Selection of Trichoderma spp. strains for the control of Sclerotinia sclerotiorum in soybean

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro e in vivo, o potencial de isolados de Trichoderma spp.no controle de Sclerotinia sclerotiorum em soja (Glycine max) e identificar molecularmente as estirpes que mais se destacaram. O efeito de 120 isolados de Trichoderma spp. sobre a viabilidade de escleródios de S. sclerotiorum foi avaliado in vitro, por imersão em suspensão de conídios dos antagonistas e plaqueamento em meio de cultura. As estirpes que mais se destacaram foram avaliadas, in vivo, em casa de vegetação, no controle do patógeno em plantas e sementes de soja 'Pintado'. Dos 120 isolados testados in vitro, 22 inibiram em 100% a germinação de escleródios. Em casa de vegetação, cinco estirpes inibiram os efeitos prejudiciais do patógeno na germinação das sementes e duas estirpes proporcionaram aumento de até 67% na massa de matéria seca das plantas. As melhores estirpes foram identificadas como T. koningiopsis (3 estirpes), T. asperelloides (3), T. atroviride (2) e T. virens (1). Trichoderma spp. conseguem proteger plantas de soja 'Pintado' do efeito prejudicial de S. sclerotiorum ao mesmo tempo em que podem promover o crescimento da parte aérea em condições de casa de vegetação.The objective of this work was to evaluate, in vitro and in vivo, the potential of Trichoderma spp. strains to control Sclerotinia sclerotiorum in soybeans (Glycine max) and to perform the molecular identification of the best performing strains. The effect of 120 strains of Trichoderma spp. on the viability of S. sclerotiorum sclerotia was evaluated in vitro through immersion in suspension of conidia from the antagonists and plating in culture medium. The best performing strains were evaluated in vivo, in a greenhouse, for control of the pathogen inoculated on 'Pintado' soybean seeds and plants. Of the 120 strains tested in vitro, 22 strains of Trichoderma spp. caused 100% inhibition of sclerotia germination. In the greenhouse, five strains inhibited the negative effect of the pathogen on seed germination and two strains increased in up to 67% plant dry matter. The best performing strains were identified as T. koningiopsis (3 strains), T. asperelloides (3), T. atroviride (2), and T. virens (1). Trichoderma strains are able to protect soybean plants from the harmful effect of S. sclerotiorum and, at the same time, they can promote the growth of the aerial part in greenhouse conditions

Growth promotion and resistance induction against anthracnose in cucumber using Trichoderma spp.

O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de 60 isolados de Trichoderma e do produto Trichodermil na promoção do crescimento e na indução de resistência sistêmica à antracnose, causada por Colletotrichum lagenarium em pepineiro, além de identificar as espécies dos isolados de Trichoderma spp. efetivas como indutores de resistência. Nos experimentos de promoção de crescimento, os isolados de Trichoderma spp. foram submetidos à inoculação no substrato e, após 21 dias, a massa de matéria seca da parte aérea das plantas foi mensurada. Nos experimentos de indução de resistência, os isolados que promoveram crescimento foram introduzidos no substrato, na base das plantas, sete dias antes da inoculação de C. lagenarium nas folhas. O isolado que apresentou melhor desempenho foi avaliado quanto à redução dos sintomas de antracnose, em aplicações aos 3, 7 ou 14 dias antes da inoculação do patógeno, e quanto à capacidade de aumentar a atividade de peroxidase. Dezenove isolados e o Trichodermil promoveram o crescimento de pepineiro em até 100% e conferiram proteção à antracnose em até 88,39%. O isolado IB 31/06 reduziu a severidade da doença nos intervalos de tempo avaliados. Não foi observado aumento significativo de peroxidase, sete dias após o tratamento com IB 31/06, nas plantas tratadas e infectadas com o patógeno, em comparação às plantas infectadas. O sequenciamento gênico dos dezenove isolados permitiu a identificação de sete espécies distintas de Trichoderma. The objective of this work was to determine the effect of 60 isolates ofTrichoderma and the product Trichodermil on the growth promotion and on the induction of systemic resistance to anthracnose caused byColletotrichum lagenarium in cucumber, and to identify isolates ofTrichoderma spp. effective as resistance inductors. In the assays of growth promotion, the Trichoderma spp. isolates were inoculated in the substrate and, after 21 days, the shoot dry weight of the plants was measured. In the experiments of resistance induction, the isolates which promoted growth were inoculated in the substrate, at the base of the plants, seven days beforeC. lagenarium inoculation in the leaves. The isolate which showed the best performance was evaluated for anthracnose symptom reduction in applications at 3, 7 or 14 days before the pathogen inoculation, and for its ability of increasing the peroxidase activity. Nineteen isolates and Trichodermil promoted cucumber growth up to 100% and conferred plant protection against anthracnose up to 88.39%. The isolate IB 31/06 reduced the disease severity at the evaluated time intervals. No significant peroxidase increase was observed seven days after treatment with IB 31/06, in the plants treated and infected with the pathogen, in comparison to infected plants. Gene sequencing of the 19 isolates allowed for the identification of seven Trichoderma different species

