Effects of heme oxygenase isozymes on Leydig cells steroidogenesis

In the present study, we demonstrate the expression of heme oxygenase (HO) isozymes, HO-1 and HO-2 (listed as HMOX1 and HMOX2 in the MGI Database), in MA-10 Leydig tumor cells and its effect on steroidogenesis. The well-known HO inducer, hemin, increased both HO-1 and HO-2 protein levels and HO-specific activity. Induction of HO by hemin inhibited basal, hCG-, and dibutyryl cAMP (db-cAMP)-induced steroidogenesis in a reversible way. When we studied the effect of HO isozymes along the steroid synthesis, we found that steroidogenic acute regulatory protein levels were decreased, and the conversion of cholesterol to pregnenolone was inhibited by hemin treatment, with no changes in the content of cholesterol side-chain cleavage enzyme (P450scc). hCG and db-cAMP also stimulated the expression of HO-1 and HO-2, and HO enzymatic activity in MA-10 cells. Basal and hCG-stimulated testosterone synthesis was also inhibited by hemin in rat normal Leydig cells. Taken together, these results suggest that: i) at least one of HO products (presumably carbon monoxide) inhibits cholesterol transport to the inner mitochondrial membrane and Leydig cell steroidogenesis by binding to the heme group of the cytochrome P450 enzymes, in a similar way as we described for nitric oxide, and ii) hCG stimulation results in the induction of an antioxidant enzymatic system (HO) acting as a cytoprotective mechanism in Leydig cells, as already demonstrated in the adrenal gland.Fil: Piotrkowski, Barbara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Monzón, Casandra Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Reche, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Besio Moreno, Marcos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Moderate exercise prevents insulin resistance and changes in adrenocortical morphology and function in rats fed a sucrose-enriched diet

Introducción: niveles elevados de glucocorticoides se asocian a las alteraciones somáticas y bioquímicas presentes en los pacientes y en animales con insulinorresistencia (IR). Hemos demostrado previamente que la IR inducida por una dieta rica en sacarosa (DRS) induce cambios morfológicos y funcionales a nivel adrenocortical y que estas alteraciones pueden evitarse mediante la administración simultánea de un agonista PPAR-γ. Objetivos: en el presente estudio evaluamos el impacto de un protocolo de ejercicio moderado sobre las alteraciones morfológicas y funcionales adrenocorticales asociadas con el desarrollo de IR inducida por una DRS administrada durante siete semanas.Metodología. Resultados: los animales (ratas Wistar macho adultas) tratados con la DRS (agregado de sacarosa al 30% en el agua de bebida) mostraron un incremento del peso corporal y de los panículos adiposos, así como de los niveles séricos de glucosa, insulina y triglicéridos. La respuesta glucémica a la administración de insulina i.p. se vio claramente menoscabada. Se observó una infiltración lipídica de la corteza adrenal, con aumento de la expresión de proteínas esteroidogénicas y marcadores de inflamación (IL-1β, TNF-α, iNOS, COX-2) y un incremento marcado de la corticosteronemia basal. El protocolo de ejercicio consistió en correr en una cinta continua adaptada especialmente durante un máximo de 7 min/día. Este ejercicio moderado previno la aparición de los cambios somáticos y bioquímicos característicos del estado de IR y la infiltración lipídica adrenocortical, revirtiendo además los cambios inflamatorios y normalizando la corticosteronemia. Conclusiones: nuestros resultados subrayan el rol deletéreo del consumo exagerado de carbohidratos simples conteniendo fructosa y sugieren que el ejercicio moderado podría tener efectos adicionales cuando se emplea en el tratamiento de la IR.Introduction: a sustained elevation of glucocorticoid production has been associated with the somatic and biochemical changes observed in insulin-resistant patients and in animal models of insulin resistance (IR) as well. We previously demonstrated that sucrose-induced IR affects adrenocortical morphology and function, and that these abnormalities could be prevented by the administration of an insulin-sensitizing PPAR-γ agonist. Objetives: in this study, we analyzed the impact of moderate exercise on changes in adrenocortical function and morphology associated with the development of IR, generated in male adult rats by the addition of 30% sucrose to the drinking water for 7 weeks. Methodology. Results: body and adipose tissue weights increased in sucrose-treated animals, who also displayed higher glycemic and insulinemic levels as well as hypertriglyceridemia. An altered glycemic response to an i.p. insulin test was also detected. Adrenal glands showed a neutral lipid infiltration and increased expression levels of StAR, CYP11A1, IL-1β, TNF-α, iNOS and COX-2. Furthermore, sucrose-treated animals exhibited higher basal corticosterone levels. Exercise training sessions consisted of running on an adapted motorized treadmill for up to 7 min/day. This moderate exercise protocol fully prevented the instauration of the IR-associated somatic and metabolic changes as well as the lipidic infiltration of the adrenal glands, and reversed the inflammatory changes and the increase in corticosterone output. Conclusions: our results underline the negative impact of high dietary fructose consumption, and suggest that moderate exercise could exert additional beneficial effects when employed as a therapeutic strategy in the management of IR.Fil: Martinez Calejman, Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Mercau, María Elisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Repetto, Esteban Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Astort, Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Arias, Pablo. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Cs.médicas. Escuela de Cs.médicas. Cátedra de Fisiología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentin

