Regulation of Tacaribe mammarenavirus translation: Positive 5' and negative 3' elements and role of key cellular factors

Mammarenaviruses are enveloped viruses with a bisegmented negativestranded RNA genome that encodes the nucleocapsid protein (NP), the envelope glycoprotein precursor (GPC), the RNA polymerase (L), and a RING matrix protein (Z). Viral proteins are synthesized from subgenomic mRNAs bearing a capped 5' untranslated region (UTR) and lacking 3' poly(A) tail. We analyzed the translation strategy of Tacaribe virus (TCRV), a prototype of the New World mammarenaviruses. A virus-like transcript that carries a reporter gene in place of the NP open reading frame and transcripts bearing modified 5' and/or 3' UTR were evaluated in a cellbased translation assay. We found that the presence of the cap structure at the 5' end dramatically increases translation efficiency and that the viral 5' UTR comprises stimulatory signals while the 3' UTR,specifically the presence of a terminal C+G-rich sequence and/or a stem-loop structure, down-modulates translation. Additionally, translation was profoundly reduced in eukaryotic initiation factor (eIF) 4G-inactivated cells, whereas depletion of intracellular levels of eIF4E had less impact on virus-like mRNA translation than on a cell-like transcript. Translation efficiency was independent of NP expression or TCRV infection. Our results indicate that TCRV mRNAs are translated using a cap-dependent mechanism, whose efficiency relies on the interplay between stimulatory signals in the 5' UTR and a negative modulatory element in the 3' UTR. The low dependence on eIF4E suggests that viral mRNAs may engage yet-unknown noncanonical host factors for a cap-dependent initiation mechanism.Fil: Foscaldi, Sabrina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: D'antuono, Alejandra Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: Noval, María Gabriela. Fundación Instituto Leloir; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: de Prat Gay, Gonzalo. Fundación Instituto Leloir; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Scolaro, Luis Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Lopez, Nora Mabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología ; Argentin

Galectin‐8 activates dendritic cells and stimulates antigen‐specific immune response elicitation

Galectin‐8 (Gal‐8) is a mammalian β‐galactoside‐binding lectin, endowed with proinflammatory properties. Given its capacity to enhance antigen‐specific immune responses in vivo, we investigated whether Gal‐8 was also able to promote APC activation to sustain T cell activation after priming. Both endogenous [dendritic cells (DCs)] and bone marrow‐derived DCs (BMDCs) treated with exogenous Gal‐8 exhibited a mature phenotype characterized by increased MHC class II (MHCII), CD80, and CD86 surface expression. Moreover, Gal‐8‐treated BMDCs (Gal‐8–BMDCs) stimulated antigen‐specific T cells more efficiently than immature BMDCs (iBMDCs). Proinflammatory cytokines IL‐3, IL‐2, IL‐6, TNF, MCP‐1, and MCP‐5, as well as growth factor G‐CSF, were augmented in Gal‐8–BMDC conditioned media, with IL‐6 as the most prominent. Remarkably, BMDCs from Gal‐8‐deficient mice (Lgals8−/− BMDC) displayed reduced CD86 and IL‐6 expression and an impaired ability to promote antigen‐specific CD4 T cell activation. To test if Gal‐8‐induced activation correlates with the elicitation of an effective immune response, soluble Gal‐8 was coadministrated with antigen during immunization of BALB/cJ mice in the experimental foot‐and‐mouth disease virus (FMDV) model. When a single dose of Gal‐8 was added to the antigen formulation, an increased specific and neutralizing humoral response was developed, sufficient to enhance animal protection upon viral challenge. IL‐6 and IFN‐γ, as well as lymphoproliferative responses, were also incremented in Gal‐8/antigen‐immunized animals only at 48 h after immunization, suggesting that Gal‐8 induces the elicitation of an inflammatory response at an early stage. Taking together, these findings argue in favor of the use of Gal‐8 as an immune‐stimulator molecule to enhance the adaptive immune response.Instituto de VirologíaFil: Carabelli, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Laboratorio de Inmunología Molecular; ArgentinaFil: Quattrocchi, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: D'Antuono, Alejandra. Instituto de Ciencias y Tecnología “Dr. Cesar Milstein”. Centro de Virología Animal; ArgentinaFil: Zamorano, Patricia Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Tribulatti, María Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Laboratorio de Inmunología Molecular; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Laboratorio de Inmunología Molecular; Argentin

