El presente trabajo trata de abordar los siguientes aspectos:
a) El estudio de la sensibilidad de 100 cepas de Pseudomonas aeruginosa frente a seis antibióticos betalactámicos (imipenema, cefotaxima, ceftazidima, moxalactam, cefoperazona, azlocilina) y tres aminoglicósidos (sisomicina, amicacina, gentamicina), mediante el cálculo de la concentración mínima inhibitoria (CMI).
b) Estudio de posibles interacciones entre los antibióticos betalactámicos y aminoglicósidos señalados en el apartado anterior sobre Pseudomonas aeruginosa en medio de cultivo sólido. Mediante el cálculo del índice FIC se determinarán posibles efectos “sinérgicos”, de “adición”, “indiferentes”, “antagónicos” ó “favorables” de los mismos.
c) Elaboración y estudio de las curvas de muerte en medio líquido de tres cepas de Pseudomonas aeruginosa frente a dos betalactámicos (cefotaxima, ceftazidima) y tres aminoglicósidos (sisomicina, amicacina y gentamicina) utilizados en concentraciones subinhibitorias ó inhibitorias. La elección de las concentraciones a utilizar vendrá determinada por el comportamiento que tengan previamente en el estudio señalado en el apartado b) con la técnica de dilución en cuadrado, en medio de cultivo sólido. Tomando muestras a las 0, 1, 2, 4, 8 y 24 horas valoraremos los siguientes aspectos: Las modificaciones en la población bacteriana; las variaciones en la sensibilidad y resistencia inicial del microorganismo; la turbidez y el pH del medio de cultivo y las variaciones en las concentraciones de los antibióticos utilizados.
La valoración de las modificaciones en la población bactriana se hará estudiando las variaciones a lo largo del tiempo del número de colonias viables, los tipos morfológicos de colonias que aparezcan y las variaciones morfológicas de las células bacterianas, mediante técnicas de tinción.
Se estudiará la evolución de la sensibilidad de las cepas a lo largo del tiempo para comprobar si se producen variaciones de las CMI iniciales en presencia de los antibióticos solos y en combinación. Se valorarán las modificaciones de la turbidez del medio de cultivo líquido comparándolo con el número de bacterias viables.
Se estudiarán las posibles variaciones en el pH del medio de cultivo liquido ya que éstas pueden suponer cambios en la actividad de los antibióticos.
Se valorarán igualmente las variaciones de las concentraciones de antibióticos a lo largo del tiempo mediante cromatografía líquida de alta presión, único método capaz de detectar concentraciones de dos antibióticos en combinación.
La información obtenida en la última pare nos permitirá comprender de una forma dinámica la interacción de los antibióticos y encontrar posibles explicaciones al resultado final.
Basados en este estudio se podrán sugerir nuevas pautas terapéuticas en las infecciones causadas por Pseudomonas aeruginosa que por la gravedad que suelen presentar, nos parecen del mayor interés.
CONCLUSIONES
1. La valoración de la CMI muestra que los antibióticos más activos de todos los estudiados son la imipenema y la ceftazidima.
2. Con la técnica de dilución en cuadrado se observó que: El mayor efecto sinérgico se produjo con la combinación de amicacina más moxalactam. El mayor efecto de adición con la combinación gentamicina más imipenema. El mayor efecto antagónico con la combinación gentamicina más cefoperazona, y la interacción más favorable fue sisomicina más cefoperazona.
3. El estudio de las interacciones entre antibióticos aminoglicósidos y betalactámicos, muestran resultados discrepantes, utilizando la técnica de dilución en cuadrado, en relación con los obtenidos en las curvas de muerte.
4. Mediante el estudio de la curva de muerte las interacciones son distintas según que el tiempo elegido para la valoración fueran las 4 ó las 24 horas. El gran número de interacciones indeterminadas a las 4 horas permite afirmar que la valoración de las interacciones mediante la curva de muerte se debe realizar a las 8 ó 24 horas.
5. El estudio realizado a las 24 horas muestra: Efecto sinérgico, de las combinaciones sisomicina más ceftazidima en todas las cepas, y de gentamicina más ceftazidima en dos terceras partes de las cepas estudiadas. Efecto antagónico de las combinaciones de sisomicina más cefotaxima en todas las cepas; de amicacina más ceftazidima en las dos terceras partes de las cepas, y de gentamicina más cefotaxima en dos terceras partes de las cepas estudiadas. Efecto indeterminado, en las combinaciones de amicacina más cefotaxima en todas las cepas; de amicacina más ceftazidima en un tercio de las cepas y de gentamicina mñas cefotaxima en un tercio de las cepas estudiadas.
6. El estudio estadístico de las variaciones del número de UFC valorando la interacción antibiótico-tiempo, nos parece un buen método para cuantificar los efectos bactericidas de antibióticos solos o en combinación.
7. Según este estudio la amicacina y sus combinaciones a las dosis utilizadas, muestran los mayores efectos bactericidas a lo largo de las 24 horas.
8. Las concentraciones subinhibitorias de los antibióticos utilizado no modificaron la morfología de las colonias bacterianas en su cultivo posterior a la exposición de los antibióticos. Tampoco se modificaron los valores de CMI iniciales sobre las bacterias que recrecieron tras exposición a aquellas concentraciones de antibióticos.
9. La acción de los betalactámicos determinó la aparición de esferoplastos desde la segunda hora. Los aminoglicósidos en concentraciones subinhibitorias no alteraron aparentemente la morfología microscópica de Pseudomonas aeruginosa.
10. La turbidez no se muestra buena técnica para medir el grado de crecimiento bacteriano, en cuanto al número de bacterias.
11. Las modificaciones del pH del medio de cultivo fueron muy pequeñas en todas las muestras. No hay datos que permitan afirmar que influyeran en la actividad de los antibióticos.
12. La determinación de las concentraciones de antibióticos, mediante la cromatografía líquida de alta presión se muestra un procedimiento de gran valor en el estudio de los efectos bactericidas de aquellos.
13. Mediante dicha técnica se han obtenido niveles de antibióticos que muestran una relación lineal significativa positiva con el número de bacterias en la mayoría de los ensayos estudiados, sugiriendo que la disminución del nivel de antibióticoss sea en buena parte debida a su fijación sobre la célula bacteriana