Effects of GABA B receptor agonists and antagonists on glycemia regulation in mice

γ-Aminobutyric acid (GABA) inhibits insulin secretion through GABAB receptors in pancreatic β-cells. We investigated whether GABAB receptors participated in the regulation of glucose homeostasis in vivo. BALB/c mice acutely pre-injected with the GABAB receptor agonist baclofen (7.5 mg/kg, i.p.) presented glucose intolerance and diminished insulin secretion during a glucose tolerance test (GTT, 2 g/kg body weight, i.p.). The GABAB receptor antagonist 2-hydroxysaclofen (15 mg/kg, i.p.) improved the GTT and reversed the baclofen effect. Also a slight increase in insulin secretion was observed with 2-hydroxysaclofen. In incubated islets 1.10−5 M baclofen inhibited 20 mM glucose-induced insulin secretion and this effect was reversed by coincubation with 1.10−5 M 2-hydroxysaclofen. In chronically-treated animals (18 days) both the receptor agonist (5 mg/kg/day i.p.) and the receptor antagonist (10 mg/kg/day i.p.) induced impaired GTTs; the receptor antagonist, but not the agonist, also induced a decrease in insulin secretion. No alterations in insulin tolerance tests, body weight and food intake were observed with the treatments. In addition glucagon, insulin-like growth factor I, prolactin, corticosterone and growth hormone, other hormones involved in glucose metabolism regulation, were not affected by chronic baclofen or 2-hydroxysaclofen. In islets obtained from chronically injected animals with baclofen, 2-hydroxysaclofen or saline (as above), GABAB2 mRNA expression was not altered. Results demonstrate that GABAB receptors are involved in the regulation of glucose homeostasis in vivo. Treatment with receptor agonists or antagonists, given acutely or chronically, altered glucose homeostasis and insulin secretion alerting to the need to evaluate glucose metabolism during the clinical use of these drugs.Fil: Bonaventura, Maria Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Crivello, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ferreira, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Repetto, Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Libertun, Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Lux Lantos, Victoria A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Involvement of nitric oxide synthase in the mechanism of histamine-induced inhibition of Leydig cell steroidogenesis via histamine receptor subtypes in Sprague-Dawley rats