Desarrollo de nuevas herramientas biotecnológicas para el control de la Fiebre Hemorrágica Argentina

La Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) es una grave zoonosis endemoepidémica de la región central de nuestro país, con una población en riesgo estimada en más de 5 millones de individuos, y una tasa de mortalidad en ausencia de tratamiento que puede llegar al 30%. El virus Junín (JUNV), agente causal de la FHA, se clasifica dentro del grupo de los mammarenavirus del Nuevo Mundo. La prevención de la FHA consiste en la aplicación de la vacuna a virus atenuado Candid #1, producida en nuestro país. Si bien la vacuna ha demostrado ser efectiva y segura para la prevención de la enfermedad en áreas endémicas, presenta ciertas desventajas al igual que otras vacunas a virus atenuados. En particular, individuos inmunocomprometidos, niños y jóvenes de hasta 15 años y mujeres gestantes no pueden recibir la vacuna. Por otro lado, el riesgo de reversión de la atenuación no puede descartarse. El objetivo del presente trabajo es generar una plataforma vacunal alternativa para la FHA, basada en adenovirus humano tipo 5 (Ad) que exprese simultáneamente las proteínas estructurales Z, NP y GPC de JUNV, que serían relevantes para la inducción de una respuesta inmune efectiva. Para la obtención del candidato vacunal se utilizó el kit comercial ViraPowerTMAdenoviral Expression System. Brevemente, se generó el cassette de expresión Z:NP:GPC, donde los genes de las tres proteínas virales se encuentran fusionadas en fase por medio del péptido autoclivable 2A. Luego, el cassette fue clonado en el vector de entrada pENTR4, generándose el plásmido pENTR4-Z:NP:GPC. Por medio de recombinación in vitro entre el vector de entrada y el vector pAd-CMV-DEST se obtuvo el plásmido pAd- Z:NP:GPC, que contiene las secuencias de JUNV bajo regulación del promotor de cytomegalovirus, en el contexto del genoma de un Ad que carece de los genes para las proteínas virales E1 y E3. Para la obtención del adenovirus recombinante Ad-Z:NP:GPC, el vector pAd- Z:NP:GPC fue transfectado en células HEK293A. Esta línea celular suplementa en trans la proteína E1 al vector defectivo, posibilitando la formación de las partículas de adenovirus recombinantes. El Ad- Z:NP:GPC generado fue caracterizado mediante técnicas moleculares. La inserción de las secuencias foráneas en el genoma recombinante fue confirmada mediante PCR utilizando oligonucleótidos específicos para los transgenes. Para analizar la expresión de las proteínas heterólogas, células HEK293A fueron infectadas con el Ad-Z:NP:GPC y a las 24 horas, la presencia de Z, NP, y GPC en extractos celulares totales fue evaluada mediante Western blot utilizando sueros específicos para las proteínas de JUNV. Estos experimentos revelaron que el polipéptido Z:NP:GPC se expresa y es procesado correctamente por la proteasa 2A. En conclusión, se logró desarrollar un candidato que dirije la expresión de las proteínas estructurales mayoritarias de JUNV.Fil: Nuñez, Denise Anabel. Ministerio de Produccion y Trabajo. Secretaria de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virologia Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virologia Animal.; ArgentinaFil: Ziraldo, Micaela. Ministerio de Produccion y Trabajo. Secretaria de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virologia Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virologia Animal.; ArgentinaFil: Armella Sierra, Alicia Beatriz. Ministerio de Produccion y Trabajo. Secretaria de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virologia Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virologia Animal.; ArgentinaFil: López, N.. Ministerio de Produccion y Trabajo. Secretaria de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virologia Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virologia Animal.; ArgentinaFil: D'antuono, Alejandra Lorena. Ministerio de Produccion y Trabajo. Secretaria de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virologia Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virologia Animal.; ArgentinaXXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de VirologíaValle HermosoArgentinaSociedad Argentina de Virología. División de la Asociación Argentina de Microbiologí

