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External development of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae in the subterranean termite Heterotermes tenuis Desenvolvimento dos fungos entomopatogĂȘnicos Beauveria bassiana E Metarhizium anisopliae no cupim subterrĂąneo Heterotermes tenuis
The subterranean termite Heterotermes tenuis is one of the main pests of sugarcane and eucalyptus in Brazil, and the use of entomopathogenic fungi, alone or associated to chemicals, is an efficient and environmentally favorable method for its control. Studies related to the fungal development on these insects are important due to the effect of insect behavior on entomopathogens. The objective of this work was to describe the external development of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae on H. tenuis using Scanning Electron Microscopy (SEM), determining the duration of the different phases of fungal infection. Two fixation techniques for preparing SEM samples were also evaluated. Worker specimens of H. tenuis were inoculated with a 1 x 10(9) conidia mL-1 suspension of the fungi and maintained at 25±1ÂșC and 70±10% relative humidity. Insects were collected from 0 to 144 hours after inoculation and prepared on SEM stubs for each of the two fixation techniques. The results obtained with the two techniques were compared and duration of the different phases of the infection process were estimated from SEM observations and compared for three fungal isolates. B. bassiana and M. anisopliae have similar development cycles on the termite, but some important differences exist. The penetration, colonization and conidiogenesis phases are relatively faster for M. anisopliae than for B. bassiana, which results in a faster rate of insect mortality. The fixation technique with OsO4 vapor is suitable for preparation of insects to be used in SEM observation of the developmental stages of entomopathogenic fungi.<br>O cupim subterrĂąneo Heterotermes tenuis , uma das principais pragas da cana-de-açĂșcar e eucalipto no Brasil, e o uso de fungos entomopatogĂȘnicos, isoladamente ou associados a produtos quĂmicos, Ă© um mĂ©todo eficiente e ambientalmente seguro para seu controle. Estudos relacionados ao desenvolvimento fĂșngico nestes insetos sĂŁo importantes devido ao efeito do comportamento dos insetos sobre entomopatĂłgenos. O objetivo deste trabalho foi descrever o desenvolvimento de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae sobre H. tenuis por meio da Microscopia EletrĂŽnica de Varredura (MEV), determinando a duração das fases de infecção fĂșngica. TambĂ©m foram avaliadas duas tĂ©cnicas de fixação para o preparo de amostras para MEV. OperĂĄrios de H. tenuis foram inoculados com suspensĂ”es fĂșngicas de 1 x 10(9) conĂdios mL-1 e mantidos a 25 ± 1ÂșC e umidade relativa de 70 ± 10%. Foram coletados insetos de 0 a 144 horas apĂłs a inoculação e preparados pelas duas tĂ©cnicas de fixação. Foram comparados os resultados obtidos com as duas tĂ©cnicas e estimadas e comparadas as duraçÔes das fases do processo de infecção para trĂȘs isolados fĂșngicos por meio de observaçÔes em MEV. B. bassiana e M. anisopliae tĂȘm ciclos de desenvolvimento semelhantes sobre H. tenuis, mas algumas diferenças importantes existem. As fases de penetração, colonização e conidiogĂȘnese sĂŁo relativamente mais rĂĄpidas para M. anisopliae que para B. bassiana, o que resulta em uma taxa mais rĂĄpida de mortalidade do inseto. A tĂ©cnica de fixação com vapor de OsO4 Ă© satisfatĂłria para preparação de insetos para observação do desenvolvimento de fungos entomopatogĂȘnicos em MEV