The present study was conducted to shed light on the so far unexplored intracellular mechanisms underlying negative modulation of Leydig cell steroidogenesis by histamine (HA). Using the MA-10 cell line and highly purified rat Leydig cells as experimental models, we examined the effect of the amine on biochemical steps known to be modulated by HA, or involved in LH/hCG action. In agreement with previous findings, HA at 10 microM showed a potent inhibitory effect on hCG-stimulated steroid synthesis, regardless of the gonadotropin concentration used. Moreover, HA not only decreased LH/hCG-induced cAMP production but also steroid synthesis stimulated by the permeable cAMP analog dibutyryl cAMP (db-cAMP). Considering the post-cAMP sites of HA action, it is shown herein that HA markedly inhibited db-cAMP-stimulated acute regulatory (STAR) protein expression, as well as steps catalyzed by P450-dependent enzymes, mainly the conversion of cholesterol to pregnenolone by cholesterol side-chain cleavage enzyme (CYP11A). The antisteroidogenic action of HA was blocked by addition of the PLC-inhibitor U73122, and HA significantly augmented IP3 production, suggesting a major role for the PLC/IP3 pathway in HA-induced inhibition of Leydig cell function. Finally, HA increased nitric oxide synthase (NOS) activity, and the NOS inhibitor L-N(G)-nitro-arginine methyl ester (L-NAME) markedly attenuated the effect of the amine on steroid synthesis. On the basis of our findings, HA antagonizes the gonadotropin action in Leydig cells at steps both pre- and post-cAMP formation. NOS activation is the main intracellular mechanism by which HA exerts its antisteroidogenic effects.Fil: Mondillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Química Biologica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; ArgentinaFil: Piotrkowski, Barbara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Reche, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Patrignani, Zoraida Judith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Melatonin prevents early pituitary dysfunction induced by sucrose-rich diets

While physiological levels of glucocorticoids are required to ensure proper functions of the body, consistently high levels may engender several deleterious consequences. We have previously shown an increase in the activity of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis in rats fed sucrose-rich diets (SRD). The main goal of this study was to analyze the processes involved in the modulation of the pituitary production of ACTH by SRD, and to test melatonin as a possible therapeutic agent for the prevention of the HPA axis dysfunction. Male Wistar rats were fed standard chow and either SRD (30% sucrose in the drinking water) or plain water for three weeks. Melatonin was administered as subcutaneous pellets. Results showed that SRD treatment induced an increase in systemic ACTH and corticosterone levels and a decrease in melatonin levels. In the pituitary gland, we also detected an increase in the expression levels of proopiomelanocortin (POMC) that was accompanied by increased levels of: lipoperoxides, nitro-tyrosine modified proteins, catalase, heme oxygenase-1, interleukin-1β mRNA, and by an increase in the tissue number of inflammatory cells (F4/80 and Iba-1 positive cells). Melatonin treatment prevented all these systemic and pituitary changes as well as the increase in POMC expression induced by incubation of AtT-20 corticotrophs with conditioned media obtained from stimulated macrophages. In conclusion, stimulation of POMC/ACTH production in rats fed a SRD could involve the generation of oxidative stress and inflammation in the pituitary gland. Melatonin treatment prevented these effects and normalized the activity of the HPA axis.Fil: Mercau, María Elisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Calanni, Juan Salvador. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Aranda, Marcos Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Caldareri, Lilian Julia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Rosenstein, Ruth Estela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Repetto, Esteban Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentin

Functional autoreactive anti-β2 adrenergic antibodies may contribute to insulin resistance profile in patients with chronic chagas disease

