Interacciones de antibióticos sobre Pseudomonas aeruginosa

El presente trabajo trata de abordar los siguientes aspectos: a) El estudio de la sensibilidad de 100 cepas de Pseudomonas aeruginosa frente a seis antibióticos betalactámicos (imipenema, cefotaxima, ceftazidima, moxalactam, cefoperazona, azlocilina) y tres aminoglicósidos (sisomicina, amicacina, gentamicina), mediante el cálculo de la concentración mínima inhibitoria (CMI). b) Estudio de posibles interacciones entre los antibióticos betalactámicos y aminoglicósidos señalados en el apartado anterior sobre Pseudomonas aeruginosa en medio de cultivo sólido. Mediante el cálculo del índice FIC se determinarán posibles efectos “sinérgicos”, de “adición”, “indiferentes”, “antagónicos” ó “favorables” de los mismos. c) Elaboración y estudio de las curvas de muerte en medio líquido de tres cepas de Pseudomonas aeruginosa frente a dos betalactámicos (cefotaxima, ceftazidima) y tres aminoglicósidos (sisomicina, amicacina y gentamicina) utilizados en concentraciones subinhibitorias ó inhibitorias. La elección de las concentraciones a utilizar vendrá determinada por el comportamiento que tengan previamente en el estudio señalado en el apartado b) con la técnica de dilución en cuadrado, en medio de cultivo sólido. Tomando muestras a las 0, 1, 2, 4, 8 y 24 horas valoraremos los siguientes aspectos: Las modificaciones en la población bacteriana; las variaciones en la sensibilidad y resistencia inicial del microorganismo; la turbidez y el pH del medio de cultivo y las variaciones en las concentraciones de los antibióticos utilizados. La valoración de las modificaciones en la población bactriana se hará estudiando las variaciones a lo largo del tiempo del número de colonias viables, los tipos morfológicos de colonias que aparezcan y las variaciones morfológicas de las células bacterianas, mediante técnicas de tinción. Se estudiará la evolución de la sensibilidad de las cepas a lo largo del tiempo para comprobar si se producen variaciones de las CMI iniciales en presencia de los antibióticos solos y en combinación. Se valorarán las modificaciones de la turbidez del medio de cultivo líquido comparándolo con el número de bacterias viables. Se estudiarán las posibles variaciones en el pH del medio de cultivo liquido ya que éstas pueden suponer cambios en la actividad de los antibióticos. Se valorarán igualmente las variaciones de las concentraciones de antibióticos a lo largo del tiempo mediante cromatografía líquida de alta presión, único método capaz de detectar concentraciones de dos antibióticos en combinación. La información obtenida en la última pare nos permitirá comprender de una forma dinámica la interacción de los antibióticos y encontrar posibles explicaciones al resultado final. Basados en este estudio se podrán sugerir nuevas pautas terapéuticas en las infecciones causadas por Pseudomonas aeruginosa que por la gravedad que suelen presentar, nos parecen del mayor interés. CONCLUSIONES 1. La valoración de la CMI muestra que los antibióticos más activos de todos los estudiados son la imipenema y la ceftazidima. 2. Con la técnica de dilución en cuadrado se observó que: El mayor efecto sinérgico se produjo con la combinación de amicacina más moxalactam. El mayor efecto de adición con la combinación gentamicina más imipenema. El mayor efecto antagónico con la combinación gentamicina más cefoperazona, y la interacción más favorable fue sisomicina más cefoperazona. 3. El estudio de las interacciones entre antibióticos aminoglicósidos y betalactámicos, muestran resultados discrepantes, utilizando la técnica de dilución en cuadrado, en relación con los obtenidos en las curvas de muerte. 4. Mediante el estudio de la curva de muerte las interacciones son distintas según que el tiempo elegido para la valoración fueran las 4 ó las 24 horas. El gran número de interacciones indeterminadas a las 4 horas permite afirmar que la valoración de las interacciones mediante la curva de muerte se debe realizar a las 8 ó 24 horas. 5. El estudio realizado a las 24 horas muestra: Efecto sinérgico, de las combinaciones sisomicina más ceftazidima en todas las cepas, y de gentamicina más ceftazidima en dos terceras partes de las cepas estudiadas. Efecto antagónico de las combinaciones de sisomicina más cefotaxima en todas las cepas; de amicacina más ceftazidima en las dos terceras partes de las cepas, y de gentamicina más cefotaxima en dos terceras partes de las cepas estudiadas. Efecto indeterminado, en las combinaciones de amicacina más cefotaxima en todas las cepas; de amicacina más ceftazidima en un tercio de las cepas y de gentamicina mñas cefotaxima en un tercio de las cepas estudiadas. 6. El estudio estadístico de las variaciones del número de UFC valorando la interacción antibiótico-tiempo, nos parece un buen método para cuantificar los efectos bactericidas de antibióticos solos o en combinación. 7. Según este estudio la amicacina y sus combinaciones a las dosis utilizadas, muestran los mayores efectos bactericidas a lo largo de las 24 horas. 8. Las concentraciones subinhibitorias de los antibióticos utilizado no modificaron la morfología de las colonias bacterianas en su cultivo posterior a la exposición de los antibióticos. Tampoco se modificaron los valores de CMI iniciales sobre las bacterias que recrecieron tras exposición a aquellas concentraciones de antibióticos. 9. La acción de los betalactámicos determinó la aparición de esferoplastos desde la segunda hora. Los aminoglicósidos en concentraciones subinhibitorias no alteraron aparentemente la morfología microscópica de Pseudomonas aeruginosa. 10. La turbidez no se muestra buena técnica para medir el grado de crecimiento bacteriano, en cuanto al número de bacterias. 11. Las modificaciones del pH del medio de cultivo fueron muy pequeñas en todas las muestras. No hay datos que permitan afirmar que influyeran en la actividad de los antibióticos. 12. La determinación de las concentraciones de antibióticos, mediante la cromatografía líquida de alta presión se muestra un procedimiento de gran valor en el estudio de los efectos bactericidas de aquellos. 13. Mediante dicha técnica se han obtenido niveles de antibióticos que muestran una relación lineal significativa positiva con el número de bacterias en la mayoría de los ensayos estudiados, sugiriendo que la disminución del nivel de antibióticoss sea en buena parte debida a su fijación sobre la célula bacteriana

