Efeito do tratamento com o complexo paladaciclo dppe 12 associado à cisteína proteinase recombinante rldccys1 sobre a infecção por leishmania (leishmania) amazonensis em modelo murino

The present study evaluated the leishmanicidal activity of the cyclopalladated complex DPPE 1.2 associated to rLdccys1 in BALB/c mice infected with Leishmania (Leishmania) amazonensis. Cloning of the Ldccys1 gene encoding the cysteine proteinase 1 from L. (L.) infantum chagasi amastigotes in bacterial expression vector generated the recombinant protein rLdccys1. Cross reactivity between rLdccys1 and a cysteine proteinase of 30 kDa from L. (L.) amazonensis amastigotes was demonstrated by Western blot. The treatment of L. (L.) amazonensis-infected BALB/c mice totalizing 6.4 mg/Kg/ animal of DPPE 1.2 associated to 7.5 mg/Kg/animal of rLdccys1 resulted in a significant reduction of the lesion size compared to that from controls and in a parasite burden reduction of 25 fold in animals treated with either DPPE 1.2 alone or associated to rLdccys1. Any of the treated group displayed increase of TCD4+ and TCD8+ lymphocytes in popliteal and inguinal lymph nodes. Treatment with double concentration of DPPE 1.2 ( totalizing 13.4 mg/Kg/animal) led to a parasite burden reduction of 185 and 140 fold in animals treated with DPPE 1.2 alone and associated to rLdccys1, respectively, whereas in mice treated with rLdccys1 alone this reduction was of 4 fold compared to controls. However, results from both experiments showed that the parasite burden reduction was not statistically different among mice treated with either DPPE 1.2 alone or DPPE 1.2 associated to rLdccys1. Evaluation of active TGF-? in mouse foot lesions showed a significant reduction of this cytokine in all treated groups compared to controls. Treatment with a lower concentration of DPPE 1.2 ( totalizing 2.5 mg/Kg/animal) resulted in a significant difference of parasite burden between mice treated with DPPE 1.2 and DPPE 1.2 associated to rLdccys1 which exhibited a parasite reduction of 35 and 260 fold, respectively, while this reduction was of 5 fold in animals treated with rLdccys1 alone. In these animals the leishmanicidal activity was followed by a significant increase of T CD4+ and T CD8+ lymphocytes in popliteal and inguinal lymph nodes. In addition, there was a significant reduction of active TGF-? in foot lesions from all treated animals. On the other hand, IFN-? was not detected in foot lesion from treated groups. XIX Evaluation of serum levels of TGO, TGP and urea showed no statistically significant alterations among groups, indicating that treatment with DPPE 1.2 alone or associated to rLdccys1 did not induce hepato and nephrotoxicity. The data obtained in this work demonstrated the efficiency of the inhibitory action of DPPE 1.2 over the infection by L. (L.) amazonensis as observed previously in our laboratory and its ability to modulate the immune system of the treated animal. Treatment with palladacycle complex associated with rLdccys1 exerted leishmanicidal effect sum to the DPPE 1.2, opening perspectives to explore the potencial of this association as an alternative to chemotherapy for cutaneous leishmaniasis caused by L. (L.) amazonensis.O presente estudo teve como enfoque avaliar a ação leishmanicida do complexo paladaciclo DPPE 1.2 associado à rLdccys1 em camundongos BALB/c infectados com a L. (L.) amazonensis. A clonagem do gene Ldccys1, codificador da cisteína proteinase 1 de L. (L.) infantum chagasi, em vetor de expressão bacteriano originou a proteína recombinante rLdccys1, demonstrando-se por Western blot a antigenicidade cruzada da rLdccys1 com uma cisteína proteinase de 30 kDa expressa em amastigotas da L. (L.) amazonensis. O tratamento dos camundongos infectados totalizando 6,4 mg/Kg/animal do DPPE 1.2 associado a 7,5 mg/Kg/animal da rLdccys1 resultou em redução significante do tamanho das lesões comparado ao dos controles e em carga parasitária 25 vezes menor nos animais tratados com o DPPE 1.2 sozinho ou associado à rLdccys1. Não foi observado aumento das populações de linfócitos T CD4+ e T CD8+ nos linfonodos poplíteos e inguinais de nenhum dos grupos tratados. Quando a concentração do DPPE 1.2 foi dobrada (totalizando13,4 mg/Kg/animal), a carga parasitária foi 185 e 140 vezes menor nos animais tratados com o DPPE 1.2 e o DPPE 1.2 associado à rLdccys1, respectivamente, enquanto que nos tratados somente com a rLdccys1 essa redução foi de 4 vezes comparada à dos controles. Entretanto, nos dois experimentos o grau de redução da carga parasitária não foi significantemente diferente entre os animais tratados apenas com o DPPE 1.2 ou com o DPPE 1.2 associado à rLdccys1. A dosagem do TGF-? ativo nas lesões dos camundongos mostrou a redução significante da concentração dessa citocina em todos os grupos tratados comparada à dos controles. O tratamento com menor concentração do DPPE 1.2 (totalizando 2,5 mg/Kg/animal) resultou em grau de infecção significantemente diferente entre os camundongos tratados com o DPPE 1.2 sozinho ou associado à rLdccys1, sendo de 35 e 260 vezes, respectivamente, a redução da carga parasitária nesses animais e de 6 vezes nos tratados somente com a rLdccys1 comparada à dos controles. Nesses animais a atividade leishmanicida foi acompanhada do aumento significante da expressão dos linfócitos T CD4+ e T CD8+ e em todos os grupos tratados houve redução significante dos níveis de TGF-? ativo nas lesões comparados aos dos controles. Por outro lado, não foi detectado IFN-? na lesão das patas de nenhum grupo dos animais tratados. A dosagem sérica de todos os camundongos tratados mostrou concentrações de TGO, TGP e uréia dentro dos valores de referência, indicando que os esquemas de tratamento a que os animais foram submetidos não levaram à hepato ou nefrotoxicidade. Os dados obtidos nesse trabalho demonstraram a eficiente ação inibitória do DPPE 1.2 sobre a infecção pela L. (L.) amazonensis em modelo murino previamente observada em nosso laboratório e a sua capacidade de modular o sistema imune do animal tratado. O tratamento com o complexo paladaciclo associado à rLdccys1 exerceu efeito leishmanicida somatório ao do DPPE 1.2, abrindo perspectivas para explorar o potencial dessa associação como mais uma alternativa para a quimioterapia da leishmaniose cutânea causada pela L. (L.) amazonensis.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016

