Etude de l’effet mutagène lors d’une colonisation néonatale par une souche de Escherichia coli produisant la colibactine

Escherichia coli (E. coli) est l’une des principales bactéries commensales primo-colonisatrices du tractus intestinal du nouveau-né. Au sein de cette espèce bactérienne ubiquitaire, certaines souches possèdent un îlot génomique pks regroupant les gènes permettant la synthèse d’une génotoxine, la colibactine. Cette toxine induit des cassures double brin de l’ADN in vitro dans des cellules eucaryotes en culture et in vivo dans les cellules intestinales. La période néonatale est une période critique au cours de laquelle l’épithélium intestinal est directement exposé à ces bactéries primo-colonisatrices. Afin d’examiner les conséquences de la colonisation néonatale par des E. coli commensales produisant la colibactine, les objectifs de cette étude ont été (1) de déterminer la fréquence de mutation dans un gène rapporteur mobilisable (cII), intégré dans le génome de cellules eucaryotes infectées par une souche de E. coli porteuse de l’îlot génomique pks; (2) de cartographier dans un modèle de colonisation néonatale les sites de contact bactéries/cellules ainsi que les cellules dont l’ADN a été endommagé. La génération de mutants cII m’a permis de montrer une augmentation significative de la fréquence de mutant chez les cellules infectées par les bactéries pks+, et de constituer une banque de gènes cII mutés dont le séquençage permet de caractériser la nature des mutations induites par la colibactine. Mon travail a également mis en évidence in vivo la distribution spatiale dynamique des dommages à l’ADN, des glandes intestinales vers l’épithélium de surface, en fonction du développement de la muqueuse intestinale. L’ensemble de ce travail pose les bases de l’étude de la mutagenèse résultant de l’acquisition néonatale d’une souche de E. coli produisant la colibactine

Myoclonus and hypercalcemia in a dog with poorly differentiated lymphoproliferative neoplasia.

A 1-year, 8-month-old Rhodesian Ridgeback was presented with obtundation, ambulatory tetraparesis, and myoclonus. Initial clinical findings included ionized hypercalcemia with an apparent marked increase in parathyroid hormone, thrombocytopenia, and nonregenerative anemia. Low numbers of circulating atypical cells were noted on blood film evaluation. Brain magnetic resonance imaging identified an extra-axial contrast enhancing subtentorial lesion, and cerebrospinal fluid (CSF) analysis documented a marked atypical lymphocytic pleocytosis. Flow cytometry performed on the CSF demonstrated expression of only CD45, CD90, and MHC class II, with Pax5 positivity on subsequent immunohistochemistry. The final diagnosis was of B-cell lymphoblastic lymphoma or acute leukemia, given the distribution of disease and the presence of significant bone marrow infiltration alongside an aggressive clinical course. The unusual immunophenotype of the neoplastic cells and hypercalcemia presented antemortem diagnostic challenges, highlighting the need for a multidisciplinary approach and caution in the interpretation of clinical abnormalities in cases with multiple comorbidities

Etude de l effet mutagène lors d une colonisation néonatale par une souche de Escherichia coli produisant la colibactine

Escherichia coli (E. coli) est l une des principales bactéries commensales primo-colonisatrices du tractus intestinal du nouveau-né. Au sein de cette espèce bactérienne ubiquitaire, certaines souches possèdent un îlot génomique pks regroupant les gènes permettant la synthèse d une génotoxine, la colibactine. Cette toxine induit des cassures double brin de l ADN in vitro dans des cellules eucaryotes en culture et in vivo dans les cellules intestinales. La période néonatale est une période critique au cours de laquelle l épithélium intestinal est directement exposé à ces bactéries primo-colonisatrices. Afin d examiner les conséquences de la colonisation néonatale par des E. coli commensales produisant la colibactine, les objectifs de cette étude ont été (1) de déterminer la fréquence de mutation dans un gène rapporteur mobilisable (cII), intégré dans le génome de cellules eucaryotes infectées par une souche de E. coli porteuse de l îlot génomique pks; (2) de cartographier dans un modèle de colonisation néonatale les sites de contact bactéries/cellules ainsi que les cellules dont l ADN a été endommagé. La génération de mutants cII m a permis de montrer une augmentation significative de la fréquence de mutant chez les cellules infectées par les bactéries pks+, et de constituer une banque de gènes cII mutés dont le séquençage permet de caractériser la nature des mutations induites par la colibactine. Mon travail a également mis en évidence in vivo la distribution spatiale dynamique des dommages à l ADN, des glandes intestinales vers l épithélium de surface, en fonction du développement de la muqueuse intestinale. L ensemble de ce travail pose les bases de l étude de la mutagenèse résultant de l acquisition néonatale d une souche de E. coli produisant la colibactine.TOULOUSE-EN Vétérinaire (315552301) / SudocTOULOUSE3-BU Santé-Centrale (315552105) / SudocSudocFranceF

