Produção de clamidósporos de Pochonia chlamydosporia em diferentes substratos

Clamidósporos são estruturas de sobrevivência do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia. Objetivou-se, com este trabalho, avaliar diferentes substratos, teores de água e formas de inóculo para a produção in vitro de clamidósporos de P. chlamydosporia. Inicialmente, testaram-se os substratos grãos de milho triturado, grãos de arroz e casca de café e os tipos de inóculo meio líquido concentrado ou diluído (1:40) e discos de cultura, colonizados por P. chlamydosporia. Posteriormente, testou-se o substrato grãos de milho triturado suplementado ou não com caldo de batata com os inóculos do fungo nas formas de discos de micélio ou suspensão aquosa. As maiores produções de clamidósporos g-1 de substrato foram obtidas nos substratos grãos de milho triturado e casca de café, e as melhores formas de inóculo foram meio líquido diluído (1:40) e discos de micélio. A suplementação do substrato grãos de milho triturado com caldo de batata não aumentou a produção de clamidósporos do fungo e a melhor forma de inóculo do fungo foi a de discos de micélio. Além disso, testaram-se os substratos canjica, grãos de arroz, casca de café e fibra de coco, umedecidos com diferentes quantidades de água; o substrato casca de café umedecido por diferentes períodos; a casca de café enriquecida ou não com sacarose e farinha de arroz e o substrato grãos de arroz esterilizado no forno micro-ondas com diferentes quantidades de água. Apenas o substrato grãos de arroz, em todas as quantidades de água testadas, apresentou maior produção de clamidósporos. Não houve diferença na produção de clamidósporos no substrato casca de café umedecido por diferentes períodos e apenas quando a casca de café foi enriquecida com farinha de arroz, apresentou maior média de clamidósporos g-1 de substrato. Todos os tratamentos apresentaram grande produção de clamidósporos g-1 quando o substrato utilizado foi o de grãos de arroz tratados no forno de micro-ondas. O melhor meio de cultivo de P. chlamydosporia para a produção de clamidósporos foi o substrato contendo grãos de arroz.Chlamydospores are survival structures of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia. The objective of this study was to evaluate different substrates, different contents of water and kinds of inoculum for the production of Pochonia chlamydosporia chlamydospores. The substrates evaluated were: milled maize, rice grains and coffee husk; all of them were inoculated with disks of culture, concentrated liquid media or diluted liquid media (1:40) colonized by P. chlamydosporia. Besides, the substrates milled maize, supplemented or not with potato broth, and inoculated with fungus disks or aqueous suspension were evaluated. Milled maize and coffee husk were the best substrates for chlamydospores production. The best inoculum kinds were disks of culture and diluted liquid media (1:40) colonized by P. chlamydosporia. The supplementation of milled maize with potato broth did not improve the production of chlamydospores, and the best inoculum form was disks of fungus. Moreover, it was also studied the substrates rice grains, coffee husk and coconut fibers with different rates of water; the substrate coffee husk moistened by different periods; the supplementation of coffee husk with rice flour or dextrose; and the substrate grains of rice sterilized in microwave oven with different rates of water. The substrate grains of rice, in all of the amounts of water tested showed increase in production of chlamydospores. There was no difference in the chlamydospores production of the coffee husk substrate, when moistened by different periods of time and only when it was supplemented with rice flour it showed higher mean of clamydospores per gram of substrate. All treatments evaluated showed higher production of chlamydospores in the substrate grains of rice treated in the microwave oven. The best substrate for the production of chlamydospores of P. chlamydosporia was the rice grains

Rhizobacteria-mediated induction of resistance in tomato against root-knot nematode (Meloidogyne spp.)