Novo esquema de imunoquimioterapia indutor de resposta imune protetora em modelo murino de leishmaniose cutânea causada pela Leishmania (leishmania) amazonensis

The palladacycle complex DPPE 1.2 was previously shown to inhibit Leishmania (Leishmania) amazonensis infection in vitro and in vivo. The present study aimed to evaluate the effect of DPPE 1.2 associated with a recombinant cysteine proteinase from L. (L.) infantum chagasi, rLdccys1, and the adjuvant Propionibacterium acnes (triple association) on L. (L.) amazonensis infection in two mouse strains, BALB/c and C57BL/6. The treatment with this association potentiated the leishmanicidal effect of DPPE 1.2 resulting in a reduction of parasite load in both strains of mice which, although not statistically significant, was higher compared to that found in groups treated with either DPPE 1.2 alone or associated with P. acnes or rLdccys1. The reduction of parasite load in both mouse strains was followed by immunomodulation mediated by an increase of naive CD4+ and CD8+ T lymphocytes in some treated groups compared to that found in controls and this increase was significantly higher in animals treated with the triple association. A significant increase of memory CD4+ and CD8+ T lymphocytes was also demonstrated in animals treated with the triple association. High levels of IFN-g were detected in foot lesions of all treated groups compared to those found in controls and a significantly higher secretion of this cytokine was observed in groups treated with the triple association, while reduction of active TGF-β was observed in all treated animals compared to controls. No infection relapse was observed 1 month after the end of treatment in mice which received DPPE 1.2 associated with rLdccys1 or rLdccys1 plus P. acnes in comparison to that exhibited by animals treated with DPPE 1.2 alone. Evaluation of serum levels of AST, ALT, urea and creatinine showed no alterations among treated groups, indicating that this treatment schedule did not induce hepato or nephrotoxicity. These data indicate the potential use of this association as a therapeutic alternative for cutaneous leishmaniasis caused by L. (L.) amazonensis.A atividade do complexo paladaciclo DPPE 1.2 foi previamente demonstrada sobre a infecção pela Leishmania (Leishmania) amazonensis in vitro e in vivo. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do DPPE 1.2 associado a uma cisteína proteinase recombinante de L. (L.) infantum chagasi, rLdccys1, e ao adjuvante Propionibacterium acnes (tripla associação) na infecção pela L. (L.) amazonensis em duas linhagens de camundongos, BALB/c e C57BL/6. O tratamento com a tripla associação potencializou o efeito leishmanicida do DPPE 1.2 resultando na redução da carga parasitária em ambas as linhagens de camundongos que, embora não estatisticamente significante, foi maior que a encontrada nos grupos tratados apenas com o DPPE 1.2 ou com esse paladaciclo associado à P. acnes ou à rLdccys1. Nas duas linhagens de camundongos a redução da carga parasitária foi acompanhada por imunomodulação mediada por aumento do número de linfócitos TCD4+ e TCD8+ naive em alguns grupos tratados comparado ao dos controles, sendo esse aumento significantemente maior nos animais tratados com a tripla associação. Significante aumento de linfócitos TCD4+ e TCD8+ de memória foi também demonstrado nos camundongos tratados com a tripla associação. Níveis elevados de IFN-g nas lesões foram detectados em todos os grupos tratados comparados aos dos controles, sendo a secreção dessa citocina significantemente maior no grupo tratado com a tripla associação, enquanto que a secreção de TGF-β foi significantemente reduzida nas lesões dos grupos tratados comparada à dos controles. Não foi observada recaída da infecção um mês após o final do tratamento nos camundongos que receberam o DPPE 1.2 associado à rLdccys1 ou à rLdccys1 mais P. acnes em comparação com a apresentada pelos animais tratados apenas com o DPPE 1.2. Não houve alterações dos níveis séricos de AST, ALT, ureia e creatinina em nenhum dos grupos tratados comparados aos valores de referência dos animais normais, indicando que esse esquema de tratamento não induziu hepato ou nefrotoxicidade. A potencialização do efeito leishmanicida do DPPE 1.2 quando associado à rLdccys1 e P. acnes abriu perspectivas para explorar o potencial dessa associação como uma alternativa terapêutica para a leishmaniose cutânea causada pela L. (L.) amazonensis.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2020