Potential activation of β2 adrenergic receptors (β2AR) by specific autoreactive antibodies (Abs) that arise during the host reaction to Trypanosoma cruzi, could contribute to the elevated prevalence of metabolic disturbances described in patients with chronic Chagas disease (CCD). This study aimed to determine the prevalence of anti-β2AR Abs in patients with CCD, as well as the correlation of these Abs with the presence of glucose and lipid metabolism disturbances, in order to explore their association with an insulin resistance profile. Additionally, we tested the functional effects of anti-β2AR Abs employing an in vitro bioassay with neuroendocrine cells expressing β2AR. A clinical and metabolic evaluation including an OGTT was performed in 80 CCD patients and 40 controls. Anti-β2AR Abs were measured by an in-house-developed ELISA, and the β2 adrenergic activity of affinity-purified IgG fractions from patient’ sera were assayed in CRE-Luc and POMCLuc transfected AtT-20 cells. A higher proportion of dysglycemia (72.5% vs. 37.5%; p = 0.001) was observed in the CCD group, accompanied by increased HOMA2-IR (p = 0.019), especially in subjects with Abs (+). Anti-β2AR Abs reactivity (7.01 (2.39–20.5); p = 0.0004) and age >50 years (3.83 (1.30–11.25); p = 0.014) resulted as relevant for IR prediction (AUC: 0.786). Concordantly, Abs (+) CCD patients showed elevated metabolic risk scores and an increased prevalence of atherogenic dyslipidemia (p = 0.040), as compared to Abs (−) patients and controls. On functional bioassays, Abs exerted specific and dose-dependent β2-agonist effects. Our findings suggest that anti-β2AR Abs may induce the activation of β2AR in other tissues besides the heart; furthermore, we show that in patients with CCD these Abs are associated with an insulin resistance profile and atherogenic dyslipidemia, providing biological plausibility to the hypothesis that adrenergic activation by anti-β2AR Abs could contribute to the pathogenesis of metabolic disturbances described in CCD patients, increasing their cardiovascular risk.Fil: Rodeles Antonelli, Luz María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Vicco, Miguel Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Siano, Alvaro Sebastían. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Química Organica. Laboratorio de Peptidos Bioactivos; ArgentinaFil: Fuchs, Leonardo Andrés. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Peverengo, Luz María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; ArgentinaFil: Sanchez Puch, Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; ArgentinaFil: Arias, Pablo. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Cátedra de Fisiología Humana; Argentin

KSHV G-protein coupled receptor vGPCR oncogenic signaling upregulation of Cyclooxygenase-2 expression mediates angiogenesis and tumorigenesis in Kaposi's sarcoma

Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) vGPCR is a constitutively active G protein-coupled receptor that subverts proliferative and inflammatory signaling pathways to induce cell transformation in Kaposi's sarcoma. Cyclooxygenase-2 (COX-2) is an inflammatory mediator that plays a key regulatory role in the activation of tumor angiogenesis. Hereby we demonstrate, using two different transformed mouse models, and tumorigenic full KSHV genome-bearing cells, including KSHV-Bac16 based mutant system with a vGPCR deletion, that vGPCR upregulates COX-2 expression and activity, signaling through selective MAPK cascades. We show that vGPCR expression triggers signaling pathways that upregulate COX-2 levels due to a dual effect upon both its gene promoter region and, in mature mRNA, the 3'UTR region that control mRNA stability. Both events are mediated by signaling through ERK1/2 MAPK pathway. Inhibition of COX-2 in vGPCR-transformed cells impairs vGPCRdriven angiogenesis and treatment with the COX-2-selective inhibitory drug Celecoxib produces a significant decrease in tumor growth, pointing to COX-2 activity as critical for vGPCR oncogenicity in vivo and indicating that COX-2-mediated angiogenesis could play a role in KS tumorigenesis. These results, along with the overexpression of COX-2 in KS lesions, define COX-2 as a potential target for the prevention and treatment of KSHV-oncogenesis.Fil: Medina, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: D´Agostino, Agata. University Of Miami Miller School Of Medicine; Estados UnidosFil: Ma, Qi. University Of Miami Miller School Of Medicine; Estados UnidosFil: Eroles, Pilar. University Of Miami Miller School Of Medicine; Estados UnidosFil: Cavallin, Lucas. University Of Miami Miller School Of Medicine; Estados UnidosFil: Chiozzini, Chiara. Miller School Of Medicine; Estados UnidosFil: Sapochnik, Daiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Hyjek, Elizabeth. University of Chicago; Estados UnidosFil: Cesarman, Ethel. Cornell University; Estados UnidosFil: Naipauer, Julian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Mesri, Enrique Alfredo. University Of Miami Miller School Of Medicine; Estados UnidosFil: Coso, Omar Adrian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentin

Composición de mezclas de glicéridos ricas en monoglicéridos - Influencia de las condiciones operatorias de obtención - Ensayos de acetilación

