Identification et caractérisation de l'autoantigène des cANCAs : la myéloblastine

Les cANCAs sont des autoanticorps qui ciblent une protéase à sérine des neutrophiles et des monocytes. Les analyses de séquences N-terminales de l'autoantigène publiées à ce jour, identifient une nouvelle protéase à sérine nommée la myéloblastine. Un premier objectif de mon travail de maîtrise est de confirmer la présence d'autoanticorps ciblant la myéloblastine dans le sérum de patients atteints de la granulomatose de Wegener. Un deuxième objectif est de proposer un modèle d'interaction entre les cANCAs et leur autoantigène; nous voulons vérifier si l'antigène est exprimé à la surface des neutrophiles et des monocytes. Un troisième objectif est de définir un domaine de l'antigène ciblé par les cANCAs, afin d'évaluer l'antigénicité des différentes parties de la protéine. Nous avons débuté par la détection de l'antigène dans une lignée cellulaire comme les cellules HL60 ainsi que dans les neutrophiles et les cellules mononucléées du sang périphérique. Nous sommes parvenu à détecter l'antigène par la technique d'immunoprécipitation à l'aide d'anticorps provenant de sera cANCAs de patients et de protéines cellulaires liées à un ligand de protéase radiomarqué. Cette méthode très sensible nous a été très utile pour détecter de nombreux sera à hauts titres avec des anticorps dirigés contre une protéase à sérine 29 kD et sur une forme mineure de 47 kD nouvellement observée. La protéine immunoprécipitée a un poids moléculaire de 29 kD comme initialement décrit, mais nous avons observé une nouvelle forme de 47 kD. Cette nouvelle forme ne peut être uniquement due à une modification post-traductionnelle, tel que démontré par les travaux publiés sur le clonage du gène de la myéloblastine. L'immunoprécipitation de protéines de cellules HL60 radiomarquées au 32P-orthophosphate a permis de démontrer que la forme de 47 kD contient du phosphate, ainsi que celle de 29 kD. La séquence primaire de la myéloblastine ne contient pas de motifs connus de phosphorylation dans les cellules eucaryotes, nous suggérant que le phosphate est ajouté en bloc avec une autre composante. Cette protéase n'a pas de motif de liaison pour des acides nucléiques, et est emprisonnée dans les granules, suggérant que le phosphate est ajouté à la protéine, dès sa synthèse dans le réticulum endoplasmique. Nous avons aussi démontré par la technique de cytofluorométrie que l'antigène est exprimé à la surface membranaire des neutrophiles et des cellules HL60, en plus d'être présente sous forme libre dans les granules. Des inducteurs de dégranulation comme le TNF? et le PMA augmentent l'expression de surface de la myéloblastine dans les cellules HL60. Ces deux agents activent la dégranulation de ces cellules, impliquant que l'augmentation de l'expression membranaire de la myéloblastine est due à la fusion des membranes de granules avec la membrane plasmique. Ceci suggère qu'une partie de la myéloblastine est ancrée dans une membrane dès sa synthèse dans le réticulum endoplasmique. La séquence de l'ADNc de la myéloblastine n'a pas de séquences transmembranaires prédites pouvant permettre son ancrage dans la membrane. Donc, nous croyons que cette protéine doit subir une modification qui lui permet d'être liée à la membrane cytoplasmique. Les résultats présentés dans ce mémoire ne permettent pas d'affirmer quelle est cette modification. Cependant, nous suggérons que cette modification permet la liaison à la membranne plasmique. Parmi les hypothèse à envisager, il y a la modification du messager par épissage alternatif: de nouveaux exons pourraient substituer des exons déjà connus ou être ajoutés sur le transcrit primaire. La traduction de ces exons expliquerait la différence de poids moléculaire. Il y a aussi l'hypothèse voulant que la protéine soit modifiée de façon post-traductionnelle. Ainsi, la Mbn pourrait s'associer de façon covalente à une protéine transmembranaire. Aussi, la protéine pourrait être modifiée pour permettre la liaison à la membrane. Il a été décrit que des protéines peuvent être modifiées de façon post-traductionnelle par l'ajout en bloc, au niveau de réticulum endoplasmique, d'un groupement glycosyl-phosphatidylinositol (GPI). L'ajout d'un groupement GPI expliquerait la liaison à la membrane et la présence de phosphate sur la Mbn. Toutefois, il reste à démontrer que l'ajout d'un groupement GPI puisse modifier le poids moléculaire pour donner une forme de 47 kD. Nous avons également démontré que le PMA induit une diminution de la forme membranaire chez le neutrophile seulement. Le PMA génère également une forme de 47 kD extracellulaire (dans le surnageant des cellules) chez les neutrophiles. Ces données suggèrent qu'il existe un lien entre la forme de 47 kD et la forme membranaire de Mbn: la forme de 47 kD serait libérée de la membrane. Aussi ce phénomène peut être inhibé, car des neutrophiles traités avec une phospholipase D (PLD) exogène ne peuvent plus générer une forme p47 kD, induite normalement par le PMA. Nous n'avons pas encore déterminé si l'inhibition par la PLD est due à un effet pharmacologique sur les neutrophiles ou directement sur la myéloblastine membranaire. Nous avons également voulu déterminer quel type d'épitope est reconnu par un sérum cANCA typique. Nous avons déterminé qu'un des sera cANCA peut immunoprécipiter des déterminants linéaires, y compris des petits polypeptides de la myéloblastine de 12 et de 7.5 kD liés au 3H-DFP. Sachant que le site de liaison du DFP est situé sur la sérine catalytique, ceci nous indique que ce sérum contient des IgGs dirigées contre la partie carboxy terminale de la protéine. De plus, ce sérum est capable d'immunoprécipiter une phosphoprotéine de 15 kD, induite par le mannitol chez la bactérie Staphylococcus aureus. Cette immunoprécipitation peut être inhibée en fonction de la quantité de protéines de granules primaires des cellules HL60 préincubées avec le sérum. Ce sérum ayant des anticorps monospécifiques contre la myéloblastine, nous concluons que les cANCAs ont une réaction croisée avec cette phosphoprotéine, que l'on croit être le produit du gène EIIAmtl de S.aureus. La séquence publiée de cette protéine contient un motif de phosphorylation sur les histidines parfaitement conservé sur la séquence primaire de la myéloblastine (près du site de liaison au DFP), supportant l'hypothèse que les anticorps anti-myéloblastine (cANCA) pourraient être produits d'abord pour se défendre contre une infection de S.aureus, et par mimétisme moléculaire contre une protéine "soi": la myéloblastine. De plus, la myéloblastine est la seule protéine eucaryote (dans la banque de séquences EMBL) à posséder ce motif de phosphorylation, ce qui pourrait représenter un mécanisme d'autoimmunisation très spécifique. Ce mécanisme autoimmun serait un moyen possible de contourner la tolérance immunitaire et pourrait expliquer, compte tenu du rôle pathogénique possible de ces autoanticorps, l'importance déjà connue des infections bactériennes dans la granulomatose de Wegener