Unusual surge of acute hepatitis A cases in 2016 and 2017 in Malaga, southern Spain: characterization and relationship with other concurrent european outbreaks

We aimed to describe the Hepatitis A virus (HAV) cases that arose in Malaga (Spain) in 2016 and 2017 when the European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC) reported several outbreaks among men who have sex with men (MSM). Therefore, we conducted a retrospective study gathering demographic, clinical, and immunological data from the acute HAV patients attending our hospital between March 2016 and December 2017. Additionally, VP1/P2A region was amplified from serum samples, sequenced, and genotyped. We finally performed a phylogenetic analysis, including the HAV strains from the other European outbreaks. A total of 184 HAV cases were reported, with the highest number in March 2017. The cohort mostly comprised Spaniards (81.0%), males (84.8%), and MSM (72.3%), with a median age of 33.0 years (interquartile range (IQR) = 25.0-43.0). Most patients exhibited symptoms. In addition, a successful amplification and sequencing of the VP1/P2A region was performed in 25 out of 106 serum samples (23.6%). All the sequences belonged to the genotype IA, and 20 were phylogenetically related to VRD_521_2016, first described in the United Kingdom (UK). In conclusion, HAV cases emerged in Malaga in 2016 and 2017, showing an epidemic character phylogenetically related to the predominant strain first detected in the UK. Characteristics of the cohort were similar to those from the European outbreaks.This research was funded by Unicaja Foundation

High Prevalence of Sequences Included in Transmission Clusters Within Newly Diagnosed HIV-1 Patients in Southern Spain (2004-2015)

The presence of transmission clusters (TCs) and their epidemiological characteristics in a treatment-naive cohort of HIV-1 patients in southern Spain over a decade (2004-2015) were evaluated. Protease and reverse transcriptase sequences provided by each genotype test were used in the phylogenetic study, performed first by the neighbor-joining method and then confirmed by Bayesian analysis. We collected clinical, immunovirological, and demographic data for all patients included. Our cohort comprised 757 patients, 428 (56.5%) belonging to a TC. Overall, we found 123 TCs, 21 of them comprising five or more individuals and three with ≥10 sequences. Forty-three TCs (35.0%) remained active. The clustered patients were mainly men (92.8%) who had sex with men (MSM) (81.5%), Spanish (80.6%), and young adults (median age at diagnosis of 32.6 years). They had lower percentages of late diagnosis and AIDS cases (42.1% and 13.6%, respectively), whereas the presence of recent seroconverters (31.1%), HIV-1 B subtypes (79.4%), and transmission drug resistance (20.3%) increased within TCs, with regard to not-clustered individuals. Among the TCs of non-B variants, circulating recombinant forms (CRF) were predominant (87.5%), with the highest frequencies for CRF19_cpx (17.0% of non-B subtype sequences in TCs); CRF02_AG (15.9%); and CRF01_AE (9.1%). In conclusion, over half of our cohort was included within a TC. More than a third of TCs found could be considered active transmission events. Belonging to a TC was related to MSM, Spanish origin, recent seroconversion, high prevalence of resistance mutations, and B HIV subtype. Among the non-B genetic forms in TCs, we found a high prevalence of CRF19_cpx, CRF02_AG, and CRF01_AE variants.This work was mainly supported by the National R+D+I Plan (RD16/0025/0032 project); the Institute of Health Carlos III (ISCIII); and the European Regional Development Fund