Plant growth promotion of common bean and anthracnose control by Trichoderma spp.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de Trichoderma spp. em promover o crescimento de plantas de feijão e reduzir a severidade da antracnose do feijoeiro (Colletotrichum lindemuthianum), bem como identificar os isolados mais eficientes. Sessenta isolados de Trichoderma spp. foram avaliados quanto à capacidade de promoção do crescimento nas plantas. Os sete isolados que mais se destacaram foram adicionados ao substrato de cultivo e avaliados quanto à redução na severidade da antracnose em plantas de feijão tratadas com conídios de C. lindemuthianum. Os mais eficientes no controle da doença foram identificados por sequenciamento de DNA. O isolado IB 28/07 foi avaliado nas concentrações 0,5, 1, 1,5 e 2% (peso:volume), que reduziram a severidade da doença em 41,51, 55,15, 81,82 e 96,06%, respectivamente. Os isolados mais eficientes de Trichoderma spp. podem proporcionar aumentos superiores a 30% na produção de matéria seca da parte aérea das plantas e reduzir a severidade da doença entre 63 e 98%. Esses isolados foram identificados como pertencentes às espécies Trichoderma harzianum, T. strigosum e T. theobromicola.The objective of this work was to evaluate the ability of Trichoderma spp. to promote growth of common bean plants and to reduce severity of anthracnose (Colletotrichum lindemuthianum), as well as to identify the best performing isolates. Sixty Trichoderma spp. isolates were evaluated as to their capacity to promote growth in common bean. The seven isolates that stood out were added to the culture substrate and assessed for reduction in severity of anthracnose in bean plants treated with C. lindemuthianum conidia. The most efficient isolates in controlling the disease were identified by DNA sequencing. The IB 28/07 isolate was evaluated in the concentrations 0.5, 1, 1.5, and 2% (weight:volume), which reduced disease severity in 41.51, 55.15, 81.82, and 96.06%, respectively. The most efficient Trichoderma spp. isolates can promote increases above 30% in dry matter production and reduce disease severity between 63 and 98%. These isolates were identified as belonging to the species Trichoderma harzianum, T. strigosum, and T. theobromicola

Bioprospecção de isolados de Trichoderma spp. para o controle de Rhizoctonia solani na produção de mudas de pepino