Pathology in Practice.

An approximately 18-month-old Beltex ram was found dead in the field in which it was kept. The ram had a previous clinical history of a breathing problem, but no details regarding clinical examination or treatment were provided at the time of submission of the carcass

Hepatocyte expression and prognostic importance of senescence marker p21 in liver histopathology samples from dogs with chronic hepatitis.

BACKGROUND: Chronic hepatitis (CH) occurs commonly in dogs but is associated with a variable and largely unpredictable prognosis. p21, a cell-cycle inhibitor and marker of cellular senescence, is upregulated in human liver disease and is a better prognostic marker than histological or clinical scoring systems. OBJECTIVE: To quantify hepatocyte p21 immunopositivity in histopathology samples from dogs with CH and determine its association with outcome. ANIMALS: Twenty-six client-owned dogs with histologically confirmed CH, and 15 dogs with normal liver histology. METHODS: Medical records and liver histopathology samples were retrospectively reviewed to identify cases of CH. Immunohistochemistry for p21 was performed on all samples and hepatocyte immunopositivity was visually quantified. Relationships between p21 and dog age and dog survival time were statistically evaluated. RESULTS: Hepatocyte p21 immunopositivity in dogs with CH was high (median percentage of positive hepatocytes: 90%, range: 20%-98%) and exceeded 70% in 23/26 cases with no association with age. In control dogs, p21 immunopositivity was low (≤15% positive hepatocytes in 12/15 cases) and was positively correlated with age (rs  = 0.63; P = .011). Dogs with p21 immunopositivity exceeding 91.8% (upper tercile) had significantly shorter survival compared to dogs with less than 88.9% immunopositivity (lowest tercile; 218 versus 874 days, P = .006). Increasing hepatocyte p21 immunopositivity was significantly negatively associated with survival time (HR 4.12; 95% CI 1.34-12.63; P = .013). CONCLUSIONS AND CLINICAL IMPORTANCE: Marked p21 immunopositivity in dogs with CH might be indicative of widespread hepatocellular senescence. A significant association with survival time also suggests a potential value for p21 quantification in determining prognosis.Petplan Charitable Trust (Grant no 217-263)

The Genotoxin Colibactin Is a Determinant of Virulence in Escherichia coli K1 Experimental Neonatal Systemic Infection.

Escherichia coli strains expressing the K1 capsule are a major cause of sepsis and meningitis in human neonates. The development of these diseases is dependent on the expression of a range of virulence factors, many of which remain uncharacterized. Here, we show that all but 1 of 34 E. coli K1 neonatal isolates carried clbA and clbP, genes contained within the pks pathogenicity island and required for the synthesis of colibactin, a polyketide-peptide genotoxin that causes genomic instability in eukaryotic cells by induction of double-strand breaks in DNA. Inactivation of clbA and clbP in E. coli A192PP, a virulent strain of serotype O18:K1 that colonizes the gastrointestinal tract and translocates to the blood compartment with very high frequency in experimental infection of the neonatal rat, significantly reduced the capacity of A192PP to colonize the gut, engender double-strand breaks in DNA, and cause invasive, lethal disease. Mutation of clbA, which encodes a pleiotropic enzyme also involved in siderophore synthesis, impacted virulence to a greater extent than mutation of clbP, encoding an enzyme specific to colibactin synthesis. Restoration of colibactin gene function by complementation reestablished the fully virulent phenotype. We conclude that colibactin contributes to the capacity of E. coli K1 to colonize the neonatal gastrointestinal tract and to cause invasive disease in the susceptible neonate