Clinical, virological and phylogenetic characterization of a multiresistant HIV-1 strain outbreak in naive patients in southern Spain

Background: We describe the characteristics of an HIV-1 strain with six viral reverse transcriptase mutations (D67N, T69N/D, V118I, V179D, T215S and K219Q), which we have called the Malaga strain. This strain was detected in treatment-naive patients from southern Spain. Methods: The study was undertaken at the Virgen de la Victoria Hospital, Malaga, a reference centre for the study of HIV-1 genotype resistance in Andalusia (the 'Costa del Sol'), Spain. Genotypic resistance testing was done in an automated sequencer. Phylogenetic analysis was performed using a 630 bp region of the reverse transcriptase with the mutations mentioned. Results: Between 2007 and 2014, we detected the Malaga strain in 30 treatment-naive patients. All were MSM, seen at five hospitals on the Costa del Sol. In all cases, the HIV-1 was subtype B with viral tropism R5. Phylogenetic analysis based on the reverse transcriptase sequence showed consistent grouping (with a bootstrap value of the common node of 100%) of the isolates that shared the mutation pattern mentioned. This strain has not been detected elsewhere or in previously treated patients. All of the patients treated with first-line combination ART responded. Conclusions: We report a cluster of an HIV-1 strain with multiple resistance mutations that was transmitted over a period of >8 years, affecting 30 naive patients from the same geographical area. The strain was susceptible to first-line combination ART.Partially funded by the RD12/0017/0017 project (Plan Nacional R+D+I) and cofinanced by Instituto de Salud Carlos III-Subdirección General de Evaluación y el Fondo Europeo de Desarrollo Regional

Sífilis e infección por el virus de la inmunodeficiencia humana: una endemia en hombres que tienen sexo con hombres

Objective: to analyse epidemiological, clinical, and analytical features of HIV-infected men who have sex with men (MSM) diagnosed with syphilis in the Infectious Diseases Unit (Hospital Virgen de la Victoria, Málaga, Spain) during 2004-2013. Patients and methods: An observational study was conducted on 196 syphilis episodes in 167 MSM infected with HIV (2004-2013). Epidemiological, clinical, and analytical data were collected. Annual syphilis incidence among HIV-MSM is calculated as the number of syphilis episodes among MSM in one year divided by the number of MSM followed up in that year. Results: Incidence ranged from 1.2% (2007) to 7.8% (2012). There were asymptomatic episodes in 42.8% cases, and an HIV-syphilis coincident diagnosis in 28.5%. Conclusions: The annual incidence of syphilis has increased within HIV infected MSM. One third of the syphilis episodes were simultaneous to HIV diagnosis and near half of them were asymptomatic. Keywords: Epidemiology; Epidemiología; Hombres que tienen sexo con hombres; Human immunodeficiency virus; Infecciones de transmisión sexual; Men who have sex with men; Sexually-transmitted infections; Syphilis; Sífilis; Treponema pallidum; Virus de la inmunodeficiencia humana

Brote epidémico de hepatitis aguda A en el área sanitaria del Hospital Universitario Virgen de la Victoria (HUVV): un cambio en la epidemiología

RESUMEN En el año 2016 se detectó en la provincia de Málaga un brote de hepatitis A en pacientes con características epidemiológicas especiales, con un predominio de sujetos del sexo masculino. Presentamos 51 casos de hepatitis A aguda con una media de edad de 35,7 años, el 90% varones, con un 55% de casos que reconocían haber mantenido relaciones sexuales con otros hombres en los últimos dos meses. La mitad de ellos requirieron ingreso hospitalario por coagulopatía significativa en el momento del diagnóstico, sin evolución a fallo fulminante, ni encefalopatía en ningún caso. Cuatro casos presentaban ascitis al diagnóstico. Este brote se suma a otros dos publicados en Reino Unido y Holanda con un número de casos similar y epidemiológicamente muy parecidos, lo cual refuerza la importancia de la vigilancia epidemiológica y la necesidad de vacunación en esta población de riesgo, así como de campañas informativas a la población para prevenir la enfermedad