Molecular analysis of telomeric regions in lymphoid malignancies

Los telómeros son estructuras esenciales para el mantenimiento de la integridad cromosómica y la capacidad replicativa de la célula. La reducción de la longitud telomérica está asociada con cambios genómicos relacionados al proceso tumoral. En este trabajo se efectuó la caracterización molecular de la longitud telomérica mediante el estudio de los fragmentos de restricción terminal (TRFs), en Mieloma Múltiple (MM), Linfoma no-Hodgkin (LNH) y Enfermedad Celíaca (EC), patología con predisposición al desarrollo de linfomas malignos. En MM se observó una disminución de la longitud telomérica respecto de controles, detectándose una correlación negativa con el porcentaje de células plasmáticas en médula ósea y asociación con cariotipos anormales, postulándose a los TRFs como marcadores tumorales. En LNH se observó acortamiento telomérico en linfomas foliculares y B difusos a células grandes, indicando su participación en la progresión tumoral y sustentando diferentes mecanismos patogénicos para estas patologías. En EC se apreció una disminución de la longitud telomérica tejido-específica en biopsias intestinales, sugiriendo un rol relevante de este parámetro en la predisposición al desarrollo neoplásico de esta entidad. Los hallazgos de este estudio sustentan la asociación entre acortamiento telomérico e incremento de la inestabilidad cromosómica, factores que combinados con la desregulación de la proliferación celular podrían promover el desarrollo y la progresión neoplásica.Telomeres are essential structures critical for maintaining chromosomal integrity and stability and cell surveillance. Telomere shortening is associated to genomic changes related to carcinogenesis. In this work we studied telomere length by analyzing terminal restriction fragments (TRF) in multiple myeloma (MM), non-Hodgkin lymphoma (NHL) and celiac disease (CD), pathology prone to lymphoma development. In MM, we observed telomere reduction respect to controls. A strong correlation of telomere length values with bone marrow plasma cell infiltration and an association with abnormal karyotypes were found, suggesting TRFs as tumor markers. In NHL, telomere shortening was observed in follicular and diffuse large B-cell lymphoma, indicating the participation of telomere shortening in tumor progression and supporting the existence of diverse pathogenic mechanisms involved in the origin of these different lymphoma subtypes. In CD, TRF analysis showed a tissue-specific significant telomere shortening in small intestinal biopsies, determining an important role of telomere length in cancer predisposition observed in this disorder. Our findings support the association between telomere shortening and an increased chromosome instability, both factors combined with cell proliferation disregulation would promote the cancer development and neoplastic progression.Fil: Cottliar, Alejandra Silvina Haydeé. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Inestabilidad cromosómica en enfermedades con predisposición al desarrollo neoplásico