O nematóide das galhas, Meloidogyne spp., é responsável por grandes perdas nas produções agrícolas. Bactérias não patogênicas habitantes da rizosfera ou do rizoplano, conhecidas como rizobactérias, têm apresentado um grande potencial para o controle de fitonematóides. Assim, os objetivos gerais desse trabalho foram: avaliar a indução de resistência causada por Rhizobium etli a Meloidoyne javanica em tomateiro; verificar o potencial de biocontrole por R. etli contra M. javanica e M. incognita em diferentes densidades de inóculo dos patógenos em tomateiro; verificar a potencialização da bactéria R. etli para o biocontrole de M. incognita e M. javanica pela adição de húmus ao solo e testar isolados com comprovada eficiência antagonística a outros fitopatógenos para o controle de M. javanica e M. incognita em tomateiro. A rizobactéria R. etli G12 induziu resistência sistêmica a M. javanica em tomateiro crescido em sistema de raiz bipartida sendo que o número de galhas e de ovos por sistema radicular foram reduzidos em 35,3% e 38,8%, respectivamente, mas não houve promoção de crescimento das plantas nas condições avaliadas. Nos experimentos onde se investigou a aplicação de húmus de minhoca ao solo nas concentrações de 0, 50 e 150 g/1,5 kg de solo no ensaio com M. incognita e de 0, 50, 100, 150 e 200g no ensaio com M. javanica, observou-se o aumento da atividade antagonística de R. etli sobre ambos os nematóides, todavia, a utilização de húmus sem a aplicação da rizobactéria não resultou em controle dos nematóides. Rhizobium etli G12 na presença de húmus promoveu o crescimento da plantas, provocando aumento do peso da biomassa verde e da altura das plantas. Verificou-se que a bactéria R. etli é eficiente em reduzir o número de galhas e de ovos de M. javanica e M. incognita tanto em baixa como em alta concentração de inóculo dos nematóides (2.000 e 4.000 ovos). Observou-se que os 27 isolados de rizobactérias testados foram eficientes em controlar M. incognita e M. javanica quando aplicados em microbiolização das sementes, mas não controlaram os nematóides quando aplicados na forma de rega da planta com suspensão de células.Root-knot nematode, Meloidogyne spp., is responsible for great losses in agricultural production. Non-pathogenic bacteria inhabitants of the rhizosphere or rhizoplan, known as rhizobacteria, have shown a great potential for controlling phytonematodes. Thus, the objectives of this work were: to evaluate the induction of resistance in tomato against Meloidoyne javanica mediated by Rhizobium etli; verify the biocontrol potential of R. etli against M. javanica and M. incognita in different pathogen inoculum densities in tomato; verify the potentialization of R. etli through addition of humus to the soil for the biocontrol of M. javanica and M. incognita; and test isolates with proven antagonistic efficiency against other phytopathogens for the control of M. javanica and M. incognita in tomato. Rhizobacteria R. etli G12 induced systemic resistance against M. javanica in tomato grown in split-root system, having the number of gals and eggs per root system reduced in 35.3% and 38.8% respectively, but there was no plant growth promotion in the studied conditions. In the experiments with earthworm humus application to the soil, at concentrations 0, 50 and 150 g/1.5 kg of soil in the assay with M. incognita, and 0, 50, 100, 150 and 200g in the assay with M. javanica, increase in the antagonistic activity of R. etli occurred for both nematodes, however, the use of humus without the application of rhizobacteria did not result in nematode control. Rhizobium etli G12 in presence of humus promoted plant growth, resulting in increase in green biomass weight and plant height. Bacterium R. etli was efficient in reducing the number of gals and eggs of M. javanica and M. incognita in both low and high concentrations of nematode inoculum (2,000 and 4,000 eggs). The 27 isolates of tested rhizobacteria were efficient in controlling M. javanica and M. incognita when applied in seed microbiolization, but it did not control nematodes when applied as plant irrigation with cell suspension.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Control of Meloidogyne javanica by rhizobacteria from antagonistic plants to phytonematode