Pretreatment with pentoxifylline attenuates lung injury induced by intestinal ischemia/reperfusion in rats Pré-tratamento com pentoxifilina atenua a lesão pulmonar induzida por isquemia/reperfusão intestinal em ratos

PURPOSE: To investigate the protective effect of pentoxifylline against the lung injury observed after intestinal ischemia (I) followed by a period of reperfusion (R). METHODS: Twenty-eight male Wistar rats were equally divided into 4 experimental groups and operated under ketamine-xylazine anesthesia. (1) Sham: falsely-operated animals; (2) SS+IR: intestinal ischemia was accomplished by clipping the superior mesenteric artery during 60 minutes, with an administration of a standard volume of saline solution (SS) 5 min before the end of the ischemia period; the clip was then releases or a 120-min period of reperfusion; (3) I+PTX+R: ischemia as above, PTX was administered (25 mg/kg) and the gut reperfused as above; (4) PTX+I+PTX+R: Five minutes before arterial occlusion PTX was administered; the superior mesenteric artery was then clipped for 60 minutes. After 55-min ischemia, an additional dosis of PTX was administered; the clip was removed for reperfusion as above. At the 60th min of reperfusion a third dosis of PTX was administered. RESULTS: PTX markedly attenuated lung injury as manifested by significant decreases (all P<0.001 as compared with the SS+IR group) of pulmonary wet/dry tissue weight ratio, total protein content, myeloperoxidase activity and tumor necrosis factor-alpha. Moreover, it was apparent that in the group PTX+I+PTX+R the improvements have been even more significant. CONCLUSION: PTX exerted a protective effect on the lung from the injuries caused by intestinal ischemia/reperfusion.<br>OBJETIVO: Avaliar os efeitos protetores da pentoxifilina (PTX) na lesão pulmonar observada após isquemia (I) seguida de reperfusão (R) intestinal. MÉTODOS: Vinte e oito ratos machos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos experimentais e operados sobre anestesia quetamina-xilazina. (1) Sham: animais falsamente operados; (2) SS+IR: isquemia intestinal realizada pelo clampeamento da artéria mesentérica superior durante 60 minutos, com a administração de solução salina (SS) 5 minutos antes do período de isquemia, após a retirada do clamp houve a reperfusão por mais 120 minutos; (3) I+PTX+R: isquemia como mencionado anteriormente seguida da administração de PTX (25 mg/Kg) 5 minutos antes do final da isquemia (60 minutos) seguida de reperfusão por mais 120 minutos; (4) PTX+I+PTX+R: 5 minutos antes da isquemia foi administrado PTX, após 55 minutos de isquemia foi administrado outra dose de PTX e a reperfusão mantida por mais 120 minutos, sendo que aos 60 minutos da reperfusão outra dose de PTX foi administrada. RESULTADOS: A pentoxifilina reduziu os marcadores de lesão pulmonar (proteínas totais, malondialdeído, atividade da mieloperoxidase e fator de necrose tumoral) quando comparada com o grupo não tratado (P<0.001), contudo esta redução foi mais significante no grupo PTX+I+PTX+R. CONCLUSÃO: A pentoxifilina exerce efeito protetor no pulmão no trauma causado por isquemia/reperfusão intestinal