Actualmente se considera que el cáncer es el resultado de una serie de eventos genéticos progresivos que llevan a la acumulación de alteraciones en genes específicos. Estudios realizados en los últimos años indican la existencia de anomalías cromosómicas asociadas a los distintos tipos de neoplasias, encontrándose diferentes cromosomas, regiones y bandas preferencialmente involucradas. Si bien hasta el presente no se conocen con exactitud los mecanismos por medio de los cuales se originan las anomalías cromosómicas en las células neoplásicas, se considera que las mismas estarían asociadas a una fragilidad cromosómica aumentada, causada por una inestabilidad genómica constitucional o por una exposición a clastógenos ambientales. Dado que dicha inestabilidad genómica resulta dificil de medir, la misma puede ser evaluada mediante el análisis de la inestabilidad cromosómica. El objetivo de este trabajo es estudiar la presencia de inestabilidad cromosómica medida a partir del análisis de asociaciones teloméricas (TAS), aberraciones cromosómicas (AC) e intercambio de cromátides hermanas (lCH) en patologías con predisposición al desarrollo neoplásico: colitis ulcerosa (CU), enfermedad de Crohn (EC) y pancreatitis crónica (PC). Se analizaron 36 pacientes: 25 con CU, 3 EC y 8 con PC y 24 controles, efectuándose cultivos de sangre periférica en medio F-lO suplementado con 15% de suero fetal bovino y PHA, durante 72 hs a 37°C, con el agregado de 5-bromo-2-deoxiuridina (BUDR) (lOug/ml) para 1;:evaluación de lCH. El análisis cromosómico se realizó con técnica standard y bandeo G secuencial. La evaluación estadística se efectuó mediante el test no paramétrico de Kruskal-Wallis. Las bandas afectadas fueron determinadas utilizando la fórmula de Brogger y la correlación con la localización de puntos específicos del genoma se realizó con el Test de Proporciones. El análisis de asociaciones mostró un aumento significativo del porcentaje de TAS en las tres patologías (10,00il,06 en CU; 10,00il ,52 en EC y 10,00i2,28 en PC) respecto de los controles (l,04:t0,22) (p<0,00l), así como del porcentaje de células con TAS: 8,72i0,79; 9,67i1,45; 8,87i2,03 y 0,96i0,18, en CU, EC, PC y controles, respectivamente (p<0,001), mostrando en todos los casos un predominio de asociaciones de simple cromátide. Los cromosomas más involucrados en TAS fueron: 10, 11 (6,12%) y 16 (5,71%) en CU; 5,7 y 17 (10%) en EC y 9 (9,38%), 16 (6,88%) y 20 (8,75%) en PC. La evaluación de AC presentó un incremento significativo en los pacientes tanto para el porcentaje de AC (5,48i0,70; 3,67zt1,45 y 3,88i1,00), como para el porcentaje de células con AC (4,80i0,62; 3,67i1,45 y 3,50zt0,82) en CU, EC y PC, respectivamente, comparado con los controles (0,66i0,24) (p<0,001). En CU, este análisis permitió detectar 14 bandas estadísticamente dañadas, de las cuales 78,57% coincidieron con la localización de sitios frágiles (p<0,001) y 85,71% presentaron una correlación positiva con puntos de ruptura asociados a cáncer (p<0,001), 25% de los cuales correspondían a alteraciones descriptas en carcinoma colorrectal. Asimismo, 57,14% de las bandas coincidieron con regiones donde mapean oncogenes y 35,71% de los puntos co-localízaron con genes supresores de tumor y/o regiones con pérdida de heterocigosidad, encontrándose el 80% relacionados con el desarrollo de cáncer de colon. E1 análisis de lCH mostró valores estadísticamente aumentados en CU (7,90i0,25) y PC (8,33i0,70), comparado con los controles (6,93i0,22) (p<0,006 y p<0,03, respectivamente), mientras que EC no mostró diferencias significativas (7,27i0,28). El ciclo celular no presentó modificaciones respecto de los controles, siendo los índices de replicación (IR) de l,80:t0,07; 1,85i0,15; 1,81i0,06 y 1,87:k0,05 para CU, EC, PC y controles, respectivamente. Estos resultados muestran la presencia de inestabilidad cromosómica en las tres patologías estudiadas, evidenciada por el aumento de todos los parámetros analizados, sugiriendo que la misma podría jugar un rol importante en el desarrollo de las neoplasias asociadas a estas entidades. Los hallazgos expuestos fundamentan la relevancia de este tipo de estudio en patologías con predisposición al desarrollo neoplásico, contribuyendo a una mejor caracterización biológica de las mismas.Fil: Cottliar, Alejandra Silvina Haydeé. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Molecular analysis of telomeric regions in lymphoid malignancies

Los telómeros son estructuras esenciales para el mantenimiento de la integridad cromosómica y la capacidad replicativa de la célula. La reducción de la longitud telomérica está asociada con cambios genómicos relacionados al proceso tumoral. En este trabajo se efectuó la caracterización molecular de la longitud telomérica mediante el estudio de los fragmentos de restricción terminal (TRFs), en Mieloma Múltiple (MM), Linfoma no-Hodgkin (LNH) y Enfermedad Celíaca (EC), patología con predisposición al desarrollo de linfomas malignos. En MM se observó una disminución de la longitud telomérica respecto de controles, detectándose una correlación negativa con el porcentaje de células plasmáticas en médula ósea y asociación con cariotipos anormales, postulándose a los TRFs como marcadores tumorales. En LNH se observó acortamiento telomérico en linfomas foliculares y B difusos a células grandes, indicando su participación en la progresión tumoral y sustentando diferentes mecanismos patogénicos para estas patologías. En EC se apreció una disminución de la longitud telomérica tejido-específica en biopsias intestinales, sugiriendo un rol relevante de este parámetro en la predisposición al desarrollo neoplásico de esta entidad. Los hallazgos de este estudio sustentan la asociación entre acortamiento telomérico e incremento de la inestabilidad cromosómica, factores que combinados con la desregulación de la proliferación celular podrían promover el desarrollo y la progresión neoplásica.Telomeres are essential structures critical for maintaining chromosomal integrity and stability and cell surveillance. Telomere shortening is associated to genomic changes related to carcinogenesis. In this work we studied telomere length by analyzing terminal restriction fragments (TRF) in multiple myeloma (MM), non-Hodgkin lymphoma (NHL) and celiac disease (CD), pathology prone to lymphoma development. In MM, we observed telomere reduction respect to controls. A strong correlation of telomere length values with bone marrow plasma cell infiltration and an association with abnormal karyotypes were found, suggesting TRFs as tumor markers. In NHL, telomere shortening was observed in follicular and diffuse large B-cell lymphoma, indicating the participation of telomere shortening in tumor progression and supporting the existence of diverse pathogenic mechanisms involved in the origin of these different lymphoma subtypes. In CD, TRF analysis showed a tissue-specific significant telomere shortening in small intestinal biopsies, determining an important role of telomere length in cancer predisposition observed in this disorder. Our findings support the association between telomere shortening and an increased chromosome instability, both factors combined with cell proliferation disregulation would promote the cancer development and neoplastic progression.Fil: Cottliar, Alejandra Silvina Haydeé. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina