Estandarización de electroforesis unicelular en células epiteliales de la cavidad oral

56 p.La electroforesis unicelular o popularmente llamado ensayo cometa es una metodología desarrollada para detectar el daño del ADN en cualquier tipo celular. Su nombre “ensayo cometa” se debe a la visualización del núcleo celular como una estructura similar a un cometa, si el ADN se encuentra dañado es posible la visualización por microscopia. Durante los años su metodología ha sido sometida a múltiples modificaciones con el objetivo de optimizar su visualización. Para ello, las condiciones deben ser estandarizadas en el laboratorio con el propósito de desarrollar la técnica sin problemas, es por ello que en el presente trabajo experimental se basó en la puesta a punto de dicha metodología en el laboratorio de Patología Oral, de la Universidad de Talca siguiendo un protocolo “estándar” para trabajar con células epiteliales orales, por su fácil manipulación y obtención de la muestra. Con el fin de realizar las posteriores modificaciones correspondientes y diseñar un protocolo estándar de electroforesis unicelular en células epiteliales orales, que permita ser empleado en investigaciones futuras

Purificacion y caracterizacion parcial de una sustancia antimicrobiana sintetizada por Staphylococcus aureus con actividad antagonica sobre Listeria monocytogenes

57 p.Staphylococcus aureus, un reconocido patógeno humano y animal es capaz de producir diversas exoproteínas, proceso regulado por el mecanismo de “quorum sensing”. Este microorganismo es pesquisado en alimentos procesados, por ser una bacteria capaz de producir cuadros agudos de toxoinfecciones alimentarias. Es por ello, que desde cepas aisladas de alimentos se buscó aquellas que tuviesen la capacidad de producir sustancias antimicrobianas inhibitorias sobre Listeria monocytogenes, también otro patógeno alimentario que produce graves, y en ocasiones cuadros clínicos letales sobre la población humana susceptible. En esta tesis se purificó y caracterizó parcialmente una sustancia antimicrobiana de un peso molecular aproximado de 3,5 kDa, resistente a la temperatura que podría eventualmente clasificarse dentro de las moléculas denominadas bacteriocinas de clase II, subclase IIa y, que realizando una mayor cantidad de estudios pudiese ser una candidata al uso como un biopreservante en alimentos

Características morfológicas en células descamadas de pacientes diagnosticados con liquen plano oral, obtenidas mediante citología exfoliativa

73 P.INTRODUCCIÓN: El liquen plano oral (LPO) es una enfermedad mucocutánea crónica de base inmunológica. Es considerada una patología potencialmente malignizante, por lo que el control periódico de la lesión es de suma importancia. Por su parte, la citología exfoliativa es un método sencillo, no invasivo y potencialmente útil en el seguimiento de estas lesiones. El objetivo de este estudio es describir las características morfológicas presentes en las células epiteliales descamadas en pacientes con LPO, que acuden al Centro de Clínicas Odontológicas de la Universidad de Talca. MATERIALES Y MÉTODOS: Se estudiaron 11 pacientes con LPO. Se consideró la información biodemográfica. Se obtuvieron frotis convencionales, que fueron teñidos con Papanicolaou. Se evaluaron los criterios de hipercromatismo nuclear, irregularidad y engrosamiento del reborde nuclear, dispersión irregular de la cromatina, binucleaciones y alteraciones nucleolares, además de la relación núcleo citoplasma y área nuclear. Los datos obtenidos fueron descritos y los valores comparados y analizados mediante test de Student.RESULTADOS: De los cinco criterios establecidos, sólo se pesquisaron binucleaciones y alteraciones nucleolares. La relación núcleo citoplasma en células de pacientes afectados con LPO se encontró disminuida, a diferencia del área nuclear que se encontró aumentada.CONCLUSIÓN: La información biodemográfica concuerda con la literatura. Se pueden describir Baracterísticas morfológicas de pacientes con LPO (binucleaciones y alteraciones nucleolares), la relación núcleo citoplasma y área nuclear concuerdan con hiperplasia epitelial. Por tanto, es posible evaluar las alteraciones citológicas que presentan pacientes con LPO y se sugiere establecer protocolos de acción que apoyen al clínico en el seguimiento de esta patología mediante citología exfoliativa.PALABRAS CLAVES: Liquen Plano Oral, Citología Exfoliativa, Papanicolaou./ABSTRACT:INTRODUCTION: The oral lichen planus (OLP) is a chronic mucocutaneous disease with an inmunological base. It is considered a potentially malignant disease, so periodic monitoring of the lesion is critical. For its part, exfoliative cytology is simple, noninvasive and potentially useful in monitoring these lesions. The aim of this study is to describe the morphological characteristics present in desquamated epithelial cells in OLP patients who come to the Center Dental Clinics of the University of Talca. MATERIALS AND METHODS: Eleven patients with OLP were studied. The biodemographic information was considered. Conventional smears were obtained and stained with Papanicolaou. Criteria of nuclear hyperchromatism, irregularity and nuclear thickened rim, irregular dispersion of chromatin, binucleation and nucleoli changes were assessed in addition to the relationship nucleus cytoplasm and nuclear area. The data obtained were described and the values were compared and analyzed using Student's t test. RESULTS: Of the five criteria, only binucleation and nucleolar alterations were evidenced.The Nuclear/cytoplasm relationship in cells of patients with OLP was found diminished unlike the nuclear area that was found augmented. CONCLUSION: The biodemographic information is consistent with the literature. It can be described morphological characteristics of patients with OLP (binucleation and nucleolar alterations), the relation nuclear/cytoplasm and nuclear area is consistent with epithelial hyperplasia. Therefore, is possible to evaluate the cytological alterations that present patients with OLP and it are suggested establish action protocols to support the clinician in monitoring this condition by exfoliative cytology.KEYWORDS: Oral Lichen Planus, Exfoliative Cytology, Papanicolaou

