Expression and characterization of two alternatively spliced isoforms of rat type I receptor for inositol 1,4,5-trisphosphate

The transmembrane receptor for IP3 is a tetrameric calcium channel located in the endoplasmic reticulum. In many cell types the receptor mediates such complex signals as calcium waves and oscillations. There are multiple receptor isoforms, derived by alternative splicing as well as different genes. The functional significance of these many receptor isoforms has not been determined. To this end, I have generated cell lines that express homotetrameric receptors.Stable lines of the human embryonic kidney (HEK293) cells were established by transfection with cDNAs encoding for two splice variants of the rat type I receptor. The two variants differ in the presence (designated G) or absence (designated F) of a 15-amino acid segment, SI near the ligand-binding domain Both lines expressed a protein of molecular weight 260 kD, which was identified by sequence-specific polyclonal antibodies. Indirect immunofluorescence carried out on these cells localized the receptor to the endoplasmic reticulum. Like the cerebellar receptor, the expressed protein was a substrate (or cAMP-dependent protein kinase, and contained N-linked sugars. Moreover, the receptor isolated under non-denaturing conditions formed a high-molecular weight complex with a sedimentation profile consistent of a homotetramer.The homotetrameric receptors exhibited complex binding properties. There were multiple states in which the receptor bound IP3 cooperatively with different affinities, causing apparent inflections in the binding isotherm. These components may reflect distinct binding sites, or a single class of sites with altered affinities. Calcium acted as an allosteric modulator, shifting the receptor from a high-affinity state (K\150-20 nM) to a low-affinity state (K\180-200 nM). The inflections in the IP3 binding isotherms remained unaltered in the presence of calcium.While the two receptor isoforms had similar affinities for IP3, they interacted with calcium differently. Calcium promoted a sharp decrease of ligand binding in receptor subtype F but a rather gradual decline in G. When receptor function was monitored in live cells by imaging agonist-induced calcium release, the two cell lines also displayed different kinetics of the calcium wave form

Determination of cannabinoids in urine samples by sorbent packed microextraction and gas chromatography-mass spectrometry