Se presente una revisión acerca de los distintos procedimientos para la obtención de productos ricos en monoglicéridos de ácidos grasos. Se hace una discusión de las técnicas mencionadas en ls literatura que operan por glicerolisis de triglicéridos en presencia de distintos catalizadores y en sistemas homogéneos y heterogéneos. Se presente una información resumida acerca de la utilización de productos ricos en monoglicéridos y sobre la producción, propiedades y usos de las llamadas grasas acetiladas ("acetin fate"). Como contribución experimental se aborda la producción, en escala de laboratorio, de productos ricos en monoglicéridos de ácidos grasos saturados puros y de mezclas de monoglicéridos de ácidos monoetilénicos. Con este fin y tomando como base la técnica descriptiva por Mattil y Sims, se realizan los siguientes ensayos: OBTENCION DE ESTERES METILICOS PUROS DE LOS ACIDOS CAPRILICO, LAURICO, PALMITICO Y ARAQUIDICO. Se obtienen los esteres metílicos puros de los ácidos caprílico, láurico, palmítico y araquídico. Operando con ácidos técnicos, se esterifican con metanol y ácido sulfúrico como catalizador; los ésteres metílicos obtenidos se fraccionan por destilación en columna, en vacío variable según los casos. Se obtienen fracciones de destilación de por sí puras o que se redestilsn. Los productos finales se controlan en su pureza por determinación de algunas de sus constantes químicas y por cromatografía gas-líquido. GLICEROLISIS DE LOS ESTERES METILICOS. Se realizan las glicerolisis de los ésteres metílicos puros operando a 96-98 °C, en sistema homogéneo (piridina) y en presencia de metóxido de sodio como catalizador. Los productos brutos de glicerolisis se aislan por extracción con éter etílico luego de salificar con ácido clorhídrico el catalizador y la piridina. Tales productos se analizan, determinando principalmente sus valores de acidez libre y sus contenidos en l-monoglicéridos (Bohle y Mehlenbacher). Se ha podido establecer que, con esta técnica de preparación, los productos brutos de glicerolisis contienen entre 52,5 y 63,0 % de l-monoglicéridos y una acidez libre que varía entre 3,6 y 10,2 % (expresada en los ácidos respectivos). Los valores de acidez libre son función de la cantidad de catalizador presente. FRACCIONAMIENTO CON HEXANO TECNICO. Con el objeto de obtener productos de alta concentración en monoglicéridos y luego de considerar los antecedentes bibliográficos existentes, se resuelve proceder por cristalización fraccionada con hexano técnico de los productos brutos de las glicerolisis. Estos se disuelven por reflujo o a la temperatura ambiente (según los casos) en suficiente cantidad de hexano para obtener soluciones saturadas en esas condiciones, estacionando luego por 24 a 48 horas a las temperaturas de 20 o de 7°C, según el peso molecular del ácido considerado. Los insolubles obtenidos se analizan, habiéndose podido establecer que representan entre el 42,3 y el 67,4 % de los productos brutos de glicerolisis. Los contenidos en l-monoglicéridos de estos insolubles oscilan entre 83,3 y 94,6 %. Los l-monoglicéridos contenidos en los insolubles representan el 63 al 99% de los l-monoglicéridos de partida (en tres de los cuatro casos considerados estos valores fueron: 92,0; 95,8 y 99,3%). Los valores de acidez libre son nulos o despreciables. Los índices de acetilo y de saponificación coinciden con los valores teóricos correspondientes a los monoglicéridos puros, de lo que se deduce la presencia de 2-monoglicéridos. La temperatura de fusión de cada uno de estos monoglicéridos, solidificados previa fusión u obtenidos por recristalización de solventes, parece confirmar lo señalado en la bibliografía en el sentido de que las velocidades de transformación de las formas más inestables hacia las más estables, decrecen sensiblemente al aumentar el peso molecular del ácido. Por aplicación de la técnica de isomerización con ácido perclórico (Brokaw, Perry y Lyman) seguida de determinación de l-monoglicéridos, se confirma la existencia de 2-monoglicéridos en aproximadamente un 10% de los monoglicéridos totales, en las condiciones de equilibrio. GLICEROLISIS DE ESTERES METILICOS DE ACIDOS EN C20 _ 22 DE ACEITE DE NABO. Partiendo de los ácidos totales de un aceite de semilla de nabo fraccionados según Twitchell (Jabones de plomo en etanol), se aislan los ácidos "sólidos", que se transforman en sus ésteres metílicos y fraccionan por destilación en vacío. Se reúnen fracciones principalmente formadas por eicosenoato y docosenoato de metilo, que se someten a glicerolisis según el procedimiento anterior. Los productos brutos de glicerolisis se analizan y fraccionan por hexano. Los resultados obtenidos con ácidos monoetilénicos son similares a los observados con ácidos saturados puros. FRACCIONAMIENTO POR HEXANO DE UN MONOESTEARATO DE GLICERILO TECNICO DEL COMERCIO. Operando con un monoglicérido técnico del comercio obtenido por glicerolisis de un aceite vegetal parcialmente hidrogenado, se ensaya su enriquecimiento en monoglicéridos por cristalización en hexano. Luego de dos recristalizaciones se obtiene un producto con 80% de l-monoglicéridos (monoglicéridos % en el producto inicial: 36,5), con un valor de recuperación del 40% respecto de los monoglicéridos iniciales. El bajo rendimiento observado se atribuye a la complejidad del producto de partida, ya que su alto índice de iodo (73,8) indicaba que era muy rico en ácidos no saturados, sin duda monoetilénicos y constituidos por un gran número de isómeros de posición y por los respectivos isómeros geométricos cis-trans. ENSAYOS DE FORMACION DE ADUCTOS CON UREA A PARTIR DE MONOGLICERIDOS ACETILADOS. Operando con monoglicéridos puros acetilados de ácidos saturados en C8 a C2o se establece que tales productos no producen compuestos de inclusión con urea. Del mismo modo se comportan los monoglicéridos acetilados de ácidos monoetilénicos en C20 y C22.Fil:Rotsztein de Cymeryng, Fanny. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Induction of nitric oxide synthase activity in adrenal cells

