergiques sont en constante augmentation tant en prévalence qu en gravité. Les mécanismes physiopathologiques connus impliquent l induction d une réponse Th2 par les cellules dendritiques, conduisant à une production d IgE et une inflammation. L immunité innée a récemment été mise en avant dans le contrôle de l immunité adaptative, spécifique de l antigène. Cependant, le rôle des cellules Natural Killer (NK), cellules de l immunité innée connues essentiellement pour leurs fonctions anti-tumorales et anti-microbiennes, est encore inconnu dans la pathologie allergique. Néanmoins, quelques études ont montré une modification de certaines sous-populations de cellules NK chez les patients asthmatiques allergiques. Le but général du travail de thèse était d étudier le rôle des cellules NK dans l asthme allergique. Dans un premier temps, les variations quantitatives et qualitatives des cellules NK, ainsi que l effet de leur déplétion ont été évalués dans l asthme expérimental. Dans un deuxième temps, l effet de CCL18, chimiokine impliquée dans l asthme allergique, a été étudié sur les cellules NK de sujets non allergiques et de sujets allergiques. Chez des souris BALB/cByJ sensibilisées et provoquées à l ovalbulmine (OVA), une augmentation du nombre de précurseurs de cellules NK, mais également du nombre de cellules NK, et plus particulièrement des cellules NK immatures, a été observée dans les ganglions médiastinaux (ganglions drainant les poumons). Celle-ci était accompagnée d une augmentation du pourcentage de cellules NK ayant incorporé du BrdU. Outre ces variations quantitatives, une activation des cellules NK a été constatée. Dans les poumons, le nombre total de cellules NK n était pas modifié. Néanmoins, une diminution significative du nombre de cellules NK les plus matures a été observée. De plus, comme dans les ganglions médiastinaux, les cellules NK pulmonaires étaient activées. L effet de la déplétion des cellules NK par administration de l anticorps anti-ASGM1 avant les provocations allergéniques a ensuite été évalué sur l inflammation pulmonaire allergique. La déplétion en cellules NK (73%) a significativement diminué l éosinophilie dans les lavages bronchoalvéolaires, sans affecter pour autant l hyperréactivité bronchique et les taux sériques d immunoglobulines spécifiques de l OVA (IgE, IgG2a et IgG1). Chez des souris C57BL/6 sensibilisées et provoquées à l OVA, aucune modification du nombre de cellules NK et de la distribution des sous-populations n a été observée dans les ganglions médiastinaux, contrastant ainsi avec le modèle précédent. D un point de vue phénotypique, les cellules NK étaient activées et davantage de cellules NK exprimaient le CD107a à la membrane témoignant ainsi d une dégranulation. Dans les poumons, le pourcentage de cellules NK les plus matures était diminué chez les souris sensibilisées et provoquées à l OVA. Les cellules NK 4 pulmonaires étaient également activées et l expression membranaire du CD127 était augmentée. Le pourcentage de cellules NK exprimant l IFN- ou le granzyme B était diminué, alors que celui de cellulles NK exprimant le CD117 ou le CD107a était augmenté. Par conséquent, l ensemble de nos résultats montre que les cellules NK présentent des modifications phénotypiques et fonctionnelles au cours de l asthme expérimental. CCL18 est une chimiokine produite préférentiellement au niveau du poumon. Dans le laboratoire, il a été montré que la production de CCL18 était augmentée chez les patients asthmatiques, et qu elle recrutait les lymphocytes Th2 et les basophiles, suggérant le rôle de cette chimiokine dans l asthme allergique. Notre objectif était d évaluer la réponse des cellules NK isolées du sang périphérique de sujets allergiques vis-à-vis de CCL18 et de la comparer à celle de sujets non allergiques. Le récepteur de CCL18 étant encore inconnu, son expression par les cellules NK a été analysée par la fixation de CCL18 biotinylée. L étude en cytométrie en flux a révélé que des cellules NK de donneurs allergiques et non allergiques exprimaient un récepteur pour CCL18. De plus, les cellules NK de sujets allergiques et non allergiques migraient en réponse à CCL18, et ce dans une voie dépendante des protéines G. L attraction des cellules NK par CCL18 était dépendante du donneur, mais indépendante du statut allergique. Aucune attraction préférentielle d une sous-population de cellules NK (CD56high ou CD56low) par CCL18 n a été mise en évidence. CCL18 était également capable de stimuler la cytotoxicité des cellules NK de sujets allergiques et de donneurs non allergiques vis-à-vis des cellules cibles Jurkat. Les réponses étaient variables en fonction du donneur, mais une fois encore étaient indépendantes du statut allergique. Enfin, CCL18 n induisait pas de production de cytokines (IFN- ) par les cellules NK de sujets allergiques et non allergiques. Au vu de l ensemble de ces résultats, nous pouvons conclure que les cellules NK de sujets allergiques sont attirées et activées par CCL18 de façon similaire aux cellules NK de sujets non allergiques. En résumé, ces travaux ont permis de montrer que, dans un modèle murin d asthme allergique, les cellules NK s accumulent dans les ganglions médiastinaux et semblent réguler l éosinophilie pulmonaire. Nous avons également montré que les cellules NK de sujets allergiques ne présentaient pas de dysfonctionnement dans la réponse vis-à-vis de CCL18 comparativement aux sujets non-allergiques.LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Une congrégation diocésaine pendant la Première Guerre mondiale. Les Filles de l’Enfant Jésus

Malgré les lois laïques qui ont eu des conséquences dramatiques pour beaucoup de congrégations, et singulièrement les congrégations enseignantes, les religieuses sont encore très nombreuses en France en 1914, vouées aux soins des vieillards, des malades ou des orphelins. Parmi elles, il y a des congrégations liées à des ordres religieux comme les dominicaines ; d’autres ont un recrutement et un développement national et international, comme les filles de la Charité, ou au contraire uniquement..

Influence of food plant extracts on non-homologous end-joining DNA double-strand breaks repair by on-chips microelectrophoresis

info:eu-repo/semantics/publishe

Rôle des récepteurs nucléaires PPARa et Rev-erba dans le métabolisme des lipides et lipoprotéines, et le développement de l'athérosclérose

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

On-chips microelectrophoresis for the study of in vitro non-homologous end-joining DNA double-strand break repair

Oligomerization of linearized plasmids by nuclear proteins extracts, a recognized measure of nonhomologous end-joining (NHEJ) repair capacity, is typically assessed through agarose gel electrophoresis, a labor-intensive procedure. In the current study, a more convenient NHEJ assay was developed using microchips that allow scaled-down separation and quantification. This microchip method allows a considerable reduction in sample amount and analysis time with similar costs and comparable or slightly better precision. Data obtained with quercetin and wortmannin show that the method can be applied to the screening of food components and natural products for positive and negative modulators of NHEJ, potential chemopreventive and indirect genotoxic compounds, respectively. © 2012 Elsevier Inc. All rights reserved.SCOPUS: ar.jinfo:eu-repo/semantics/publishedhttp://dx.doi.org/10.1016/j.ab.2012.03.00