Immunohistochemical analysis of cancer-associated fibroblasts and podoplanin in head and neck cancer

To immunohistochemically evaluate the association between the presence of cancer-associated fibroblasts (CAFs) and the tumour expression of podoplanin (PDPN) in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) and their association with clinicopathological variables. A tissue microarray (TMA) with biopsy sections from patients diagnosed with HNSCC was stained with antibodies against the CAFs marker, ?-smooth muscle actin (?-SMA), and PDPN. We subsequently evaluated their expression to determine the association between them and with clinicopathological variables including age, primary tumour site, TNM stage, and tumour differentiation grade. Positive reaction to ?-SMA was observed in the tumour stroma, revealing spindle-shaped cells compatible with CAFs, which showed a high expression in 62% of cases and a significant association with laryngeal carcinomas, advanced clinical stages, and lower tumour differentiation (P ? 0.05). PDPN staining on tumour cells showed low expression in 72% of cases, and it was not associated with any clinicopathological variable or with the presence of CAFs. The presence of CAFs in the tumour stroma is related to an aggressive phenotype and could increase as the disease progresses, although based on our findings, it would have no relationship, at least directly, with the expression of PDPN

Comparación de métodos de muestreo para el estudio de células descamadas de la cavidad oral

80 p.Introducción. La mayoría de las personas que posee enfermedades bucales es principalmente por los estilos de vida que presenta, (dieta, tabaco y alcohol), que son factores que dañan la mucosa oral. Las células que recubren la cavidad oral, permiten obtener información precoz acerca de cambios morfológicos. La citología exfoliativa es una técnica de aplicación sencilla, y no genera dolor en el paciente. Dentro de los instrumentos clásicos para la toma de muestra se encuentra el citobrush y la espátula de madera. Objetivos: Comparar métodos para el estudio de células descamadas de la cavidad oral, mediante la aplicación de citología exfoliativa de la mucosa oral, con la utilización de tinción Papanicolaou en alumnos voluntarios de la Universidad de Talca en el año 2014 Materiales y métodos: Se estudiaron a 35 voluntarios sanos. Se les realizo una toma de muestra con dos instrumentos diferentes (citobrush y espátula de madera). Se fijaron las muestras y se tiñeron con PAP. Luego se midió la relación núcleo citoplasma de las células. Los datos obtenidos fueron descritos y los valores analizados mediante test t de Student. Resultados: Se compararon las mediciones de la relación núcleo citoplasma de los voluntarios con ambos instrumentos dando diferencias estadísticamente significativas entre ambos métodos, se comparó la relación núcleo citoplasma de ambos instrumentos con un valor de referencia dando resultados que eran menores al valor estándar y finalmente se evaluó la calidad de las muestras de los frotis en estudio. Conclusión: Según los datos cuantitativos y cualitativos entregados en este estudio, se demuestra el citobrush en comparación con la espátula de madera, es el instrumento más apto y confiable para tomar muestras de células descamadas de la cavidad oral

Aplicación de la nanotecnología en la prevención, detección y tratamiento de patologías orales. Revisión bibliográfica.