Cannabis is the most consumed illicit drug worldwide, and its legal status is a source of concern. This study proposes a rapid procedure for the simultaneous quantification of ?9- tetrahydrocannabinol (THC), 11-hydroxy-?9-tetrahydrocannabinol (11-OH-THC), 11-nor9-carboxy-?9-tetrahydrocannabinol (THC-COOH), cannabidiol (CBD) and cannabinol (CBN) in urine samples. Microextraction by packed sorbent (MEPS) was used to preconcentrate the analytes, which were detected by gas chromatography-mass spectrometry. The procedure was previously optimized, and the final conditions were: conditioning with 50 µL methanol and 50 µL of water, sample load with two draw-eject cycles, washing with 310 µL of 0.1% formic acid in water with 5% isopropanol; the elution was made with 35 µL of 0.1% ammonium hydroxide in methanol. This fast extraction procedure allowed quantification in the ranges of 1-400 ng/mL for THC and CBD, 5-400 ng/mL for CBN and 11-OH-THC, and 10-400 ng/mL for THC-COOH with coefficients of determination higher than 0.99. The limits of quantification and detection were between 1-10 ng/mL using 0.25 mL of sample. The extraction efficiencies varied between 26 and 85%. This analytical method is the first allowing the determination of cannabinoids in urine sample using MEPS, being a fast, simple and low-cost alternative to conventional techniques.A canábis é a droga mais antiga e mais frequentemente consumida mundialmente, tornando-se na substância ilícita mais populares do século XXI. Portanto, o seu estatuto legal e a sua discriminização em vários países, atualmente é uma fonte de preocupação global. A canábis legalizada continua a causar preocupação por várias razões, nomeadamente: (1) as provas existentes de que a canábis tem um efeito prejudicial sobre as ligações neuronais do cérebro em desenvolvimento; (2) o facto de haver um crescimento nos pedidos de tratamento para a dependência da canábis a ocorrer mundialmente; (3) e os perigos do aumento da intoxicação pela canábis, especialmente na condução. Devido a estas razões, o contributo do desenvolvimento de investigações e métodos cada vez mais eficazes são extremamente importantes na área toxicológica. A urina é uma das amostras mais utilizadas para a deteção e quantificação de canabinóides, especialmente em laboratórios de despistagem de análise de drogas. Nesta matriz biológica é possível detetar metabolitos do ?9-tretahidrocanabinol (THC), principal composto psicoativo presente na cannabis, o ácido 11-nor-9-carboxi-?9- tretahidrocanabinol (THC-COOH) e ainda o 11-hidroxi-?9-tetrahydrocannabiol (11-OHTCH) que são utilizados como marcadores de consumo desta droga de abuso. São diversas às técnicas de extração ou de preparação da amostra utilizadas para isolar estes compostos da amostra biológica, entre elas a mais utilizada é extração de fase sólida (SPE). Versões miniaturizadas desta técnica, como por exemplo a microextração em seringa empacotada (MEPS), estão ainda pouco usadas. Esta técnica tem várias vantagens como a sua rapidez, sensibilidade, eficiência, e a redução de utilização de volumes de amostras e de solventes orgânicos utilizados, considerando-a amiga para o ambiente e para o utilizador. Com base nesta premissa, o presente estudo descreve o desenvolvimento, otimização e validação de um método analítico para a determinação de três canabinóides (cannabidiol (CBD), canabinol (CBN) e THC e dois metabolitos (11-OH-THC e THC-COOH) em urina com recurso à MEPS e à cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GCMS). A otimização do processo de extração foi realizada tendo em conta os principais parâmetros que afetam ao processo de microextração: número de aspirações de amostra (2), o número de lavagens do sorbente e o número de eluições (1). Para esta etapa recorreu-se à utilização da ferramenta estatística do desenho experimental (DOE). As condições finais foram: condicionamento com 50 µL de metanol e 50 µL de água, passagem da amostra com dois ciclos de aspiração e ejeção, lavagem com 310 µL de 0,1% de fórmico em água com 5% de isopropanol e a eluição foi feita com 35 µL de 0,1% de hidróxido de amónia em metanol. Após otimização, a metodologia foi validada seguindo normas internacionais de validação para bioanálise. Foram considerados parâmetros como seletividade, modelo de calibração e linearidade, limites de quantificação e deteção, precisão e exatidão de intra-dia, inter-dia e intermediada, eficiência do processo de extração, estabilidade e carryover. Foi obtida uma linearidade de 1-400 ng/mL para o THC e CBD, de 5-400 ng/mL para CBN e 11-OH-THC e de 10-400 ng/mL para THC-COOH, com um coeficiente de correlação em todos os casos superior a 0.99. As precisões e exatidão inter-dia, intra-dia e intermedia obtidas tiveram coeficientes de variação (CV) abaixo dos 15% e uma exatidão inferior ou igual a 15% para todos os compostos em estudo. As recuperações obtidas variaram entre 26% a 85%. Os resultados obtidos permitem afirmar que a técnica proposta apresenta uma excelente sensibilidade (1-10 ng/mL). O método desenvolvido foi ainda aplicado a amostras de indivíduos com suspeita de consumo de canábis. É necessário destacar que o procedimento descrito nesta dissertação é o primeiro trabalho que recorre à MEPS combinada com a GC-MS para identificação e quantificação de canabinóides em amostras de urina. Dada a rápida extração, os volumes de amostra e de solventes utilizados, além da possibilidade de reutilização do sorbente de extração, é possível considerar a metodologia proposta acessível para a maioria dos laboratórios de toxicologia

Promiscuity and the Evolution of Sexual Transmitted Diseases

We study the relation between different social behaviors and the onset of epidemics in a model for the dynamics of sexual transmitted diseases. The model considers the society as a system of individual sexuated agents that can be organized in couples and interact with each other. The different social behaviors are incorporated assigning what we call a promiscuity value to each individual agent. The individual promiscuity is taken from a distributions and represents the daily probability of going out to look for a sexual partner, abandoning its eventual mate. In terms of this parameter we find a threshold for the epidemic which is much lower than the classical fully mixed model prediction, i.e. $R_0$ (basic reproductive number) $= 1$. Different forms for the distribution of the population promiscuity are considered showing that the threshold is weakly sensitive to them. We study the homosexual and the heterosexual case as well.Comment: 6 pages, 4 figure