A Tale of Two Capacities: Including Children and Decisionally Vulnerable Adults in Biomedical Research

The participation of individuals who lack decision-making capacity is essential for advancing genomics research and neuroscience, but raises ethical and legal challenges relating to vulnerability, consent, and exclusion. Capacity differences between populations and individuals, the dynamics of capacity over time, and evolving legal consent and capacity regimes all raise uncertainty for researchers, institutional review boards, and policy makers. We review international ethical and legal best practices for including children and decisionally vulnerable adults in health research. Research ethics norms and literature tend to split such groups into narrow silos, which results in inconsistency and conceptual confusion, or to lump them together, which fails to take into account morally relevant differences. Through a narrative review of international norms, we identify challenges common to both groups, while drawing out distinctions reflecting their opposite capacity trajectories. Our comparison between these two populations clarifies underlying ethical concepts and offers opportunities for critique. Children need protection to foster their long-term autonomy, while decisionally vulnerable adults need to be provided with support in order to exercise their autonomy. This leads to differences in how researchers determine who lacks capacity, who has authority to consent, and what criteria guide such decision-making. We also consider how capacity issues color contemporary research governance debates over broad consent, data protection compliance, data sharing, and the return of individual research results and incidental findings

Defusing the legal and ethical minefield of epigenetic applications in the military, defense, and security context

Epigenetic research has brought several important technological achievements, including identifying epigenetic clocks and signatures, and developing epigenetic editing. The potential military applications of such technologies we discuss are stratifying soldiers’ health, exposure to trauma using epigenetic testing, information about biological clocks, confirming child soldiers’ minor status using epigenetic clocks, and inducing epigenetic modifications in soldiers. These uses could become a reality. This article presents a comprehensive literature review, and analysis by interdisciplinary experts of the scientific, legal, ethical, and societal issues surrounding epigenetics and the military. Notwithstanding the potential benefit from these applications, our findings indicate that the current lack of scientific validation for epigenetic technologies suggests a careful scientific review and the establishment of a robust governance framework before consideration for use in the military. In this article, we highlight general concerns about the application of epigenetic technologies in the military context, especially discrimination and data privacy issues if soldiers are used as research subjects. We also highlight the potential of epigenetic clocks to support child soldiers’ rights and ethical questions about using epigenetic engineering for soldiers’ enhancement and conclude with considerations for an ethical framework for epigenetic applications in the military, defense, and security contexts.</p