59 p.INTRODUCCIÓN: La nanotecnología es la ciencia que trabaja a escala nanométrica (1 a 100 nm). A esta escala, la materia adopta otras características. Las nanopartículas ofrecen una amplia gama de aplicaciones y el área de la salud, no es la excepción. Aquí pueden ser empleadas aquellas de carbón, metálicas, quantum dots (QDs) y dendrímeros, entre otras. OBJETIVO: Determinar el uso de la nanotecnología en la prevención, diagnóstico y tratamiento de patologías orales, mediante estudios descriptivos, basado en la búsqueda de la literatura. METODOLOGÍA: Búsqueda realizada en Pubmed, Cochrane, Lilacs, Scopus, ISI Web os Sciences y Scielo. Período agosto 2014. Utilizando términos Mesh "Mouth Diseases", “Oral Pathology”, "Nanotechnology“, "Nanoparticles“, “Prevention”, "Diagnosis“ y "Therapeutics“ en distintas combinaciones. Incluyéndo artículos desde el 2000, en idioma español e inglés, de tipo experimental en animales, ensayos clínicos, estudios observacionales como de cohorte, de caso y control, transversal en humanos y revisiones de literatura publicados entre 2000 y Junio del 2014. RESULTADOS: La búsqueda y filtros, arrojó 7 papers. Aquí, se describen mecanismos para prevenir, diagnosticar y tratar patologías orales. Se emplean nanopartículas de plata, oro, cobre, zinc, silicio, titanio, QDs y nanoburbujas de ozono (NBW3). Las patologías en que se aplican son: caries, infecciones, hipersensibilidad dental, carcinoma escamocelular oral, enfermedad periodontal y síndrome de Sjögren. CONCLUSIÓN: La nanotecnología en patología oral se puede aplicar para la prevención, diagnóstico y/o tratamiento. Se ha utilizado en diversas patologías orales. El potencial de esta ciencia es amplio, por tanto, queda mucho que explorar y aplicar, en esta nueva área. PALABRAS CLAVES: "Mouth Diseases",Oral Pathology “”,Nanotechnology“,Nanoparticles“, “Prevention”, "Diagnosis“ y "Therapeutics

Expresión de K167 y micronucleos en células de la mucosa oral de pacientes fumadores y no fumadores obtenidas mediante citología exfoliativa

71 p.El cáncer oral es caracterizado por una secuencia de pasos sucesivos, que convierten un epitelio normal en otro; los cambios producidos en las células son causa de factores externos que afectan el ADN, como el tabaco. Este es, un agente genotóxico que altera la morfología (micronúcleos, cariorexis, picnosis, “broken eggs”, cromatina condensada, células binucleadas) y expresión de proteínas nucleares. El cáncer oral, presenta alta prevalencia y mortalidad, es por esto que, es necesario contar con métodos poco invasivos, como la citología exfoliativa, que permitan realizar “screnning” y detectar alteraciones celulares, precozmente.Es por ello que, proponemos evaluar las diferencias entre la morfología nuclear y expresión de la proteína Ki-67 en células exfoliadas del epitelio oral de pacientes fumadores y no fumadores. En este trabajo, se estudiaron 20 pacientes (10 fumadores y 10 no fumadores) atendidos en el Centro de Clínicas Odontológicas de la Universidad de Talca, mediante histoquímica e inmunocitoquímica. Existen diferencias significativas en la presencia de micronúcleos en pacientes fumadores y no fumadores. No existen evidencias significativas en cuanto a cariorexis, picnosis, “broken eggs”, cromatina condensada y células binucleadas. No se detectó la expresión de Ki-67 en los grupos estudiados.Estos hallazgos, señalan que existen cambios nucleares asociadas al hábito de fumar y que sugieren aplicar medidas preventivas que impidan a los pacientes sufrir de patologías complejas irreversibles como, el cáncer escamocelular oral.Sin embargo, es necesario realizar mayores estudios que determinen la expresión de proteínas específicas, útiles como marcadores de “screnning” y que puedan ser empleadas en muestras obtenidas mediante citología exfoliativa

Determinación del tiempo óptimo de fijación con formalina 10% tamponada, para la expresión de citoqueratina 5/6 en lenguas de ratones Balb-c mediante inmunohistoquímica