Differential contribution of Tacaribe arenavirus Nucleoprotein N-terminal and C-terminal residues to nucleocapsid functional activity

The arenavirus nucleoprotein (NP) is the main protein component of viral nucleocapsids and is strictly required for viral genome replication mediated by the L polymerase. Homo-oligomerization of NP is presumed to play an important role in nucleocapsid assembly, albeit the underlying mechanism and the relevance of NP-NP interaction in nucleocapsid activity are still poorly understood. Here, we evaluate the contribution of the New World Tacaribe virus (TCRV) NP self-interaction to nucleocapsid functional activity. We show that alanine substitution of N-terminal residues predicted to be available for NP-NP interaction strongly affected NP self-association, as determined by coimmunoprecipitation assays, produced a drastic inhibition of transcription and replication of a TCRV minigenome RNA, and impaired NP binding to RNA. Mutagenesis and functional analysis also revealed that, while dispensable for NP self-interaction, key amino acids at the C-terminal domain were essential for RNA synthesis. Furthermore, mutations at these C-terminal residues rendered NP unable to bind RNA both in vivo and in vitro but had no effect on the interaction with the L polymerase. In addition, while all oligomerization-defective variants tested exhibited unaltered capacities to sustain NP-L interaction, NP deletion mutants were fully incompetent to bind L, suggesting that, whereas NP self-association is dispensable, the integrity of both the N-terminal and C-terminal domains is required for binding the L polymerase. Overall, our results suggest that NP self-interaction mediated by the N-terminal domain may play a critical role in TCRV nucleocapsid assembly and activity and that the C-terminal domain of NP is implicated in RNA binding. IMPORTANCE: The mechanism of arenavirus functional nucleocapsid assembly is still poorly understood. No detailed information is available on the nucleocapsid structure, and the regions of full-length NP involved in binding to viral RNA remain to be determined. In this report, novel findings are provided on critical interactions between the viral ribonucleoprotein components. We identify several amino acid residues in both the N-terminal and C-terminal domains of TCRV NP that differentially contribute to NP-NP and NP-RNA interactions and analyze their relevance for binding of NP to the L polymerase and for nucleocapsid activity. Our results provide insight into the contribution of NP self-interaction to RNP assembly and activity and reveal the involvement of the NP C-terminal domain in RNA binding.Fil: D'antuono, Alejandra Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: Loureiro, Maria Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: Foscaldi, Sabrina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: Marino, Cristina Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Lopez, Nora Mabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "dr. Cesar Milstein"; Argentin

Identification of Two Functional Domains within the Arenavirus Nucleoprotein▿

Tacaribe virus (TCRV) belongs to the Arenaviridae family. Its bisegmented negative-stranded RNA genome encodes the nucleoprotein (N), the precursor of the envelope glycoproteins, the polymerase (L), and a RING finger matrix (Z) protein. The 570-amino-acid N protein binds to viral RNA, forming nucleocapsids, which are the template for transcription and replication by the viral polymerase. We have previously shown that the interaction between N and Z is required for assembly of infectious virus-like particles (VLPs) (J. C. Casabona et al., J. Virol. 83:7029-7039, 2009). Here, we examine the functional organization of TCRV N protein. A series of deletions and point mutations were introduced into the N-coding sequence, and the ability of the mutants to sustain heterotypic (N-Z) or homotypic (N-N) interactions was analyzed. We found that N protein displays two functional domains. By using coimmunoprecipitation studies, VLP incorporation assays, and double immunofluorescence staining, the carboxy-terminal region of N was found to be required for N-Z interaction and also necessary for incorporation of N protein into VLPs. Moreover, further analysis of this region showed that the integrity of a putative zinc-finger motif, as well as its amino-flanking sequence (residues 461 to 489), are critical for Z binding and N incorporation into VLPs. In addition, we provide evidence of an essential role of the amino-terminal region of N protein for N-N interaction. In this regard, using reciprocal coimmunoprecipitation analysis, we identified a 28-residue region predicted to form a coiled-coil domain (residues 92 to 119) as a newly recognized molecular determinant of N homotypic interactions