Breast Cancer Risk Estimation and Personal Insurance: A Qualitative Study Presenting Perspectives from Canadian Patients and Decision Makers

Genetic stratification approaches in personalized medicine may considerably improve our ability to predict breast cancer risk for women at higher risk of developing breast cancer. Notwithstanding these advantages, concerns have been raised about the use of the genetic information derived in these processes, outside of the research and medical health care settings, by third parties such as insurers. Indeed, insurance applicants are asked to consent to insurers accessing their medical information (implicitly including genetic) to verify or determine their insurability level, or eligibility to certain insurance products. This use of genetic information may result in the differential treatment of individuals based on their genetic information, which could lead to higher premium, exclusionary clauses or even the denial of coverage. This phenomenon has been commonly referred to as “Genetic Discrimination” (GD). In the Canadian context, where federal Bill S-201, An Act to prohibit and prevent genetic discrimination, has recently been enacted but may be subject to constitutional challenges, information about potential risks to insurability may raise issues in the clinical context. We conducted a survey with women in Quebec who have never been diagnosed with breast cancer to document their perspectives. We complemented the research with data from 14 semi-structured interviews with decision-makers in Quebec to discuss institutional issues raised by the use of genetic information by insurers. Our results provide findings on five main issues: (1) the reluctance to undergo genetic screening test due to insurability concerns, (2) insurers' interest in genetic information, (3) the duty to disclose genetic information to insurers, (4) the disclosure of potential impacts on insurability before genetic testing, and (5) the status of genetic information compared to other health data. Overall, both groups of participants (the women surveyed and the decision-makers interviewed) acknowledged having concerns about GD and reported a need for better communication tools discussing insurability risk. Our conclusions regarding concerns about GD and the need for better communication tools in the clinical setting may be transferable to the broader Canadian context

Identification et caractérisation de l'autoantigène des cANCAs : la myéloblastine

