Efeitos antineoplásicos do extrato bruto e de diferentes frações de Uncaria tomentosa diante do tumor Walker-256

Orientadora : Profª Drª Alexandra AccoDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 30/07/2012Bibliografia: fls. 46-50Resumo: Objetivos: Este trabalho foi delineado para comparar os efeitos antineoplásicos de um extrato bruto hidroetanólico (BHE) de Uncaria tomentosa (UT) com os de duas frações dele derivadas: uma rica em alcaloides oxindólicos pentacíclicos (POA), preparada com clorofórmio (fração CHCl3); e outra rica em substâncias antioxidantes, preparada com n-butanol (fração BuOH). O modelo escolhido para o estudo foi o tumor sólido Walker-256 em ratos. Materiais e Métodos: Um extrato BHE de UT foi fracionado a fim de isolar os POA numa das frações (CHCl3) e deixar a maioria das substâncias antioxidantes em outra fração (BuOH). Inocularam-se células da linhagem Walker-256 no membro pélvico direito de ratos Wistar machos, que foram em seguida tratados diariamente por 14 dias mediante gavagem com o extrato BHE (50 mg.kg-1), suas frações (segundo o rendimento do processo de fracionamento) ou veículo (Controle, grupo C). Para alguns parâmetros foi adicionado um grupo basal (B), com indivíduos não portadores de tumor que apenas receberam veículo. Ao fim do tratamento foram avaliados os seguintes parâmetros: (a) massa e volume tumoral; (b) concentrações plasmáticas de ureia, alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST); (c) parâmetros de estresse oxidativo, especificamente a atividade da catalase (Cat), superóxido dismutase (SOD), peroxidação lipídica (LPO), glutationa-S-transferase (GST) e glutationa reduzida (GSH); (d) aferição de TNF-? em homogenatos hepático e tumoral; (e) parâmetros metabólicos aferidos mediante perfusão hepática e (f) análises de sobrevivência. Resultados e Discussão: Tanto o extrato BHE quanto sua fração BuOH reduziram extensamente o peso e volume tumoral, o que se deveu em parte à modulação da UT sobre o estresse oxidativo: a maioria dos sistemas enzimáticos antioxidantes aferidos no fígado foi reforçada, enquanto estes mesmos sistemas reduziram sua atividade no tumor. Os níveis plasmáticos da AST também foram reduzidos por estes tratamentos, indicando preservação da integridade celular. Os resultados da mensuração do TNF-? em homogenatos de fígado indicam um maior efeito antiinflamatório advindo do tratamento com o extrato BHE em comparação ao apresentado por sua fração BuOH. A fração CHCl3 foi notavelmente ineficaz em todas as aferições. Os parâmetros de perfusão hepática mostraram diferenças metabólicas entre os grupos portadores de tumor e os grupos basais, porém não foram encontradas diferenças metabólicas expressivas entre os grupos portadores de tumor, tanto tratados quanto controle. Tanto o extrato BHE quanto sua fração BuOH incrementaram o tempo de sobrevivência dos animais portadores de tumor, em comparação ao grupo Controle. Conclusões: Estes dados constituem uma demonstração in vivo da importância da modulação do estresse oxidativo como parte da atividade antineoplásica da UT, bem como ressaltam a falta de atividade dos POA isolados sobre a linhagem tumoral Walker-256. É provável que estes efeitos resultem de uma combinação sinérgica de substâncias presentes no extrato BHE de UT. Tais componentes também apresentaram certo grau de seletividade tecidual quando comparados os efeitos no fígado e no tumor, favorecendo a atividade antineoplásica.Abstract: Aim of the study: This study aimed to compare the anti-neoplastic effects of an Uncaria tomentosa (UT) brute hydroethanolic (BHE) extract with those of two fractions derived from it: one rich in pentacyclic oxindole alkaloids (POA), prepared with chloroform (CHCl3 fraction), and another one rich in antioxidant substances, prepared with n-butanol (BuOH). The chosen model was the Walker-256 solid tumour in rats. Materials and Methods: A BHE extract of UT was fractionated, isolating the POA in one fraction (CHCl3) and most antioxidant substances in the other fraction (BuOH). Walker-256 cells were subcutaneously inoculated in the right pelvic limb of male Wistar rats. Daily gavage with the BHE extract (50 mg kg-1), its fractions (as per the yield of the fractioning process) or saline solution (Control, Group C) was subsequently initiated, until 14 days afterwards. For some parameters, a baseline (B) group was added, consisting of non-tumour-bearing rats that received vehicle. At the end of treatment the following parameters were evaluated: (a) tumour volume and mass; (b) plasmatic concentration of urea, alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST); (c) oxidative stress parameters: activity of catalase (Cat), superoxide dismutase (SOD), lipid peroxidation (LPO), glutathione-S-transferase (GST) and reduced glutathione (GSH); (d) measurement of TNF-? in hepatic and tumour homogenates; (e) metabolic parameters assessed by liver perfusion, and (f) survival analyses. Results: Both BHE extract and its BuOH fraction successfully reduced tumour weight and volume, which was in part due to oxidative stress modulation by UT as most anti-oxidant enzymatic systems assessed in the liver were enhanced as a result of these treatments, while the same systems were decreased in the tumour. Plasmatic levels of AST were also reduced by these treatments, indicating a preservation of cellular integrity. TNF-? results in hepatic homogenates indicate a greater anti-inflammatory effect of the BHE extract when compared to that presented by its BuOH fraction. The CHCl3 fraction was remarkably ineffective. Liver perfusion showed metabolic differences between baseline and tumour-bearing rats. However, the treatment with UT did not influence the metabolism. Both the BHE extract and its BuOH fraction increased the survival time of the tumour-bearing animals, as compared to control. Conclusions: This data represents an in vivo demonstration of the importance of the modulation of oxidative stress as part of the anti-neoplastic activity of UT, as well as constitute evidence of the lack of activity of the isolated POAs in the primary tumour of the lineage Walker-256. It is probable that these effects are result of a synergic combination of substances. Some degree of locale selectivity was observed when liver and tumour tissues were compared, contributing to the UT antineoplastic effect

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