Evolution of Canine Parvovirus in Argentina between years 2003 and 2010: CPV2c has become the predominant variant affecting the domestic dog population

The current frequency of Canine Parvovirus variants (CPV2a, CPV2b and CPV2c) in the Argentine dog population was investigated by PCR amplification of a 583. bp fragment in the VP2 gene. From a total of 79 rectal swab samples that have been submitted to our laboratory since 2008, 55 (69.6%) resulted positive and were further analyzed by direct DNA sequencing. Fifty positives samples (91%) were characterized as CPV2c variant, which appeared in Argentina in the year 2003 and has been the prevalent type since 2008, whereas CPV2a and CPV2b, still found in Argentine dogs, were represented in 3.6% and 5.4% of the population, respectively. Considering that CPV2c is spreading worldwide, and that this variant is also affecting vaccinated dogs, efforts should be made towards the development of new matched CPV vaccines.Fil: Gallo Calderon, Marina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: Romanutti, Carina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: D'antuono, Alejandra Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: Keller, Leticia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; Argentina. Fundación de Estudios en Virología Animal; ArgentinaFil: Mattion, Nora Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: la Torre, Jose Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; Argentin

Evaluation of the immune response elicited by vaccination with viral vectors encoding FMDV capsid proteins and boosted with inactivated virus

The aim of the present study was to assess the effect of introducing a priming step with replication-defective viral vectors encoding the capsid proteins of FMDV, followed by a boost with killed virus vaccines, using a suitable BALB/c mice model. Additionally, the immune response to other combined vector immunization regimens was studied. For this purpose, we analyzed different prime-boost immunizations with recombinant adenovirus (Ad), herpesvirus amplicons (Hs) and/or killed virus (KV) vaccines. The highest antibody titers were found in the group that received two doses of adjuvanted KV (P < 0.002). Antibody titers were higher in those groups receiving a mixed regimen of vectors, compared to immunization with either vector alone (P < 0.0001). Priming with any of the viral vectors induced a shift of the cytokine balance toward a Th1 type immune response regardless of the delivery system used for boosting. The highest IgG1 titer was induced by two doses of adjuvanted KV (P = 0.0002) and the highest IgG2a titer corresponded to the group primed with Ad and boosted with KV (P = 0.01). Re-stimulation of all groups of mice with 0.5 mg of inactivated virus five months later resulted in a fast increase of antibody titers in all the groups tested. After virus stimulation, antibody titers in the groups that received KV alone or Ad prime-KV boost, were indistinguishable (P = 0.800). Protection from challenge was similar (75%) in the groups of animals that received Ad prime-Hs boost or Ad prime-KV boost, or two doses of oil-adjuvanted KV. The data presented in this study suggest that sequential immunization with viral vectors-based vaccines combined with protein-based vaccines have the potential to enhance the quality of the immune response against FMDV.Fil: Romanutti, Carina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina; Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina;Fil: D'antuono, Alejandra Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina; Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina;Fil: Palacios, Carlos Adolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina;Fil: Quattrocchi, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina; Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria; Argentina;Fil: Zamorano, Patricia Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina; Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria; Argentina;Fil: la Torre, Jose Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina; Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina;Fil: Mattion, Nora Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina; Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina

Resurgence of canine parvovirus 2a strain in the domestic dog population from Argentina

