Development of three-dimensional cell culture spheroid model for non-small-cell lung carcinoma cell line nci-h460 exposed to cisplatin / Desenvolvimento de modelo de cultura celular tridimensional para a linhagem celular de carcinoma de pulmão de não-pequenas células nci-h460 expostas á cisplatina

The three-dimensional culture models have been developed to promote better simulation of in vivo conditions of cellular interactions and phenotypic expressions. Since each cell line behaves differently and not all aggregate three-dimensionally, the objectives of this study were to standardize the conditions for cultivation spheroids produced from the human non-smal-cell lung cancer cell line NCI-H460, and evaluate the effects of cisplatin in this model. We investigated the best cell density for the formation of spheroids and their growth time in culture conditions. For this, spheroids were treated with different concentrations of cisplatin. The analysis was performed by measuring the diameter of the spheroids before treatment and measured 48 h after treatment and then every 3 days. The standard cell density conditions obtained was 10 x 104 cells. Spheroids were collected from the 7th day and isolated in a non-adherent matrix well (covered with 2% agar and culture medium), remaining viable until the 17th day. From the 8th day of isolated culture, the cisplatin promoted a reduction in the growth of spheroids dependent on the concentration used. Thus, it was concluded that it was possible to standardize the effective methodology for the formation and maintenance of spheroids from this cell line, as well as cisplatin inhibited the growth of the spheroids, suggesting its cytotoxic effect also cultures in three-dimensional model

ESTUDO IN SILICO DA INTERAÇÃO DO Δ9-TETRAHIDROCANABINOL COM PROCESSOS BIOLÓGICOS EM Drosophila melanogaster E Homo sapiens

Cannabis sativa L. (C. sativa) é uma espécie do gênero Cannabis, pertencente à família Cannabaceae. Possui uma grande quantidade de substâncias ativas chamadas canabinoides (CBs), dentre eles destacamos o Δ9-tetrahidrocanabinol (THC), o responsável pelos efeitos psicoativos atribuídos à C. sativa. Drosophila melanogaster é utilizada como organismo modelo para o estudo de processos moleculares, celulares e de desenvolvimento de doenças já que, 75% de seus genes possuem ortólogos em humanos, o que vem contribuindo ao longo dos anos para a melhor compreensão dos mecanismos que são conservados em seres humanos. Em razão disso, utilizamos a biologia de sistemas, uma ferramenta de bioinformática, para realizar uma caracterização inicial da forma como o THC poderia interagir com os sistemas biológicos da mosca da fruta e seres humanos. Redes de proteínas e THC foram fusionadas utilizando STITCH 5.0, STRING 11.0 e o software Cytoscape 3.5. Embora D. melanogaster não possua receptores CB1 e CB2, que são receptores canabinoides bem estabelecidos em humanos, foram identificados 112 nós e 888 conectores para o D. melanogaster. Uma rede composta por 136 nós e 2447 conectores para Homo sapiens também foi criada e, quando comparados os resultados de centralidades de ambas as redes, observamos que as seis proteínas, com maior valor dentro da rede (Hub-bottleneck), eram ortólogas entre os dois organismos de estudo. Desta maneira, os resultados mostram que o THC possui capacidade de interagir com proteínas relacionadas à receptores acoplados à proteína G, proteínas ribossomais e ainda ubiquitina tanto em D. melanogaster quanto em H. sapiens. Estes resultados apontam para a possibilidade de utilizar D. melanogaster como organismo experimental em estudos que envolvem a avaliação da toxicidade e genotoxicidade de canabinoides, como o THC, com um bom nível de extrapolação dos resultados para humanos

Combinação de celecoxibe com 5-fluorouracil induz apoptose em linhagem celular de adenocarcinoma colorretal HT-29

Este trabalho se propôs a analisar o efeito da combinação do 5-fluorouracil (5-FU) e Celeboxibe (CLX), na linhagem celular de carcinoma humano HT-29. As células foram expostas a tratamentos isolados com 5-FU por 48h e combinados com CLX por 24 h + 5-FU por 24 h. Para determinar o efeito sobre citotoxicidade foi realizado o ensaio de SRB; para verificar a distribuição das células no ciclo celular foi realizado citometria de fluxo e para atividade de genes relacionados à apoptose (BIRC-5) e à autofagia (BENC-1) ensaio de expressão gênica. Nossos resultados demonstraram que a linhagem HT-29 é sensível ao 5-FU através do aumento da morte celular e, quando analisado o tratamento combinado, as células tiveram sua sensibilidade ao quimioterápico aumentada. Dados obtidos nos ensaios do ciclo celular e expressão gênica corroboram com os achados, uma vez que genes associados aos processos de morte celular apresentam-se alterados, confirmando ativação de processos de morte, mais provavelmente apoptose

Paracetamol induz radiossensibilidade na linhagem celular derivada de glioma humano U-87

Neste estudo avaliamos o potencial radiossensibilizante do paracetamol e a participação da enzima Glutationa Peroxidase (GPx) na linhagem celular de glioma humano U-87. Após radiação com 5 Gy, a linhagem U-87 apresentou redução na fração de sobrevivência, quando comparada ao controle. A combinação do paracetamol (0,5 mM) com a radiação ionizante (2 Gy) demonstrou redução no número de colônias formadas, quando comparado com a radiação isolada. Após exposição a 2 Gy de radiação, observamos um aumento de 40% na atividade da GPx na linhagem U87. Por outro lado, a exposição ao paracetamol (0,5 mM) não alterou os níveis basais desta enzima. Nossos resultados indicam que o paracetamol aumenta a sensibilidade à radiação na linhagem celular U-87, mas a GPx não está ligada a este efeito