The objective of this work was to select and identify Trichoderma spp. isolates for the control of Rhizoctonia solani (AG-4) damping-off on cucumber (Cucumis sativus L.) seedlings, as well as to evaluate the effects of increasing concentrations and different combinations of the most effi cient isolates in the disease control. The experiments were carried out in a greenhouse with 490 isolates. The disease on cucumber seedlings was evaluated one week after the application of a commercial substrate infested with both antagonist (1%) and pathogen (1%) to the seedlings’ root collar. The twelve isolates that conferred more than 85% of disease reduction were further evaluated in pathogen control (1%) at the concentrations 0.5, 1, 2, 3 and 4%. The effect of combining fi ve of the most promising isolates in disease control was also evaluated. The most effective isolates were identifi ed through the sequencing of the ribosomal internal transcribed spacers (ITS) region. Out of the 490 isolates tested 44 (9%) caused reduction of damping-off. Antagonist concentrations higher than 2% conferred the most effective disease control. Only two combinations of isolates resulted in increased disease control. The most effective isolates were identifi ed as T. hamatum (IB08, IB30, IB60), T. harzianum (IB34, IB35), T. atroviride (IB13), T. spirale (IB16, IB24) and T. asperellum (IB44). Three isolates could not be identifi ed at species level.O objetivo deste trabalho foi selecionar e identifi car isolados de Trichoderma spp. para o controle do tombamento causado por Rhizoctonia solani (AG-4) em plântulas de pepino (Cucumis sativus L.), além de avaliar o efeito de concentrações crescentes e de combinações dos isolados mais efi cientes no controle da doença. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação, com 490 isolados. O tombamento das mudas foi avaliado uma semana após a aplicação à base das plântulas de substrato infestado com antagonista (1%) e patógeno (1%). Os doze isolados que proporcionaram mais de 85% de redução da doença foram testados em concentrações crescentes para o controle do patógeno (1%): 0,5, 1, 2, 3 e 4%. Também foi avaliado o efeito das combinações dos cinco isolados mais promissores. Os isolados mais efetivos foram identifi cados pelo sequenciamento da região espaçadores internos transcritos (ITS) do DNA ribossômico. Dos 490 isolados testados 44 (9%) reduziram o tombamento. As concentrações de antagonistas superiores a 2% foram as mais efetivas no controle da doença. Apenas duas combinações resultaram no aumento do controle da doença. Os isolados mais efetivos foram identifi cados como T. hamatum (IB08, IB30, IB60), T. harzianum (IB34, IB35), T. atroviride (IB13), T. spirale (IB16, IB24) e T. asperellum (IB44). Não foi possível a identifi cação da espécie de três isolados

Selection of antagonics rhizobacterias to Erwinia carotovora and enhanced tomato plants (Lycopersicon esculentum Mill.)

O trabalho teve por objetivo selecionar rizobactérias antagônicas à Erwinia carotovora (Ec) e promotoras de crescimento de plantas de tomate. Isolados com diferentes características morfológicas obtidos d rizoplano de raízes de cenoura foram inicialmente testadas in vitro para a inibição de Ec em meios BDA (batata-dextrose-ágar) para a produção de substâncias antibióticas, e KB (B de King) para a produção de pigmentos fluorescentes (sideróforos). Os resultados obtidos na seleção dos 193 isolados bacterianos, quanto à antibiose in vitro foram assim quantificados: 71 isolados (37% do total) antagonistas à Ec em BDA e 23 (12% do total) em meio KB. A amplitude de variação dos halos de inibição foi de 0,6 1,2 cm em KB. Posteriormente, os 94 isolados selecionados in vitro foram utilizados em testes de antagonismo à Ec em tubérculos comerciais de batata. Observou-se