Ninety-three rectal swab samples were taken, from dogs suspected of canine parvovirus (CPV) infectionand analyzed by PCR. A fragment of the VP2 gene, was amplified in 41 (44%) of them, resulting CPVpositive samples. Sequencing analysis of these PCR products showed that 37 samples (90.2%) belongedto the CPV2c type, whereas four samples (9.8%) were identified as CPV2a, which has not been found since2008.It was also found that 24 out of 37 CPV2c samples (65%), carried the mutation Thr440Ala, whereas thismutation was absent in the four CPV2a strains reported herein.Using phylogenetic analysis of the full length VP2 gene, which was amplified by PCR in six local samples,it was seen that CPV2a Argentine strains reported in this study, were genetically closer to a previouslocal CPV2a isolate (year 2003) and to a South African CPV2a strain, than to any of the recently reportedUruguayan CPV2a strains.The results obtained in this work, together with those reported previously in Uruguay strongly suggestthat, in spite of the geographical proximity, wild type CPV strains undergo different evolutive pathwaysin each country, resulting in the prevalence of different strains in related dog populations.Further extensive epidemiological studies are needed in order to improve the understanding of CPVevolution.Fil: Gallo Calderon, Marina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "Dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: Romanutti, Carina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "Dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: Wilda, Maximiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "Dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: D'antuono, Alejandra Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "Dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: Keller, Leticia. Fundación de Estudios en Virología Animal; ArgentinaFil: Giacomodonato, Mónica Nancy. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: Mattion, Nora Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "Dr. Cesar Milstein"; ArgentinaFil: la Torre, Jose Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencias y Tecnología "Dr. Cesar Milstein"; Argentin

Rapid methodology for antigenic profiling of FMDV field strains and for the control of identity, purity and viral integrity in commercial virus vaccines using monoclonal antibodies

Monoclonal antibodies (MAbs) developed against different foot-and-mouth disease virus (FMDV) vaccine strains were extensively used to study any possible antigenic variations during vaccine production in Argentine facilities. Additionally, a typing ELISA using strain specific MAbs was developed to detect potential cross contaminations among FMDV strains in master and working seeds with high specificity and sensitivity and to confirm strains identity in formulated vaccines. This assay was carried out for the South American strains currently in use in production facilities in Argentina (A24/Cruzeiro, A/Argentina/01, O1/Campos and C3/Indaial) and for the strain O/Taiwan, produced only for export to Asia. These non-cross reactive MAbs were also used to analyze the integrity of viral particles belonging to each one of the individual strains, following isolation of 140S virions by means of sucrose density gradients from the aqueous phase of commercial polyvalent vaccines. Antigenic profiles were defined for FMDV reference strains using panels of MAbs, and a coefficient of correlation of reactivity with these panels was calculated to establish consistent identity upon serial passages of master and production seeds. A comparison of vaccine and field strain antigenic profiles performed using coefficients of correlation allowed the rapid identification of two main groups of serotype A viruses collected during the last FMD epidemic in Argentina, whose reactivity matched closely to A/Argentina/2000 and A/Argentina/2001 strains.Fil: Seki, Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: Robiolo, Blanca. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: Periolo, Osvaldo Horacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: Iglesias, Nelida Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: D'antuono, Alejandra Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: Maradei, Eduardo. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Barros, Virginia. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica; ArgentinaFil: la Torre, Jose Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: Mattion, Nora Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentin

HSV-1 amplicon vectors launch the production of heterologous rotavirus-like particles and induce rotavirus-specific immune responses in mice.

International audienceVirus-like particles (VLPs) are promising vaccine candidates because they represent viral antigens in the authentic conformation of the virion and are therefore readily recognized by the immune system. As VLPs do not contain genetic material they are safer than attenuated virus vaccines. In this study, herpes simplex virus type 1 (HSV-1) amplicon vectors were constructed to coexpress the rotavirus (RV) structural genes VP2, VP6, and VP7 and were used as platforms to launch the production of RV-like particles (RVLPs) in vector-infected mammalian cells. Despite the observed splicing of VP6 RNA, full-length VP6 protein and RVLPs were efficiently produced. Intramuscular injection of mice with the amplicon vectors as a two-dose regimen without adjuvants resulted in RV-specific humoral immune responses and, most importantly, immunized mice were partially protected at the mucosal level from challenge with live wild-type (wt) RV. This work provides proof of principle for the application of HSV-1 amplicon vectors that mediate the efficient production of heterologous VLPs as genetic vaccines