Atherosclerotic Pre-Conditioning Affects the Paracrine Role of Circulating Angiogenic Cells Ex-Vivo

In atherosclerosis, circulating angiogenic cells (CAC), also known as early endothelial progenitor cells (eEPC), are thought to participate mainly in a paracrine fashion by promoting the recruitment of other cell populations such as late EPC, or endothelial colony-forming cells (ECFC), to the injured areas. There, ECFC replace the damaged endothelium, promoting neovascularization. However, despite their regenerative role, the number and function of EPC are severely affected under pathological conditions, being essential to further understand how these cells react to such environments in order to implement their use in regenerative cell therapies. Herein, we evaluated the effect of direct incubation ex vivo of healthy CAC with the secretome of atherosclerotic arteries. By using a quantitative proteomics approach, 194 altered proteins were identified in the secretome of pre-conditioned CAC, many of them related to inhibition of angiogenesis (e.g., endostatin, thrombospondin-1, fibulins) and cell migration. Functional assays corroborated that healthy CAC released factors enhanced ECFC angiogenesis, but, after atherosclerotic pre-conditioning, the secretome of pre-stimulated CAC negatively affected ECFC migration, as well as their ability to form tubules on a basement membrane matrix assay. Overall, we have shown here, for the first time, the effect of atherosclerotic factors over the paracrine role of CAC ex vivo. The increased release of angiogenic inhibitors by CAC in response to atherosclerotic factors induced an angiogenic switch, by blocking ECFC ability to form tubules in response to pre-conditioned CAC. Thus, we confirmed here that the angiogenic role of CAC is highly affected by the atherosclerotic environment

Proteína C reactiva como factor pronóstico de mortalidad en los aneurisma de aorta abdominal rotos

Determinar si el valor plasmatico preoperatorio de diversos marcadores biologicos de inflamacion .proteina C reactiva (PCR), leucocitos y fibrinogeno. se asocia a la mortalidad de los pacientes con rotura de aneurisma de aorta bdominal (AAA). Pacientes y metodos. Estudio prospectivo de 37 pacientes intervenidos uirurgicamente de AAA roto. Se extrajo una muestra de sangre periferica a cada uno de ellos para el estudio preoperatorio de los biomarcadores de inflamacion. Ademas, se recogieron datos correspondientes a variables clinicas pre, intra y postoperatorias. Para el analisis de los valores plasmaticos de PCR se utilizo un test convencional (Tina-Quant). Resultados. De los marcadores biologicos de inflamacion estudiados, solo la PCR fue un factor pronostico de mortalidad perioperatoria, y la mediana fue significativamente superior en los fallecidos en comparacion con los supervivientes (p = 0,021). Se categorizo la PCR en dos grupos con la utilizacion como punto de corte el valor obtenido en la curva ROC (3,2 mg/dL) para la maxima sensibilidad y especificidad de esta variable con relacion a la mortalidad. Los pacientes cuya PCR al ingreso fue . 3,2 mg/dL tuvieron una mortalidad significativamente mayor que aquellos cuya cifra era < 3,2 mg/dL (71 frente a 10%) (p = 0,002). En el analisis multivariante, las variables pronosticas de mortalidad fueron: valor preoperatorio de PCR, duracion del pinzamiento aortico e inestabilidad hemodinamica durante la intervencion. Conclusiones. La elevacion de la PCR preoperatoria es un factor pronostico de mortalidad en los AAA rotos, por lo que puede ser, junto a otros factores previamente identificados, util para la estratificacion del riesgo quirurgico de estos pacientes

Antibioterapia empírica en el pie diabético y no diabético

Introducción. La neuropatía, la isquemia y la infección son los tres factores directamente relacionados con la aparición y desarrollo de las úlceras en los pacientes diabéticos. La infección definida mediante parámetros clínicos y apoyada por cultivos microbiológicos es el principal factor pronóstico de la lesión. Objetivo. Estudiar la etiología infecciosa de las úlceras en pacientes diabéticos y no diabéticos, así como la sensibilidad in vitro a antimicrobianos de los microorganismos aislados, nos permitirá establecer la mejor pauta antibiótica empírica en nuestro medio asistencial. Pacientes y métodos. Estudio observacional, transversal y prospectivo de 200 pacientes consecutivos, diabéticos y no diabéticos, ingresados por la presencia de úlceras isquémicas o neuropáticas con signos locales de infección. Toma de tres muestras microbiológicas el día del ingreso previa administración del tratamiento empírico (ciprofloxacino + clindamicina) y valoración de su respuesta clínica y sus modificaciones a específico por resistencia de los microorganismos. Resultados. En la mayoría de los cultivos se aisló microbiota polimicrobiana con predominio de aerobios-anaerobios gramnegativos y aerobios grampositivos. Staphylococcus aureus (10,6%), Pseudomonas aeruginosa y Bacteroides fragilis fueron los microorganismos más frecuentemente aislados. La terapia empírica tuvo que modificarse en más del 50% de los casos por resistencia. La mayor sensibilidad in vitro para los microorganismos grampositivos fue para la vancomicina, seguida de cloxacilina y amoxicilina/clavulánico. En el caso de aerobios-anaerobios gramnegativos, fue para meropenem, tobramicina e imipenem, y para los anaerobios, imipenem, cefoxitina y amoxicilina/clavulánico. Conclusiones. La administración de amoxicilina/clavulánico solo o asociado a tobramicina constituye una pauta antibiótica con amplio espectro para los pacientes ambulatorios. En régimen de ingreso el antibiótico de elección sería imipenem, seguido de piperacilina/tazobactam

Long Term Response to Circulating Angiogenic Cells, Unstimulated or Atherosclerotic Pre-Conditioned, in Critical Limb Ischemic Mice

Critical limb ischemia (CLI), the most severe form of peripheral artery disease, results from the blockade of peripheral vessels, usually correlated to atherosclerosis. Currently, endovascular and surgical revascularization strategies cannot be applied to all patients due to related comorbidities, and even so, most patients require re-intervention or amputation within a year. Circulating angiogenic cells (CACs) constitute a good alternative as CLI cell therapy due to their vascular regenerative potential, although the mechanisms of action of these cells, as well as their response to pathological conditions, remain unclear. Previously, we have shown that CACs enhance angiogenesis/arteriogenesis from the first days of administration in CLI mice. Also, the incubation ex vivo of these cells with factors secreted by atherosclerotic plaques promotes their activation and mobilization. Herein, we have evaluated the long-term effect of CACs administration in CLI mice, whether pre-stimulated or not with atherosclerotic factors. Remarkably, mice receiving CACs and moreover, pre-stimulated CACs, presented the highest blood flow recovery, lower progression of ischemic symptoms, and decrease of immune cells recruitment. In addition, many proteins potentially involved, like CD44 or matrix metalloproteinase 9 (MMP9), up-regulated in response to ischemia and decreased after CACs administration, were identified by a quantitative proteomics approach. Overall, our data suggest that pre-stimulation of CACs with atherosclerotic factors might potentiate the regenerative properties of these cells in vivo.This study was supported by the Institute of Health Carlos III, ISCIII (PI16-00784, PI2000716), co-funded by European Regional Development Fund "A way to make Europe", and the Programa Operativo de Andalucia FEDER, Iniciativa Territorial Integrada ITI 2014-2020, Consejeria de Salud, Junta de Andalucia (PI0026-2017)