Les cANCAs sont des autoanticorps qui ciblent une protéase à sérine des neutrophiles et des monocytes. Les analyses de séquences N-terminales de l'autoantigène publiées à ce jour, identifient une nouvelle protéase à sérine nommée la myéloblastine. Un premier objectif de mon travail de maîtrise est de confirmer la présence d'autoanticorps ciblant la myéloblastine dans le sérum de patients atteints de la granulomatose de Wegener. Un deuxième objectif est de proposer un modèle d'interaction entre les cANCAs et leur autoantigène; nous voulons vérifier si l'antigène est exprimé à la surface des neutrophiles et des monocytes. Un troisième objectif est de définir un domaine de l'antigène ciblé par les cANCAs, afin d'évaluer l'antigénicité des différentes parties de la protéine. Nous avons débuté par la détection de l'antigène dans une lignée cellulaire comme les cellules HL60 ainsi que dans les neutrophiles et les cellules mononucléées du sang périphérique. Nous sommes parvenu à détecter l'antigène par la technique d'immunoprécipitation à l'aide d'anticorps provenant de sera cANCAs de patients et de protéines cellulaires liées à un ligand de protéase radiomarqué. Cette méthode très sensible nous a été très utile pour détecter de nombreux sera à hauts titres avec des anticorps dirigés contre une protéase à sérine 29 kD et sur une forme mineure de 47 kD nouvellement observée. La protéine immunoprécipitée a un poids moléculaire de 29 kD comme initialement décrit, mais nous avons observé une nouvelle forme de 47 kD. Cette nouvelle forme ne peut être uniquement due à une modification post-traductionnelle, tel que démontré par les travaux publiés sur le clonage du gène de la myéloblastine. L'immunoprécipitation de protéines de cellules HL60 radiomarquées au 32P-orthophosphate a permis de démontrer que la forme de 47 kD contient du phosphate, ainsi que celle de 29 kD. La séquence primaire de la myéloblastine ne contient pas de motifs connus de phosphorylation dans les cellules eucaryotes, nous suggérant que le phosphate est ajouté en bloc avec une autre composante. Cette protéase n'a pas de motif de liaison pour des acides nucléiques, et est emprisonnée dans les granules, suggérant que le phosphate est ajouté à la protéine, dès sa synthèse dans le réticulum endoplasmique. Nous avons aussi démontré par la technique de cytofluorométrie que l'antigène est exprimé à la surface membranaire des neutrophiles et des cellules HL60, en plus d'être présente sous forme libre dans les granules. Des inducteurs de dégranulation comme le TNF? et le PMA augmentent l'expression de surface de la myéloblastine dans les cellules HL60. Ces deux agents activent la dégranulation de ces cellules, impliquant que l'augmentation de l'expression membranaire de la myéloblastine est due à la fusion des membranes de granules avec la membrane plasmique. Ceci suggère qu'une partie de la myéloblastine est ancrée dans une membrane dès sa synthèse dans le réticulum endoplasmique. La séquence de l'ADNc de la myéloblastine n'a pas de séquences transmembranaires prédites pouvant permettre son ancrage dans la membrane. Donc, nous croyons que cette protéine doit subir une modification qui lui permet d'être liée à la membrane cytoplasmique. Les résultats présentés dans ce mémoire ne permettent pas d'affirmer quelle est cette modification. Cependant, nous suggérons que cette modification permet la liaison à la membranne plasmique. Parmi les hypothèse à envisager, il y a la modification du messager par épissage alternatif: de nouveaux exons pourraient substituer des exons déjà connus ou être ajoutés sur le transcrit primaire. La traduction de ces exons expliquerait la différence de poids moléculaire. Il y a aussi l'hypothèse voulant que la protéine soit modifiée de façon post-traductionnelle. Ainsi, la Mbn pourrait s'associer de façon covalente à une protéine transmembranaire. Aussi, la protéine pourrait être modifiée pour permettre la liaison à la membrane. Il a été décrit que des protéines peuvent être modifiées de façon post-traductionnelle par l'ajout en bloc, au niveau de réticulum endoplasmique, d'un groupement glycosyl-phosphatidylinositol (GPI). L'ajout d'un groupement GPI expliquerait la liaison à la membrane et la présence de phosphate sur la Mbn. Toutefois, il reste à démontrer que l'ajout d'un groupement GPI puisse modifier le poids moléculaire pour donner une forme de 47 kD. Nous avons également démontré que le PMA induit une diminution de la forme membranaire chez le neutrophile seulement. Le PMA génère également une forme de 47 kD extracellulaire (dans le surnageant des cellules) chez les neutrophiles. Ces données suggèrent qu'il existe un lien entre la forme de 47 kD et la forme membranaire de Mbn: la forme de 47 kD serait libérée de la membrane. Aussi ce phénomène peut être inhibé, car des neutrophiles traités avec une phospholipase D (PLD) exogène ne peuvent plus générer une forme p47 kD, induite normalement par le PMA. Nous n'avons pas encore déterminé si l'inhibition par la PLD est due à un effet pharmacologique sur les neutrophiles ou directement sur la myéloblastine membranaire. Nous avons également voulu déterminer quel type d'épitope est reconnu par un sérum cANCA typique. Nous avons déterminé qu'un des sera cANCA peut immunoprécipiter des déterminants linéaires, y compris des petits polypeptides de la myéloblastine de 12 et de 7.5 kD liés au 3H-DFP. Sachant que le site de liaison du DFP est situé sur la sérine catalytique, ceci nous indique que ce sérum contient des IgGs dirigées contre la partie carboxy terminale de la protéine. De plus, ce sérum est capable d'immunoprécipiter une phosphoprotéine de 15 kD, induite par le mannitol chez la bactérie Staphylococcus aureus. Cette immunoprécipitation peut être inhibée en fonction de la quantité de protéines de granules primaires des cellules HL60 préincubées avec le sérum. Ce sérum ayant des anticorps monospécifiques contre la myéloblastine, nous concluons que les cANCAs ont une réaction croisée avec cette phosphoprotéine, que l'on croit être le produit du gène EIIAmtl de S.aureus. La séquence publiée de cette protéine contient un motif de phosphorylation sur les histidines parfaitement conservé sur la séquence primaire de la myéloblastine (près du site de liaison au DFP), supportant l'hypothèse que les anticorps anti-myéloblastine (cANCA) pourraient être produits d'abord pour se défendre contre une infection de S.aureus, et par mimétisme moléculaire contre une protéine "soi": la myéloblastine. De plus, la myéloblastine est la seule protéine eucaryote (dans la banque de séquences EMBL) à posséder ce motif de phosphorylation, ce qui pourrait représenter un mécanisme d'autoimmunisation très spécifique. Ce mécanisme autoimmun serait un moyen possible de contourner la tolérance immunitaire et pourrait expliquer, compte tenu du rôle pathogénique possible de ces autoanticorps, l'importance déjà connue des infections bactériennes dans la granulomatose de Wegener