Intraosseous ganglion in the subchondral region of the lateral femoral condyle in an 11-year-old girl: a case report

We report the case of a patient with intraosseous ganglion in the lateral femoral condyle. An 11-year-old girl presented with right knee pain following a twisting injury. Plain radiographs of the knee showed a small circumscribed radiolucency with a thin sclerotic margin in the subchondral region of the lateral femoral condyle. Although the image findings and location are not typical, the lesion was tentatively diagnosed as osteochodritis dissecans. Six months after the conservative treatment with a break from vigorous sports activities, the size of the bony lesion had not decreased. Thus, we performed arthroscopy to make a definitive diagnosis. Arthroscopic examination revealed an area with dimple and surface irregularity at the lateral femoral condyle. On excision of the overlying tissue, the lesion was cystic containing brown mucous fluid. No association between the cyst and the articular structures was observed. Histologic examination of the resected cyst wall showed dense fibrous tissue with spotty areas of calcification. Base on these findings, we made a diagnosis of intraosseous ganglion. At the nine-month postoperative follow-up, the radiographic examination showed healing of the lesion. We speculate that the lesion in this case might have occurred as a result of repetitive overstress or microtrauma

Sistema agroindustrial do sorgo sacarino no Brasil e a participação público-privada: oportunidades, perspectivas e desafios.

Atualmente, há uma forte demanda do setor sucroalcooleiro no Brasil por matérias-primas e processos alternativos que sustentem a expansão de cultivos e a ocupação de áreas em renovação, o aumento dos níveis de produtividade agrícola e industrial e a redução de custos de produção, em arranjos integrados com os sistemas cana-planta e cana-indústria, para fins de produção de energia (etanol, cogeração, etc.). O sorgo sacarino é uma oportunidade para complementar o sistema agroindustrial cana- etanol - um setor competitivo, profissional e demandante de inovação (incremental ou disruptiva). Os cenários, nacional e internacional, de demanda por produtos da cana-de-açúcar (especialmente açúcar e etanol), mostram uma tendência de déficit de matéria-prima para os próximos 3 a 5 anos. As três safras anteriores demonstram queda de produção e redução nos níveis de produtividade agrícola, chegando a patamares críticos de 63 toneladas por hectare de cana, em regiões tradicionais do centro-sul do país. Em curto prazo (1 a 3 anos), o setor sucroalcooleiro brasileiro irá requerer, no mínimo, soluções para dois fatores críticos visando a implantação do sorgo sacarino como cultura complementar à cana-de-açúcar: disponibilidade de material genético produtivo e adequada implantação de um sistema de produção da cultura. Contudo, as empresas fornecedoras destas tecnologias são restritas. Decididamente, variedades produtivas e manejo adequado serão buscados pelo setor sucroalcooleiro neste curto prazo, enquanto o desenvolvimento de híbridos produtivos avança com resultados competitivos. Os empreendimentos e as empresas sabem que o êxito de seus negócios está ligado ao desempenho do setor em que a empresa atua e ao posicionamento da empresa neste setor. Portanto, a Embrapa se apresenta como um dos poucos players significativos neste mercado de tecnologia e conhecimento para o sorgo sacarino, visando negócios compartilhados para saltos de competitividade. A Embrapa tem por missão desenvolver tecnologia e conhecimento para o negócio agrícola, e, além de atender às atuais demandas de mercado, busca empreender em C&T para ofertar a tecnologia dos mercados futuros. Desde o início dos anos 80, a Embrapa Milho e Sorgo selecionou variedades de sorgo sacarino. Em fins da década de 1980 as variedades e os híbridos já apresentavam rendimentos entre 2.500 a 3.500 litros de etanol por hectare. Na década de 1990, este programa de melhoramento genético foi desacelerado. Entretanto, como estas cultivares apresentavam boa produtividade e qualidade de matéria verde, estes materiais se mantiveram no mercado, comercializados como plantas forrageiras. A partir de 2008, a Embrapa deu novo impulso ao seu programa de desenvolvimento de cultivares de sorgo sacarino, com base na variabilidade genética descrita, na agregação de valor em pré-melhoramento contida no banco de germoplasma de sorgo e na experiência de seu quadro funcional. Esse background e essa bagagem acumulados pelas ações de PD&I e negócios cooperativos em curso permitem disponibilizar para os mercados de sementes e de produção de etanol, em curtíssimo prazo, materiais genéticos com boa performance produtiva e rendimentos superiores. Genética de variedades e híbridos e boas práticas de manejo dos sistemas de produção associadas aos índices industriais são o negócio da Embrapa. A dimensão e a escala deste negócio agroindustrial orientam, formalmente, para as parcerias estratégicas. E os acordos de cooperação técnica, com confidencialidade e compartilhamento de responsabilidades, de agora em diante nortearão os novos negócios. Esse é um documento-síntese da contribuição da rede de PD&I Embrapa para esta agenda positiva que interessa aos negócios competitivos.bitstream/item/68879/1/doc-138-1.pd