77 p.Introducción. La formalina 10% tamponada es el fijador químico más ampliamente utilizado en histología, sin embargo, el tiempo de fijación óptimo para tejidos, no ha sido determinado claramente. Citoqueratinas 5/6 (CKs 5/6) son proteínas constitutivas presentes en epitelio oral, cuya expresión es relevante para el adecuado diagnóstico histopatológico.En consecuencia, ésta investigación busca determinar el tiempo óptimo para obtener la máxima inmunoexpresión de CKs 5/6 en epitelio oral de muestras histológicas de ratones Balb-c del Bioterio de la Universidad de Talca, en el año 2016. Metodología: El presente estudio experimental, incluyó un total de 42 muestras correspondientes a lenguas de ratones Balb-c que fueron mantenidos en el Bioterio de la Universidad de Talca. Las muestras obtenidas posteriores a la disección de los animales, fueron fijadas en FT 10% en 14 tiempos. Por cada tiempo establecido se evaluaron 3 muestras, previamente codificadas. Una vez procesadas histológicamente, se identificaron CKs 5/6 mediante inmunoperoxidasa, con posterior contraste con hematoxilina de Harris. Posteriormente se evaluaron 3 áreas de 40.000μm2 representativas en cada muestra, para cuantificar la expresión de CKs 5/6, utilizando el software Image J 1.50i. Resultados. Posterior al análisis estadístico y tras realizar comparaciones posteriores, se obtiene el tiempo 5 (48 horas) como el que presenta mayor inmunotinción. Se destacan además tiempos estadísticamente significativos de 12 horas y 3 días, los que siguen en forma descendente, al tiempo 5 en cuanto a inmunorreactividad. Finalmente, se destaca 7 horas como aquel que no presenta inmunotinción, asociado al breve tiempo de fijación. Conclusión. Este estudio sugiere que el tiempo óptimo para fijar una muestra de biopsia y su análisis posterior, es de 48 horas

Caracterización de colágeno I y III en tejido blando con periimplantitis

53 p.Los implantes dentales han ido en aumento en los últimos años y en algunos casos, éstos deben ser extirpados, sin embargo, aún se desconocen la totalidad de las causas del porque deben ser removidos, por lo que es necesario aumentar el conocimiento sobre las razones por las cuales se llega a requerir del explante del implante dental. Este estudio tiene como objetivo aumentar el conocimiento respecto a este tema, por lo que se propone estudiar el tejido aledaño a un implante dental con periimplantitis, específicamente las fibras de colágeno, las cuales pueden dar una guía predictiva sobre una posible falla en el implante. Con la finalidad de caracterizar este tejido, se utilizó la tinción rojo de picrosirius, para observar las diferencias porcentuales entre fibras de colágeno tipo I y III, relacionarlas con la literatura y las características de los pacientes desde donde se obtuvieron las muestras Los resultados mostraron distintas proporciones de colágeno tipo I/III, donde se concluyó, que valores bajos en la proporción muestra mayor probabilidad de reparación del tejido dañado con periimplantitis y proporciones altas podrían sugerir estados alterados como fibrosis con la consecuente pérdida de funcionalidad tisula

Expresión de P53 y regiones organizadoras nucleolares en células de mucosa oral de pacientes fumadores y no fumadores obtenidas mediante citología exfoliativa

78 p.Introducción: Es conocida la estrecha relación entre tabaco y cáncer oral. El cáncer oral involucra una secuencia de pasos, que se caracterizan por una acumulación de defectos genéticos seguidos de una proliferación celular. Estos cambios morfo-fisiológicos pueden ser detectados por medio de metodologías de monitoreo como citología exfoliativa y/o por inmunomarcación con anticuerpos contra ciertas proteínas. El propósito de este trabajo es contribuir al estudio del potencial que posee la citología exfoliativa como herramienta diagnóstica, mediante un análisis comparativo de la expresión de p53 y NORs en células obtenidas mediante citología exfoliativa de pacientes fumadores y no fumadores.Materiales y métodos: Se obtuvieron frotis de borde lateral de lengua y cara interna de mejilla de mucosa oral sana, proporcionados por 10 pacientes fumadores y 10 no fumadores. Las muestras fueron sometidas a tinción de AgNOR e inmunocitoquímica para p53. Los valores obtenidos fueron comparados y analizados mediante distintos test estadísticos dentro de los que destacan test t de Student para variables independientes, test U Mann-Whitney para variables independientes y test exacto de Fisher. Resultados: Con respecto a la tinción de AgNORs el patrón de distribución disperso fue el patrón predominante en ambos grupos. La media de AgNORs fue estadísticamente mayor en pacientes fumadores. No hubo expresión de p53 en ninguno de los grupos.Conclusión: Existe un mayor recuento de AgNORs por núcleo en células de mucosa oral de pacientes fumadores lo que sugiere una mayor actividad proliferativa en estas células.Palabras clave: AgNORs, Nucleolo, p53, inmunocitoquímica, tabaco, cáncer oral, citología exfoliativa