então que, destes isolados, 41 (ou 44% do total) foram capazes de diminuir a severidade do ataque da bactéria, sendo que 7 destes diminuíram de forma significativa a porcentagem de perda de peso dos tubérculos comerciais, em relação ao controle. Em testes para promoção de crescimento de plantas de tomate em condições de casa-de-vegetação, verificou-se que, dos 41 isolados bacterianos testados e selecionados pela inibição de Ec em tubérculo comerciais, 15 apresentaram resultados satisfatórios em 3 testes consecutivos. Foi observado um aumento de crescimento de plantas (em g de peso seco), tanto em solo autoclavado como em não-clavado. Os aumentos na parte aérea das plantas foram até 139% (para o isolado 23) em solo não autoclavado. Também foi observado que os isolados que inibiram de maneira mais efetiva a porcentagem de perda de peso em tubérculos de batatas comerciais foram aqueles que promoveram os maiores crescimentos relativos de plantas em casa-de-vegetação. Todavia, o mesmo, não foi observado em relação ao tamanho do halo de inibição a Ec in vitro. Nos testes de colonização com mutantes antibióticos negativos com dupla marca (resistência à rifampcina e ácido nalidíxico), observou-se que, dos 4 isolados estudados, apenas um permaneceu nas raízes um mês após a emergência das plantas, com uma população em ufc/g de raízes 1,1 X 105, peso fresco, com uma redução significativa em relação ao inóculo inicial. Graficamente, estas reduções estabeleceram curvas muito próximas a uma reta log-normal.This paper had for objective to select bacterial strains with ability to control the severity of Erwinia carotovora (Ec) in commercial potatoes and enhance tomato plants growth in greenhouse conditions. Isolates obtained from the rhizoplane of carrot roots were initially tested in vitro inhibit Ec in PDA (or potato-dextrose-agar) medium, producing antibiotic substances, fluorescent pigments. The results obtained in the selection and KB (or King's B), producing fluorescent pigments. The results obtained in the selection of 193 bacterial isolates, from several sources, for antibiosis in vitro were: 71 isolates (37% of total) antagonistic to Ec in PDA medium and 23 (12% of total) in KB medium. The amplitude of variation of inhibition zone were from 0,6 to 1,7 cm diameters in PDA and from 0,6 to 1,2 cm in KB medium The 94 in vitro selected isolates were used in antagonism tests to Ec in commercial tubers. It was observed that 41 isolates from the whole (or 44%) were capable to diminishing in a significant form the weight-loss the severity of bacterium attack, 7 of them diminishing in a significant form the weight-Ioss percentage of commercial tubers, related to the control. In the enhanced tomato plants growth tests isolates tested and selected by inhibition to Ec in commercial tubers, 15 bacteria have presented satisfactory results in 3 consecutive tests. A plant growth increase was observed (in g, dry weight), as in autoclaved soil as in nonautoclaved. The increases of plants shoot were up to 139% (isolate L4/11) in autoclaved soil and up to 44% (isolate 23) in nonautoclaved soil. It was also observed that the isolates which have most effectively inhibited the commercial tubers were those which have promoted the highest relative enhances in greenhouse; though, the same was not observed in vitro related to the lenght of Ec's inhibition zone. In colonization tests with negative double-market antibiotic mutants (to rifampcin and nalidixic acid), it was observed that, from 4 studied isolates, just one remained on the roots, a month after the plants emergence, with a population of 1,1 x 105 cfu/g of fresh roots, with a significant reduction, related to the initial inoculum. Graphically, these reductions determined curves similar to a log-normal distribution