Clinical reasoning in canine spinal disease: what combination of clinical information is useful?

Spinal disease in dogs is commonly encountered in veterinary practice. Numerous diseases may cause similar clinical signs and presenting histories. The study objective was to use statistical models to identify combinations of discrete parameters from the patient signalment, history and neurological examination that could suggest the most likely diagnoses with statistical significance. A retrospective study of 500 dogs referred to the Queen Mother Hospital for Animals before June 2012 for the investigation of spinal disease was performed. Details regarding signalment, history, physical and neurological examinations, neuroanatomical localisation and imaging data were obtained. Univariate analyses of variables (breed, age, weight, onset, deterioration, pain, asymmetry, neuroanatomical localisation) were performed, and variables were retained in a multivariate logistic regression model if P<0.05. Leading diagnoses were intervertebral disc extrusion (IVDE, n=149), intervertebral disc protrusion (n=149), ischaemic myelopathy (IM, n=48) and neoplasms (n=44). Multivariate logistic regression characterised IM and acute non-compressive nucleus pulposus extrusions as the only peracute onset, non-progressive, non-painful and asymmetrical T3-L3 myelopathies. IVDE was most commonly characterised as acute onset, often deteriorating, painful and largely symmetrical T3-L3 myelopathy. This study suggests that most spinal diseases cause distinctive combinations of presenting clinical parameters (signalment, onset, deterioration, pain, asymmetry, neuroanatomical localisation). Taking particular account of these parameters may aid decision making in a clinical setting

Comportamento produtivo de sorgo sacarino em função do arranjo de plantas, no município de Sinop-MT.

A cultura do sorgo sacarino se destaca no cenário nacional como uma interessante alternativa para a produção de etanol. Porém, para que a cultura possa expressar todo o seu potencial produtivo é necessário que o arranjo de plantas seja realizado de maneira adequada. Objetivou-se com esse trabalho avaliar o comportamento do sorgo sacarino, cultivar BRS 506, em diferentes espaçamentos e densidade de semeadura, durante duas safras agrícolas, no município de Sinop-MT. O delineamento experimental adotado foi o de blocos ao acaso, em esquema fatorial 5x4x2, sendo cinco espaçamentos de entre linhas (0,5; 0,6; 0,7; 0,8; e1 x0,5 metros), quatro populações de planta (80.000; 100.000; 120.000; 140.000 plantas ha -1 ) e duas safras agrícolas (2011/2012 e 2012/2013), com três repetições. Os parâmetros avaliados no dia da colheita foram: massa fresca de colmos, volume de caldo e teor de sólidos solúveis totais ( o Brix). De uma maneira geral, a produtividade da massa fresca de colmos e caldo não foi influenciada pela densidade de plantas, assim como, o o Brix da cultivar. Já o espaçamento de entre linha influenciou o rendimento da cultura. Na safra 2011/2012 os menores espaçamentos entre linhas apresentaram os maiores valores de rendimento, já na safra 2012/2013 observou-se comportamento oposto. O o Brix demonstrou comportamento diferenciado em função do ano de semeadura