The induction of nitric oxide synthase (NOS) II by bacterial lypopolysaccharide (LPS) was studied in a steroidogenic mouse tumor adrenal cell line (Y1). Conditioned media from LPS-stimulated peritoneal macrophages induced an increase in NOS II expression as shown by western and northern blot analysis. Accordingly, in the presence of conditioned media an increase in nitrite levels was observed. In addition, steroid production was significantly decreased. In conclusion, NOS II expression could be induced in steroidogenic cells with a concomitant inhibition of steroid production.Fil: Cymeryng, Cora Betriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Lotito, S.P.. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Colonna, C.. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Cornejo Maciel, Maria Fabiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Podestá, E. J.. Universidad de Buenos Aires; Argentin

The rapid release of corticosterone from the adrenal induced by ACTH is mediated by nitric oxide acting by prostaglandin E(2)

The adrenal cortex is a major stress organ in mammals that reacts rapidly to a multitude of external and internal stressors. Adrenocorticotropin (ACTH) is the main stimulator of the adrenal cortex, activating corticosteroid synthesis and secretion. We evaluated the mechanism of action of ACTH on adrenals of male rats, preserving the architecture of the gland in vitro. We demonstrated that both sodium nitroprusside (NP), a nitric oxide (NO) donor, and ACTH stimulate corticosterone release. NO mediated the acute response to ACTH because Nω-nitro-l-arginine methyl ester, a NO synthase inhibitor, and hemoglobin, a NO scavenger, blocked the stimulation of corticosterone release induced by ACTH. NP stimulated prostaglandin E release, which in turn stimulated corticosterone release from the adrenal. Additionally, indomethacin, which inhibits cyclooxygenase, and thereby, prostaglandin release, prevented corticosterone release from the adrenal induced by both NP and ACTH, demonstrating that prostaglandins mediate acute corticosterone release. Corticosterone content in adrenals after incubation with ACTH or NP was lower than in control glands, indicating that any de novo synthesis of corticosterone during this period was not sufficient to keep up with the release of the stored hormone. The release induced by ACTH or NP depleted the corticosterone content in the adrenal by ≈40% compared with the content of glands incubated in buffer. The mechanism of rapid release is as follows: NO produced by NO synthase activation by ACTH activates cyclooxygenase, which generates PGE(2), which in turn releases corticosterone stored in microvesicles and other organelles