Selection of antagonics rhizobacterias to Erwinia carotovora and enhanced tomato plants (Lycopersicon esculentum Mill.)

O trabalho teve por objetivo selecionar rizobactérias antagônicas à Erwinia carotovora (Ec) e promotoras de crescimento de plantas de tomate. Isolados com diferentes características morfológicas obtidos d rizoplano de raízes de cenoura foram inicialmente testadas in vitro para a inibição de Ec em meios BDA (batata-dextrose-ágar) para a produção de substâncias antibióticas, e KB (B de King) para a produção de pigmentos fluorescentes (sideróforos). Os resultados obtidos na seleção dos 193 isolados bacterianos, quanto à antibiose in vitro foram assim quantificados: 71 isolados (37% do total) antagonistas à Ec em BDA e 23 (12% do total) em meio KB. A amplitude de variação dos halos de inibição foi de 0,6 1,2 cm em KB. Posteriormente, os 94 isolados selecionados in vitro foram utilizados em testes de antagonismo à Ec em tubérculos comerciais de batata. Observou-se então que, destes isolados, 41 (ou 44% do total) foram capazes de diminuir a severidade do ataque da bactéria, sendo que 7 destes diminuíram de forma significativa a porcentagem de perda de peso dos tubérculos comerciais, em relação ao controle. Em testes para promoção de crescimento de plantas de tomate em condições de casa-de-vegetação, verificou-se que, dos 41 isolados bacterianos testados e selecionados pela inibição de Ec em tubérculo comerciais, 15 apresentaram resultados satisfatórios em 3 testes consecutivos. Foi observado um aumento de crescimento de plantas (em g de peso seco), tanto em solo autoclavado como em não-clavado. Os aumentos na parte aérea das plantas foram até 139% (para o isolado 23) em solo não autoclavado. Também foi observado que os isolados que inibiram de maneira mais efetiva a porcentagem de perda de peso em tubérculos de batatas comerciais foram aqueles que promoveram os maiores crescimentos relativos de plantas em casa-de-vegetação. Todavia, o mesmo, não foi observado em relação ao tamanho do halo de inibição a Ec in vitro. Nos testes de colonização com mutantes antibióticos negativos com dupla marca (resistência à rifampcina e ácido nalidíxico), observou-se que, dos 4 isolados estudados, apenas um permaneceu nas raízes um mês após a emergência das plantas, com uma população em ufc/g de raízes 1,1 X 105, peso fresco, com uma redução significativa em relação ao inóculo inicial. Graficamente, estas reduções estabeleceram curvas muito próximas a uma reta log-normal.This paper had for objective to select bacterial strains with ability to control the severity of Erwinia carotovora (Ec) in commercial potatoes and enhance tomato plants growth in greenhouse conditions. Isolates obtained from the rhizoplane of carrot roots were initially tested in vitro inhibit Ec in PDA (or potato-dextrose-agar) medium, producing antibiotic substances, fluorescent pigments. The results obtained in the selection and KB (or King's B), producing fluorescent pigments. The results obtained in the selection of 193 bacterial isolates, from several sources, for antibiosis in vitro were: 71 isolates (37% of total) antagonistic to Ec in PDA medium and 23 (12% of total) in KB medium. The amplitude of variation of inhibition zone were from 0,6 to 1,7 cm diameters in PDA and from 0,6 to 1,2 cm in KB medium The 94 in vitro selected isolates were used in antagonism tests to Ec in commercial tubers. It was observed that 41 isolates from the whole (or 44%) were capable to diminishing in a significant form the weight-loss the severity of bacterium attack, 7 of them diminishing in a significant form the weight-Ioss percentage of commercial tubers, related to the control. In the enhanced tomato plants growth tests isolates tested and selected by inhibition to Ec in commercial tubers, 15 bacteria have presented satisfactory results in 3 consecutive tests. A plant growth increase was observed (in g, dry weight), as in autoclaved soil as in nonautoclaved. The increases of plants shoot were up to 139% (isolate L4/11) in autoclaved soil and up to 44% (isolate 23) in nonautoclaved soil. It was also observed that the isolates which have most effectively inhibited the commercial tubers were those which have promoted the highest relative enhances in greenhouse; though, the same was not observed in vitro related to the lenght of Ec's inhibition zone. In colonization tests with negative double-market antibiotic mutants (to rifampcin and nalidixic acid), it was observed that, from 4 studied isolates, just one remained on the roots, a month after the plants emergence, with a population of 1,1 x 105 cfu/g of fresh roots, with a significant reduction, related to the initial inoculum. Graphically, these reductions determined curves similar to a log-normal distribution

Promoção de crescimento e indução de resistência à antracnose por Trichoderma spp. em pepineiro

O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de 60 isolados de Trichoderma e do produto Trichodermil na promoção do crescimento e na indução de resistência sistêmica à antracnose, causada por Colletotrichum lagenarium em pepineiro, além de identificar as espécies dos isolados de Trichoderma spp. efetivas como indutores de resistência. Nos experimentos de promoção de crescimento, os isolados de Trichoderma spp. foram submetidos à inoculação no substrato e, após 21 dias, a massa de matéria seca da parte aérea das plantas foi mensurada. Nos experimentos de indução de resistência, os isolados que promoveram crescimento foram introduzidos no substrato, na base das plantas, sete dias antes da inoculação de C. lagenarium nas folhas. O isolado que apresentou melhor desempenho foi avaliado quanto à redução dos sintomas de antracnose, em aplicações aos 3, 7 ou 14 dias antes da inoculação do patógeno, e quanto à capacidade de aumentar a atividade de peroxidase. Dezenove isolados e o Trichodermil promoveram o crescimento de pepineiro em até 100% e conferiram proteção à antracnose em até 88,39%. O isolado IB 31/06 reduziu a severidade da doença nos intervalos de tempo avaliados. Não foi observado aumento significativo de peroxidase, sete dias após o tratamento com IB 31/06, nas plantas tratadas e infectadas com o patógeno, em comparação às plantas infectadas. O sequenciamento gênico dos dezenove isolados permitiu a identificação de sete espécies distintas de Trichoderma