Uma amostra de solo com alto teor de matéria orgânica foi dividida em frações de 1 kg e estas foram submetidas ao tratamento térmico em autoclave (120°C/1 h), em forno de microondas (4min) ou não tratadas (natural). Raízes de Mucuna aterrima, Crotalaria juncea, Tagetes erecta e Lycopersicon esculentum foram maceradas em liquidificador, peneiradas e os sucos resultantes foram adicionados, separadamente, aos três tipos de solo, aguardando-se 24h a 28°C. Isolados bacterianos foram obtidos por diluição serial como descrito por ROMEIRO (2001), a partir de suspensão aquosa de cada substrato, obtendo-se 78 isolados de rizobactérias. As rizobactérias foram submetidas à seleção massal em que sementes de tomate foram microbiolizadas por imersão em suspensão de propágulos de cada uma das culturas, semeadas e o solo foi infestado com M. javanica. Dos 78 isolados, 56 reduziram o número de galhas e 22 não apresentaram diferença significativa em relação ao controle. Quanto ao número de ovos presentes nas raízes, 26 isolados ocasionaram a redução, 43 não diferiram do controle e nove estimularam a formação. O isolado UFV-6 reduziu o número de galhas em maior proporção (80%) ao passo que o isolado UFV-8 foi o mais eficiente na redução do número de ovos (83%). Ambos os isolados foram provenientes do tratamento térmico de solo em microondas acrescidos do suco de raízes de T. erecta e de M. aterrima, respectivamente. Em contraposição, o isolado UFV-48 foi o mais deletério. Os dez isolados mais promissores foram reavaliados, em recipientes maiores pela inoculação com 1000 ovos de M. javanica por tubete e com 10 repetições. Não foi encontrada diferença no que tange ao número de galhas, mas os isolados UFV-41 e UFV-8 foram os mais eficientes em reduzir o número de ovos (35,3% e 35,0%, respectivamente). Os isolados UFV-29 e UFV-31 permitiram o aumento do número de ovos. Para investigar se o tipo de substrato pode potencializar a capacidade antagonista dos isolados UFV-8 e UFV-57 a M. javanica, comparou-se solo de terriço de mata com solo de barranco, com 15 repetições por tratamento. Os isolados reduziram galhas em 34,9% e 36,4% no solo de terriço e 41,5% e 35,3% em solo de barranco, respectivamente, não apresentando diferença significativa quanto ao tipo de substrato. Avaliou-se também a inibição da eclosão de juvenis in vitro. Os isolados mais eficientes na inibição de eclosão foram UFV-6 e UFV-53 reduzindo a eclosão em 64,9% e 85,7% respectivamente.Five 1-kg samples of organic soil were autoclaved at 120°C for 1 hour, five were microwaved in a 660 watts and 2450Hz microwave oven at full power for 4 minutes, and five were not heat-treated. Roots of Mucuna aterrima, Crotalaria juncea, Tagetes erecta and Lycopersicon esculentum were macerated, separately, in 1000 mL of tap water in a blender at low speed for 30 seconds, sieved, and each of the resulting juices, or just tap water (control treatment) was poured on one of the treated and non-treated soil, inside of a plastic bag (5x3 factorial design). Each plastic bag was closed and vigorously shaken to mix the juice with the soil, and placed in the incubator at 28°C for 24 hours. Seventy eight bacterial isolates were obtained from all the soils by serial dilution. The screen of isolates for the biocontrol of Meloidogyne javanica was made by allowing tomato seeds to soak in water suspension of each bacterial isolate sowing them in substrate inside plastic tubes in the greenhouse, and inoculating the resulting seedlings with nematode eggs. Fifty six isolates promoted reduction of the number of root galls compared to the control treatment (seeds soaked in distilled water). Twenty six isolates promoted reduction of the number of nematode eggs per root system. The isolate UFV-6 was the most effective in reducing the number of galls (80% less than the control), and UFV-8 was the most effective in reducing egg numbers (83% reduction). Both isolates came from microwaved soil, but the UFV-6 was isolated from soil amended with T. erecta root juice and the UFV-8 from soil amended with M. aterrima root juice. The UFV-48, isolated from non-heated soil amended with tomato root juice was the most deleterious, increasing the number of eggs in 134,3% compared to the control treatment. The ten most effective isolates were re-evaluated in larger recipients (400 mL plastic pots) by the inoculation with 1,000 M. javanica eggs per plant (one plant/pot) and 10 replicates per treatment. There was no statistical difference among treatments for the number of galls, but the number of eggs was reduced in 35,3% and 35% by the UFV-41 and the UFV-8, respectively. The isolates UFV-29 and UFV-31 promoted increase in the number of eggs. In order to investigate if the substrate type has influence in the performance of the rhizobacteria, two effective isolates, the UFV-8 and the UFV-57 were tested in a highly organic soil and in a B horizon soil, with 15 replicates. They promoted gall reductions of 34,9% and 36,9% in the organic soil and 41,5% and 35,3% in the B horizon soil, respectively. Both treatments differed from the control, but did not differ from each other. The effect of ten good candidates and ten deleterious ones on the M. javanica egg hatch was evaluated in vitro. The UFV-6 and UFV-53 were the most effective, reducing egg hatch in 64,9% and 85,7%, respectively.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Produção de clamidósporos de Pochonia chlamydosporia em diferentes substratos

