Toll like receptors gene expression of human keratinocytes cultured of severe burn injury

PURPOSE: To evaluate the expression profile of genes related to Toll Like Receptors (TLR) pathways of human Primary Epidermal keratinocytes of patients with severe burns.METHODS: After obtaining viable fragments of skin with and without burning, culture hKEP was initiated by the enzymatic method using Dispase (Sigma-Aldrich). These cells were treated with Trizol(r) (Life Technologies) for extraction of total RNA. This was quantified and analyzed for purity for obtaining cDNA for the analysis of gene expression using specific TLR pathways PCR Arrays plates (SA Biosciences).RESULTS: After the analysis of gene expression we found that 21% of these genes were differentially expressed, of which 100% were repressed or hyporegulated. Among these, the following genes (fold decrease): HSPA1A (-58), HRAS (-36), MAP2K3 (-23), TOLLIP (-23), RELA (-18), FOS (-16), and TLR1 (-6.0).CONCLUSIONS: This study contributes to the understanding of the molecular mechanisms related to TLR pathways and underlying wound infection caused by the burn. Furthermore, it may provide new strategies to restore normal expression of these genes and thereby change the healing process and improve clinical outcome.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)UNIFESP-EPM Department of SurgeryUNIFESP-EPMUNIFESPUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Escola Paulista de Medicina (EPM) Department of SurgeryUNIFESP, EPM, Department of SurgeryUNIFESP-EPMUNIFESP, EPM, Department of SurgeryFAPESP: 2011/12945-4FAPESP: 2013/10.905-0SciEL

Impact of urinary incontinence and erectile dysfunction on quality of life in general and specifies after radical prostatectomy

Objetivo: Avaliar o impacto da prostatectomia radical sobre a qualidade de vida. Metodo: Foram acompanhados por seis meses apos a prostatectomia radical, atraves de questionarios de sintomas urinarios ICIQ-SF (International Consultation on Incontinence Questionnaire - Short Form), I-PSS (International Prostatic Symptom Score) e OAB-q (Overactive Bladder), para avaliar qualidade de vida utilizamos o WHOQOL-Bref (World Health Organization for Quality of life) e o QS-M (Quociente Sexual Masculino), para avaliar a sua sexualidade. Os questionarios aplicados foram no pre-operatorio, um, tres e seis meses de pos-operatorio. Resultados: Em relacao aos escores OAB-q, I-PSS e WHOQOL-Bref (dominios fisico, psicologico, ambiente, geral, Questao 1 e Questao 2), os pacientes pioraram apos um mes de cirurgia, quando comparados com o pre-operatorio, porem recuperaram-se ao final de seis meses, com excecao do dominio social do WHOQOL-Bref, do ICIQ-SF e do QS-M cujos valores dos escores permaneceram piores que a avaliacao pre-operatoria. Dentre os pacientes que apresentavam atividade sexual no periodo pre-operatorio 83% apresentavam disfuncao eretil aos seis meses de pos-operatorio. Conclusao: A incontinencia urinaria afeta temporariamente a qualidade de vida quando medida com o WHOQOL-Bref, havendo recuperacao gradativa aos seis meses de pos-operatorio. A continencia urinaria e a funcao eretil pioram apos a PR em todos os periodos avaliadosBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Toll-Like receptors gene expression of human keratinocytes cultured of large burn injury

INTRODUÇÃO: A queimadura extensa pode evoluir com infecção grave e sepse com aumento da morbidade e mortalidade. Ocorre um estado contínuo de inflamação e o nível sérico de citocinas é elevado. Os receptores do tipo Toll-Like são importantes receptores de células do sistema imune inato que reconhecem antígenos. Portanto, existe a necessidade da obtenção de perfil da expressão gênica da pele em queimaduras extensas para análise inicial. OBJETIVO: Avaliar o perfil de expressão de genes relacionados às vias de receptores Toll-Like em amostras de cultura primária de queratinócitos humanos epidérmicos de pacientes com queimadura grave. MÉTODOS: Após a obtenção de fragmentos de pele viáveis com e sem queimadura, a cultura de queratinócitos foi iniciada pelo método enzimático utilizando dispase (Sigma-Aldrich) e Tripsina (Sigma-Aldrich). Após o estabelecimento da linhagem celular, estas células foram tratadas com QIAzol Reagent® (Qiagen) para a extração de RNA total. Este foi quantificado e analisado quanto à pureza para se obter cDNA para a análise da expressão de 84 genes específico de vias TLR de placas de PCR Arrays (SA Biosciences). RESULTADOS: Após a análise da expressão dos genes verificou-se que 21% destes genes estavam expressos diferencialmente, dos quais 100% foram reprimidos ou hiporregulados. Dentre estes, os seguintes genes (vezes de diminuição): HSPA1A (-58), HRAS (-36), MAP2K3 (-23), TOLLIP (-23), RELA (-18), FOS (-16), e TLR1 (-6,0). CONCLUSÃO: O perfil da expressão gênica da pele de pacientes com grande queimadura mostrou 21% de genes alterados, destes 100% apresentaram-se hiporregulados.INTRODUCTION: Large burn injury can progress to severe infection and sepsis with increased morbidity and mortality. There is a continuous state of inflammation and serum levels of cytokines are high. The Toll-like receptors are important receptors of the innate immune system that recognize antigens. Therefore, a need exists for obtaining the gene expression profile of the skin of extensive burns for initial analysis. PURPOSE: To evaluate the expression profile of genes related to Toll Like Receptors (TLR) pathways of human primary epidermal keratinocytes (hKEp) of patients with severe burns. METHODS: After obtaining viable fragments of skin with and without burn injury, culture hKEp was initiated by the enzymatic method using Dispase (Sigma-Aldrich) and Trypsin (Sigma-Aldrich). These cells were treated with Trizol® (Life Technologies) for extraction of total RNA. This was quantified and analyzed for purity for obtaining cDNA for the analysis of gene expression using specific TLR pathways PCR Arrays plates (SA Biosciences). RESULTS: After the analysis of gene expression we found that 21% of these genes were differentially expressed, of which 100% were repressed or hyporegulated. Among these, the following genes (fold decrease): HSPA1A (-58), HRAS (-36), MAP2K3 (-23), TOLLIP (-23), RELA (-18), FOS (-16), and TLR1 (-6.0). CONCLUSION: The gene expression profile of skin of patients with large burn injury showed 21% altered genes, and 100% of them were downregulated