Is Genetic Discrimination Back on the Radar? A Commentary on the Recent Court of Appeal Reference Decision on the Genetic Non- Discrimination Act (GNDA)

In this commentary, we critically review the Quebec Court of Appeal’s reference decision to the effect that the Genetic Non-Discrimination Act (GNDA) is unconstitutional. In sum, the court held that the federal government exceeded its criminal law power through the GNDA, as the Act did not have a valid criminal law purpose. The decision was met with opposition, as advocacy groups for Canadians suffering from genetic diseases or genetic predispositions viewed the GNDA as a step in the right direction and were hopeful that it would offer protection from genetic discrimination. In closing, we argue that the consequences of the Court of Appeal’s opinion will be less dire than anticipated by some advocacy groups. In fact, we suggest that this decision brings about a unique opportunity for progress, where stakeholders can engage the public and policymakers in a forward- looking debate on the use of genetic information.Dans ce commentaire, nous examinons de façon critique la décision de renvoi de la Cour d’appel du Québec à l’effet que la Loi sur la non-discrimination génétique (LNDA) est inconstitutionnelle. En résumé, la Cour a conclu que le gouvernement fédéral a outrepassé ses pouvoirs en matière de droit pénal par l’entremise de la LNDA, car celle-ci n’avait pas d’objet valide en droit pénal. Cette décision a fait l’objet d’une opposition car les groupes de défense des intérêts des Canadiens souffrant de maladies génétiques ou de prédispositions génétiques considéraient la LNDA comme un pas dans la bonne direction et espéraient qu’elle offrirait une protection contre la discrimination génétique. En terminant, nous soutenons que les conséquences de l’avis de la Cour d’appel seront moins graves que ne le prévoient certains groupes de défense. En fait, nous suggérons que cette décision offre une occasion unique de progrès, où les intervenants peuvent faire participer le public et les décideurs à un débat tourné vers l’avenir sur l’utilisation de l’information génétique

Is Genetic Discrimination Back on the Radar? A Commentary on the Recent Court of Appeal Reference Decision on the Genetic Non- Discrimination Act (GNDA)

In this commentary, we critically review the Quebec Court of Appeal’s reference decision to the effect that the Genetic Non-Discrimination Act (GNDA) is unconstitutional. In sum, the court held that the federal government exceeded its criminal law power through the GNDA, as the Act did not have a valid criminal law purpose. The decision was met with opposition, as advocacy groups for Canadians suffering from genetic diseases or genetic predispositions viewed the GNDA as a step in the right direction and were hopeful that it would offer protection from genetic discrimination. In closing, we argue that the consequences of the Court of Appeal’s opinion will be less dire than anticipated by some advocacy groups. In fact, we suggest that this decision brings about a unique opportunity for progress, where stakeholders can engage the public and policymakers in a forward- looking debate on the use of genetic information

Darton local plan Technical papers

Incl. mapsSIGLEAvailable from British Library Lending Division - LD:84/31205(Darton) / BLDSC - British Library Document Supply CentreGBUnited Kingdo

LES ENJEUX QUÉBÉCOIS DE LA DISCRIMINATION GÉNÉTIQUE : L’EXPÉRIENCE D’UN FORUM EN LIGNE

La recherche empirique sur la problématique de la discrimination génétique (DG) au Québec est généralement limitée. À ce titre, cette étude vise, au moyen d’une méthodologie qualitative, à explorer et à recueillir les opinions, les expériences et les connaissances des Québécois à l’égard de la DG. En concordance avec les objectifs exploratoires de cette étude, nous avons choisi l’approche du forum en ligne afin de pouvoir extraire des données qualitatives représentant le plus fidèlement possible les perspectives du public québécois sur différents thèmes touchant la DG. L’expérience du forum indique que des craintes tangibles existent par rapport à la DG au Québec, et que s’exprime le besoin d’un débat de société sur cet important enjeu faisant partie intégrante de la révolution génétique et des soins de santé personnalisés.Empirical research regarding genetic discrimination (GD) in the province of Quebec is largely limited. As such, this study aims, through a qualitative methodology, to explore and collect the opinions, experiences and knowledge of Quebecers regarding GD. In accordance with the exploratory objectives of this study, we chose the online forum approach as a means to extract qualitative data that would most accurately represent the perspectives of the Quebec public on various themes relating to GD. Participants’ comments on the forum indicate that there are tangible fears concerning DG in Quebec as well as a need for social debate on this important issue, as an integral part of the genetic revolution and personalized healthcare