Clamidósporos são estruturas de sobrevivência do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia. Objetivou-se, com este trabalho, avaliar diferentes substratos, teores de água e formas de inóculo para a produção in vitro de clamidósporos de P. chlamydosporia. Inicialmente, testaram-se os substratos grãos de milho triturado, grãos de arroz e casca de café e os tipos de inóculo meio líquido concentrado ou diluído (1:40) e discos de cultura, colonizados por P. chlamydosporia. Posteriormente, testou-se o substrato grãos de milho triturado suplementado ou não com caldo de batata com os inóculos do fungo nas formas de discos de micélio ou suspensão aquosa. As maiores produções de clamidósporos g-1 de substrato foram obtidas nos substratos grãos de milho triturado e casca de café, e as melhores formas de inóculo foram meio líquido diluído (1:40) e discos de micélio. A suplementação do substrato grãos de milho triturado com caldo de batata não aumentou a produção de clamidósporos do fungo e a melhor forma de inóculo do fungo foi a de discos de micélio. Além disso, testaram-se os substratos canjica, grãos de arroz, casca de café e fibra de coco, umedecidos com diferentes quantidades de água; o substrato casca de café umedecido por diferentes períodos; a casca de café enriquecida ou não com sacarose e farinha de arroz e o substrato grãos de arroz esterilizado no forno micro-ondas com diferentes quantidades de água. Apenas o substrato grãos de arroz, em todas as quantidades de água testadas, apresentou maior produção de clamidósporos. Não houve diferença na produção de clamidósporos no substrato casca de café umedecido por diferentes períodos e apenas quando a casca de café foi enriquecida com farinha de arroz, apresentou maior média de clamidósporos g-1 de substrato. Todos os tratamentos apresentaram grande produção de clamidósporos g-1 quando o substrato utilizado foi o de grãos de arroz tratados no forno de micro-ondas. O melhor meio de cultivo de P. chlamydosporia para a produção de clamidósporos foi o substrato contendo grãos de arroz.Chlamydospores are survival structures of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia. The objective of this study was to evaluate different substrates, different contents of water and kinds of inoculum for the production of Pochonia chlamydosporia chlamydospores. The substrates evaluated were: milled maize, rice grains and coffee husk; all of them were inoculated with disks of culture, concentrated liquid media or diluted liquid media (1:40) colonized by P. chlamydosporia. Besides, the substrates milled maize, supplemented or not with potato broth, and inoculated with fungus disks or aqueous suspension were evaluated. Milled maize and coffee husk were the best substrates for chlamydospores production. The best inoculum kinds were disks of culture and diluted liquid media (1:40) colonized by P. chlamydosporia. The supplementation of milled maize with potato broth did not improve the production of chlamydospores, and the best inoculum form was disks of fungus. Moreover, it was also studied the substrates rice grains, coffee husk and coconut fibers with different rates of water; the substrate coffee husk moistened by different periods; the supplementation of coffee husk with rice flour or dextrose; and the substrate grains of rice sterilized in microwave oven with different rates of water. The substrate grains of rice, in all of the amounts of water tested showed increase in production of chlamydospores. There was no difference in the chlamydospores production of the coffee husk substrate, when moistened by different periods of time and only when it was supplemented with rice flour it showed higher mean of clamydospores per gram of substrate. All treatments evaluated showed higher production of chlamydospores in the substrate grains of rice treated in the microwave oven. The best substrate for the production of chlamydospores of P. chlamydosporia was the rice grains